花生四烯酸Alox15/12-HETE代谢通路抑制血管钙化的发生

本研究旨在探索血管钙化中花生四烯酸脂氧酶代谢产物的变化及作用。采用5/6肾切除及高磷饲喂的方法建立小鼠血管钙化的模型。在造模6周后,检测主动脉全长血管钙含量,主动脉弓部进行茜素红染色和Von Kossa染色检测钙沉积情况。收集对照血管和钙化血管组织进行花生四烯酸代谢产物的质谱检测,分析脂氧酶通路代谢小分子的变化。通过实时定量PCR方法检测钙化血管脂氧酶的表达改变。使用脂氧酶抑制剂明确脂氧酶代谢通路对血管钙化的影响。结果显示,造模6周后,肾切除组小鼠血管钙含量比假手术组显著升高(P<0.05),茜素红染色和Von Kossa染色显示肾切除小鼠主动脉弓部有明显的钙沉积,表明小鼠血管钙化造模成功。收取造模6周的钙化血管和对照血管,通过液相色谱-质谱(LC-MS)方法检测到9种花生四烯酸脂氧酶代谢产物,多种代谢产物(12-HETE、11-HETE、15-HETE等)的含量在钙化血管中显著升高,其中12-HETE含量最高并且升高最显著。进一步检测钙化血管中产生12-HETE的代谢酶的mRNA水平,发现花生四烯酸脂氧酶15(arachidonate 15-lipoxygenase,Alox15)表达增加。Alox15特异性抑制剂PD146176可显著降低血浆12-HETE水平,促进主动脉弓部的钙沉积、增加血管钙含量。这些结果显示花生四烯酸脂氧酶代谢在钙化血管中活化,Alox15/12-HETE通路可能对血管钙化发挥保护作用。

12(S)-HETE对大鼠系膜细胞和肾小球内p27^(kip1)表达的影响

目的:探讨12-脂氧化酶的活性代谢产物12(S)-HETE对系膜细胞和肾小球内p27kip1表达的影响。方法:12(S)-HETE刺激的系膜细胞和皮下包埋的微型渗透泵长期持续恒速注入12(S)-HETE刺激的大鼠提取的肾小球来观察p27kip1的表达。采用总蛋白量/细胞数的比值作为细胞肥大的评价指标,利用RT-PCR和Western blot方法检测p27kip1mRNA和蛋白的表达。结果:12(S)-HETE刺激能够直接诱导系膜细胞发生肥大。12(S)-HETE刺激的系膜细胞内p27kip1mRNA水平没有变化,而p27kip1蛋白的表达明显增加。然而,在微型渗透泵持续恒速注入12(S)-HETE刺激的大鼠提取的肾小球内p27kip1mRNA水平和蛋白的表达均增加。结论:12(S)-HETE能够通过促进p27kip1的高表达而参与细胞周期的调控,是引起肾小球系膜细胞和肾小球肥大、衰老的重要原因之一。

花生四烯酸代谢产物12-HETE与结核病发生发展的相关性

目的检测结核病患者血浆中12羟基二十烷四烯酸(12-HETE)的含量以及治疗前后其含量的变化,明确12-HETE与结核病发生发展的关系。方法收集结核病患者(TB)、结核病潜伏感染者(LTB)、健康对照(HD)和非结核感染疾病(Non-TB)的血浆标本,同时收集结核病患者组病例经抗结核治疗3个月、6个月、12个月的随访血浆标本,以ELISA检测12-HETE的含量,比较不同组别和抗结核病治疗不同时间12-HETE的含量的差异;收集结核病患者的肺泡灌洗液标本,ELISA检测12-HETE的含量并计数肺泡灌洗液中的中性粒细胞数量。结果 12-HETE在结核患者血浆中为(277.3±23.2)ng/mL,在健康对照血浆中为(233.4±25.1)ng/mL,差异具有统计学意义(P<0.01)。经过抗结核药物治疗3个月、6个月、12个月后,12-HETE的含量逐渐降低,与治疗前的含量相比差异具有统计学意义(P<0.01);在肺泡灌洗液中,12-HETE的含量与中性粒细胞的数量呈显著正相关(r=0.619,P<0.001)。结论结核菌感染诱导的12-HETE代谢失调是结核病发生发展的重要原因。

花生四烯酸12-脂氧化酶-12-氢基二十碳四烯酸-GPR31轴在肝脏再灌注肝缺血损伤中的作用

目的探究花生四烯酸12-脂氧化酶(ALOX12)–12-氢基二十碳四烯酸(HETE)–GPR31轴在肝脏再灌注肝缺血损伤中的作用机制。方法采用8周龄雄性B6.Cg-Tg(MX1-cre)Cgn/J小鼠为研究对象,采用随机数字表法分为三组:空白对照组(n=12)、实验对照组(n=12)和实验组(n=12)。实验组小鼠进行基于胚胎干细胞的基因打靶技术制备基因敲除手术;进行肝血流阻断。肝血流阻断45 min后发送移走血管夹,以恢复血液供应。实验对照组进行肝血流阻断。空白对照组同样进行开腹但并不进行肝血流阻断。采用蛋白质印迹法(Western blotting)检测ALOX12–12-HETE–GPR31轴中基因表达水平。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法分别检测肝脏血清中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)三项炎性因子水平和12-HETE含量。采用原位细胞凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡情况。采用日立7180全自动生化分析仪检测小鼠肝脏血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、AST/ALT。结果肝脏再灌注肝缺血损伤小鼠的ALOX12–12-HETE-GPR31轴中基因转录水平均高于空白对照组(P<0.05),且随着再灌注时间的延长而逐渐增大(P<0.05)。空白对照组和实验组小鼠,在肝血流阻断并再灌注后,随着再灌注时间延长ALOX12–12-HETE–GPR31轴中基因转录水平间差异无统计学意义(P>0.05)。实验对照组小鼠肝脏中IL-1β[(20.53±1.32)ng/L比(10.61±0.83)ng/L]、IL-6[(322.1±11.41)ng/L比(107.34±9.02)ng/L]、TNF-α水平[(31.78±2.42)ng/L比(11.41±0.98)ng/L]、12-HETE含量、肝脏组织细胞凋亡率、ALT[(47.94±1.48)U/L比(24.85±1.50)U/L]、AST[(54.45±3.17)U/L比(30.69±2.08)U/L]和AST/ALT[(1.23±0.04)比(0.69±0.03)]均高于空白对照组(P<0.05)。实验组小鼠各项指标低于实验对照组(P<0.05),且与空白对照组差异无统计学意义(P>0.05)。结论ALOX12表达量的上调会促进12-HETE的积累,特异性敲除ALOX12基因,阻断12-HETE的积累能够有效抑制肝脏再灌注肝缺血损伤。

12-脂氧化酶对大鼠肾小球内ACE和血管紧张素Ⅱ的影响

目的探讨12-脂氧化酶(12-LO)对大鼠肾小球内血管紧张素转换酶(Angiotensin-converting enzyme,ACE)和血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)表达水平的影响。方法用12-LO作用产物12(S)-HETE刺激正常大鼠,观察大鼠肾小球内ACE和AngⅡ的变化。采用ELISA、Western blot和RT-PCR分别检测目标基因mRNA和蛋白的表达。结果 12(S)-HETE使大鼠血糖、24小时尿蛋白略升高,增加肾小球内ACE mRNA和AngⅡ蛋白的表达(P<0.05),但对大鼠体重、肾重/体重无明显影响。结论 12-LO上调大鼠肾小球内ACE和AngⅡ的表达水平。

血小板HHT与12－HETE高效液相色谱测定及初步临床应用

血小板ＨＨＴ与１２－ＨＥＴＥ高效液相色谱测定及初步临床应用陈德春，何杨，王兆钺，阮长耿花生四烯酸（ＡＡ）代谢与许多生理及病理过程密切相关。血小板ＡＡ代谢主要有环氧化酶和１２－脂氧化酶两条途径，１２－羟－十七碳三烯酸（１２－ｈｙｄｒｏｘｙ－ｈｅｐ－ｔａ...

12-羟基二十碳四烯酸与2型糖尿病合并冠心病的相关分析

目的探讨12-羟基二十碳四烯酸(12-HETE)在T2DM合并冠心病(CHD)中的作用。方法测定109例T2DM非CHD患者(T2DM)组,152例T2DM合并CHD患者(CHD)组和103名健康对照者(NC)组的12-HETE水平。结果 T2DM组和CHD组的12-HETE水平高于NC组(P<0.01),且CHD组高于T2DM组(P<0.01)。T2DM组和CHD组的12-HETE均与Gensini积分相关(r=0.430,P=0.001;r=0.371,P=0.001)。结论 12-HETE可能与糖尿病合并CHD的发生有关。

12-羟基二十碳四烯酸在炎症及氧化应激中的研究进展

12-羟基二十碳四烯酸(12-HETE)是花生四烯酸(AA)的代谢产物.12-HETE主要由活化的磷脂酶A2(PLA2)释放AA后经12-脂氧合酶(LOX)催化AA代谢生成.12-HETE在癌症、糖尿病和高血压等多种疾病中扮演着重要角色,参与炎症、氧化应激等病理过程的发生发展,目前研究表明它参与炎症反应过程中的变质、渗出.本文通过对12-HETE在炎症及氧化应激中的作用及其调节策略进行综述,以提高对12-HETE的认识.