补肾活血方“导法”调控5/12-LOX/LXA4/FPR2改善子宫内膜容受性不良大鼠的助孕机制

目的观察补肾活血方“导法”调控肾虚血瘀子宫内膜容受性不良大鼠种植窗期LXA4相关信号轴的助孕机制。方法通过分子对接预测补肾活血方有效组分与脂氧素A4(LipoxinA4,LXA4)合成酶及受体的结合程度;通过羟基脲灌胃+肾上腺素皮下注射构建肾虚血瘀内膜容受性不良复合模型大鼠;随机分为模型组、空白组、补肾活血导法低、中、高组、阳性组6组;各组造模同时予以相应干预方法,连续10 d,并于动情期按照2∶1雌雄合笼,次日晨检发现阴栓脱落或阴道涂片发现阴栓记为1.0 dpc,于6.0 dpc麻醉处死剖出子宫组织;记录每组子宫内膜、胞饮突形态并评分,观察子宫内膜上胰岛素样生长因子结合蛋白1(insulin-like growth factor-binding protein-1,IGFBP-1)、血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)蛋白分布表达和同源盒基因A10(HomeoboxA10,HOXA10)mRNA表达,测定子宫组织匀浆中炎症介质LXA4、合成酶5/12/15-脂氧合酶(Lipoxygenase,LOX)、受体甲酰肽受体2(Formyl Peptide Receptor-2,FPR2)和IGFBP-1、VEGF的蛋白含量。结果与空白组相比,模型组子宫内膜被覆上皮菲薄、腺体较少,与模型组对比;补肾活血方导法低、中、高剂量组、阳性组可下调肾虚血瘀PER模型大鼠种植窗期5-LOX、12-LOX、LXA4及FPR2的表达(P<0.05),提高了子宫内膜容受性标记物IGFBP-1、VEGF蛋白和HOXA10 mRNA表达。结论补肾活血方导法通过调控大鼠种植窗期子宫5/12-LOX/LXA4/FPR2信号通路纠正炎性微环境的平衡,进而改善子宫内膜容受性,促进胚-膜交互提高种植及妊娠成功率。

AGS细胞系中12-LOX的表达及其抑制剂对细胞增殖的影响

目的:探讨人胃癌细胞系AGS中12-脂肪氧化酶(12- lipoxygenase,12-LOX)的表达情况及其抑制剂黄芩甙元(baicalein)对AGS细胞增殖的影响. 方法:AGS在含100 mL/L小牛血清+100 kU/L青、链霉素的RPMI1640培养基中常规培养.用RT-PCR 检测12-LOX在AGS中的表达情况,分别以20,40, 80 μmol/L baicalein干预细胞,用四氮唑蓝(thiazolyl blue tetrazolium bromide,MTT)法在24,48,72 h 测量细胞吸光度,检测baicalein对细胞增殖的影响:用倒置显微镜和电子显微镜进行形态观察;通过脱氧核糖核酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)和吖啶橙-溴化乙锭(AO-EB)染色法检测细胞凋亡指数. 结果:AGS细胞中存在12-LOXmRNA表达;MTT显示baicalein大致呈时间、剂量依赖性抑制细胞增殖(各组间P<0.01,除外40 μmol/L 24 h组与48 h组);AGS细胞存活率最高为82.1%,最低为38.4%.倒置显微镜下可见baicalein干预后的细胞皱缩,部分细胞胞体变圆,脱离贴壁状态,成为悬浮细胞;电镜下可见baicalein干预后的细胞出现了凋亡的特征性改变:核染色质边集及凋亡小体形成;AO-EB染色法显示除0μmol/L组不同时间点细胞凋亡指数无显著差异外(P>0.05),其余各干预组细胞凋亡指数均有显著差异(P<0.01);TUNEL染色法显示48 h时,baicalein 80μmol/L细胞调亡指数为38.37±0.36%而0 μmol/L组细胞调亡指数为7.27±0.21%,两组间存在显著差异(P<0.01). 结论:人胃癌细胞AGS中存在12-LOXmRNA表达,其特异性抑制剂baicalein能抑制AGS细胞增殖并促进其凋亡.

12-LOX在神经胶质瘤中的表达及临床意义

目的:研究12-脂氧合酶(12-lipoxygenase,12-LOX)在神经胶质瘤中的表达及其临床意义。方法:免疫组织化学法检测40例神经胶质瘤组织和10例正常脑组织中12-LOX表达,结合临床随访资料探讨其表达与预后的相关性。结果:正常脑组织中12-LOX呈弱阳性表达,神经胶质瘤组织中强阳性表达率为72.5%,差异有统计学意义(P<0.05)。12-LOX强阳性表达与神经胶质瘤病理级别相关,差异有统计学意义(P=0.012),与患者性别、年龄、肿瘤大小、KPS评分无关。12-LOX强阳性表达患者中位无瘤生存期明显低于与弱阳性表达患者(P<0.05)。结论:12-LOX在神经胶质瘤中异常表达,其表达差异与神经胶质瘤的病理级别相关,与预后密切相关。

12-LOX和SEPT7及RhoA蛋白与神经胶质瘤患者临床分期与预后的相关性研究

目的对12-脂氧化酶脂加氧酶(12-LOX)和胞裂蛋白7(SEPT7)及Ras同源蛋白A(Rho A)蛋白与神经胶质瘤患者临床分期与预后的相关性进行分析,为临床诊断和治疗提供参考。方法对2010年5月至2015年11月期间诊治的神经胶质瘤患者进行研究,检测不同临床分期患者血清中12-LOX和SEPT7及Rho A的表达,并分析不同表达强度患者的预后。以同期健康体检者120例为对照组。结果与对照组相比,神经胶质瘤组患者12-LOX及p12-LOX、SETT7、S100A4、Rho A和ROCK1/2蛋白表达水平均明升高,且与其临床分期具有明显的相关性,Ⅲ期和Ⅳ患者的表达水平明显高于Ⅰ期和Ⅱ期患者(P<0.05);12-LOX、SEPT7和Rho A蛋白表达水平与神经胶质瘤患者预后密切相关,且上述蛋白的表达越高,神经胶质瘤患者的预后越差。结论 12-LOX、SEPT7和Rho A及其蛋白是神经胶质瘤临床分期诊断的标志物,且与患者的预后密切相关。

P12-LOX和uPA在人乳腺癌中的表达及其相关性

目的:探讨血小板型12脂氧合酶(P12-LOX)和尿激酶型纤溶酶原激活物(u PA)在人乳腺癌中的表达及与乳腺癌侵袭、转移的关系。方法:应用免疫组化方法检测24例三阴性乳腺癌、58例非三阴性乳腺癌和20例乳腺良性疾病组织标本中P12-LOX和u PA的表达情况,并分析其相关性及与临床病理特征进行比较。运用RT-PCR的方法检测三种不同侵袭能力乳腺癌细胞株中P12-LOX和u PA的mRNA表达情况并分析其与乳腺癌侵袭转移的关系。结果:u PA和P12-LOX蛋白在三种乳腺癌组织中的阳性表达率皆呈现出随着肿瘤恶性程度增高而逐渐增高的趋势,统计结果显示具有显著统计学意义(P<0.01);在乳腺癌组织中u PA、P12-LOX蛋白表达之间存在显著正相关(r=0.512,P<0.01)。u PA、P12-LOX表达与临床分期、淋巴结转移显著相关(P<0.01)。与患者的年龄、肿瘤大小无明显相关性(P>0.05)。在MDA-MB-231细胞系、MCF-7细胞系、HBL-100细胞系中P12-LOX和u PA的mRNA的表达随细胞侵袭能力的增强表达增高,各组间有显著统计学差异(P<0.01)。结论:乳腺癌组织中存在u PA和P12-LOX的高表达,且与乳腺癌的侵袭转移相关,提示两者可作为乳腺癌预后不良的指标之一。

乳腺癌的CARD9、P12-LOX表达与钼靶X线表现相关性分析

乳腺癌具有隐匿性强的特点,确诊的患者大多数处于晚期（[1]）。尽早诊断可以不耽误乳腺癌患者的临床治疗,有益于患者预后的提高。胱天蛋白酶募集域蛋白9（CARD9）是一个调节核转录因子-KB等信号通路的重要的因子,既往研究（[2]）证实其在胃癌、大肠癌、肾癌与肝癌等多种肿瘤疾病发生及发展中具有十分重要的作用。相关研究显示（[3]）.

人前列腺癌肿瘤干细胞12-LOX表达的初步研究

目的:研究花生四烯酸12-脂氧化酶(12-LOX)在人前列腺癌肿瘤干细胞中的表达情况,并探讨其意义。方法:采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术和蛋白质印迹法,检测12-LOX在人前列腺癌细胞系DU 145细胞和从其中分离出来的DU 145侧群细胞中的表达情况;采用免疫荧光4通道激光扫描共聚焦显微镜技术,检测12-LOX在7例前列腺癌组织肿瘤干细胞和10例正常前列腺组织干细胞中的表达情况。结果:在细胞水平,应用RT-PCR技术和蛋白质印迹法分别证实,12-LOX mRNA和12-LOX蛋白在具有肿瘤干细胞特性DU 145侧群细胞中的表达水平明显高于对应的母系DU 145细胞;在组织水平,应用免疫荧光4通道激光扫描共焦显微镜检测证实,12-LOX蛋白在所有7例前列腺癌组织的肿瘤干细胞中均为阳性表达,而在所有10例正常前列腺组织的前列腺干细胞中均无表达。结论:12-LOX在人前列腺癌的肿瘤干细胞中有特异性的高表达,从而有望成为前列腺癌肿瘤干细胞一个新的、特异性的标志,并进一步有望成为前列腺癌肿瘤干细胞一个新的治疗靶位。

12/15-LOX抑制剂黄芹素对脑缺血/再灌注损伤的保护作用

目的 探讨12/15-LOX抑制剂黄芩素是否具有对抗缺血/再灌注损伤的神经保护作用。方法第一部分,选取健康SD大鼠,线栓法（MCAO）制备脑缺血再灌注/损伤模型,随机分为黄芹素处理组、溶剂对照组（DMSO）及假手术组。分别对各组大鼠进行神经功能评分,采用TTC法测定脑梗死体积,并进行组间比较。第二部分,在大鼠皮层神经元细胞上制备糖氧剥夺（OGD）模型,随机分为OGD＋黄芹素处理组、OGD＋溶剂对照组（DMSO）及空白对照组。分别采用MTT法和TUNEL法检测各组神经元的细胞活力和凋亡情况,并进行组间比较。结果 第一部分的试验结果显示：黄芹素处理组大鼠的神经功能缺损评分低于溶剂对照组（P〈0.05）,梗死体积百分比也有所降低（P〈0.05）。第二部分试验结果显示OGD再合氧后,黄芩素处理组神经元的存活率高于溶剂对照组（P〈0.05）,同时黄芹素处理组TUNEL阳性细胞比率亦低于对照组（P〈0.05）。结论 12/15-LOX抑制剂黄芩素可能具有对抗缺血/再灌注损伤的神经保护作用。

12/15-LOX抑制剂黄芹素对脑缺血/再灌注损伤的保护作用

目的探讨12/15-LOX抑制剂黄芩素是否具有对抗缺血/再灌注损伤的神经保护作用。方法第一部分,选取健康SD大鼠,线栓法(MCAO)制备脑缺血再灌注/损伤模型,随机分为黄芹素处理组、溶剂对照组(DMSO)及假手术组。分别对各组大鼠进行神经功能评分,采用TTC法测定脑梗死体积,并进行组间比较。第二部分,在大鼠皮层神经元细胞上制备糖氧剥夺(OGD)模型,随机分为OGD+黄芹素处理组、OGD+溶剂对照组(DMSO)及空白对照组。分别采用MTT法和TUNEL法检测各组神经元的细胞活力和凋亡情况,并进行组间比较。结果第一部分的试验结果显示:黄芹素处理组大鼠的神经功能缺损评分低于溶剂对照组(P<0.05),梗死体积百分比也有所降低(P<0.05)。第二部分试验结果显示OGD再合氧后,黄芩素处理组神经元的存活率高于溶剂对照组(P<0.05),同时黄芹素处理组TUNEL阳性细胞比率亦低于对照组(P<0.05)。结论 12/15-LOX抑制剂黄芩素可能具有对抗缺血/再灌注损伤的神经保护作用。

EDTA对猪肉12-脂肪氧合酶构象及酶活力的影响

【目的】探究乙二胺四乙酸钠(EDTA)对猪肉12-脂肪氧合酶(12-LOX)构象和酶活力的影响,为猪肉加工贮藏过程中控制12-LOX活性提供参考依据。【方法】采用EDTA处理猪肉12-LOX,测定其酶活力,并分析EDTA对猪肉12-LOX的储藏稳定性、热稳定性、催化亚油酸反应、荧光光谱和圆二色谱(Circular dichrosim spectra,CD)的影响。【结果】添加EDTA可抑制猪肉12-LOX的酶活力,随EDTA浓度的增加,抑制作用逐渐增强,当EDTA浓度为10.0 mmol/L时,猪肉12-LOX活力约下降60%。EDTA能提高猪肉12-LOX的热稳定性和贮藏稳定性,使其比正常条件下保持较高酶活力。随着EDTA浓度的增加,猪肉12-LOX分子内部的α-螺旋和β-折叠含量降低,引起其二级结构发生明显变化;猪肉12-LOX的荧光强度不断减弱,EDTA浓度为20.0 mmol/L时,酶的内源荧光发射峰强度下降13%,但最大发射峰(λmax)的位置未发生变化。【结论】EDTA能引起猪肉12-LOX的构象变化进而抑制其酶活力。

雌激素对人成纤维细胞基质金属蛋白酶-12、赖氨酸氧化酶基因表达的影响

目的:通过研究雌激素对体外培养的人皮肤成纤维细胞基质金属蛋白酶-12(MMP-12)及赖氨酸氧化酶(LOX)的mRNA转录水平的影响,探讨雌激素减缓皮肤老化的机制。方法:采用酶消化法进行体外人皮肤成纤维细胞原代培养,然后将不同浓度的雌激素(0 mol/L,1×10-5 mol/L,1×10-4 mol/L)加入体外培养的人皮肤成纤维细胞中,待药物作用后,提取总RNA,通过逆转录反应获得cDNA并进行体外扩增,对扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳,根据条带的平均光密度比值来判断人成纤维细胞中MMP-12及LOX mRNA的表达水平。结果:对体外培养的人成纤维细胞进行雌激素干预,经β-act i n内参校正后,RT-PCR示对照组、低剂量组、高剂量组MMP-12表达水平三组间差异无统计学意义(F=3.711,P=0.056),LOX mRNA表达水平三组间差异具有统计学意义(F=4.337,P=0.038),SNK-q检验显示,低剂量组与对照组、低剂量组与高剂量组相比,差异无统计学意义(P>0.05)、高剂量组与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:雌激素可以上调LOX基因的转录水平,提示雌激素可能具有促进皮肤成纤维细胞弹力纤维的合成,逆转或缓解皮肤老化的作用。

脂联素减轻高糖诱导的人血管内皮细胞系损伤

目的观察脂联素(APN)对高糖诱导血管内皮细胞系损伤的保护作用及NF-κB与LOX-1蛋白表达在其中的作用。方法 30 mmol/LD-葡萄糖作用于HUVEC-12(人脐静脉内皮细胞系),不同浓度的脂联素(10、20和40μg/m L)作用48 h及20μg/m L脂联素作用不同时间(12、24、48和72 h)后,倒置相差显微镜观察内皮细胞形态,Western blot检测核转录因子NF-κB和LOX-1蛋白表达,间接免疫荧光法检测NF-κB核转位情况。结果脂联素作用于D-葡萄糖诱导的HUVEC-12,内皮细胞形态改善,折光性增强,胞内颗粒物减少,细胞排列相对规整;同时,LOX-1蛋白表达下调(P<0.05),NF-κB活性降低(P<0.05),并呈现时间和浓度依赖性(n=3,P<0.05)。结论脂联素可能通过NF-κB信号通路引起LOX-1蛋白表达下调,从而发挥其对高糖诱导血管内皮细胞损伤的保护作用。

Baicalein对人脐静脉血管内皮细胞12-脂氧化酶、血管内皮生长因子表达的影响

目的:观察baicalein作用于人脐静脉血管内皮细胞系ECV-304细胞后12-脂氧化酶(12-LOX)、血管内皮生长因子(VEGF)表达的情况。方法:Baicalein处理培养的第2代血管内皮细胞,实验组分别用1,10,100μmol/L baicalein处理48h和30μmol/L的baicalein处理1,2,4,6d。设立空白对照组。RT-PCR检测各组12-LOX、VEGF的mRNA表达;Western blot免疫印记法检测各组12-LOX的表达水平。结果:RT-PCR扩增得到单一的产物,与预期的扩增序列大小完全一致,并且Western blot免疫印记法检测得出12-LOX的表达与baicalein的作用时间和作用浓度成反比。结论:血管内皮细胞自身能产生12-LOX、VEGF,它们均是促进新生血管的形成的因素,而baicalein抑制了12-LOX、VGEF的表达,从某一途径抑制新生血管的形成。

12/15脂氧酶在脑卒中的作用研究进展

脂氧合酶(LOX)是一类广泛存在于动植物中的非血红素铁蛋白,催化底物生成各种类花生酸物质,与人体的肿瘤、哮喘、炎症、动脉硬化等疾病密切相关。12/15脂氧酶(12/15-LOX)是一种脂质过氧化物酶,可以催化亚油酸,花生四烯酸等多不饱和脂肪酸生成具有生物活性的代谢产物,通过信号转导在许多病理生理过程中发挥着重要的作用,有研究表明,12/15-LOX通路可以刺激炎症因子的产生,参与多种炎性反应,而在脑卒中的发生发展以及病理过程中始终伴随的炎性反应,炎症及细胞因子等对脑卒中有一定的影响,在脑卒中炎症反应继发性脑组织损伤病理发展过程中起着重要的作用。因此,研究12/15-LOX与脑卒中炎症的关系,可以为临床治疗脑卒中提供新的靶点。本文就12/15-LOX在脑卒中后炎症反应中的作用做简要介绍。