采用熔解曲线法进行RHD c.1227G>A基因检测研究

目的:建立用于RHD c.1227G>A基因检测的熔解曲线分析方法。方法:根据RHD c.1227G>A基因位点设计并合成序列特异性引物,在荧光定量PCR反应后对产物进行熔解曲线分析,根据熔解曲线峰值的差异进行基因检测结果判断,并与常规序列特异性引物PCR(PCR-sequence specific primer,PCR-SSP)RHD c.1227G>A基因分型方法进行比较;对与血清学结果不一致的标本进行测序分析。结果:在87例血清学初筛为RhD阴性表型的标本中,采用熔解曲线分析法,检测出16例含有RHD c.1227G>A,占比18.4%;与常规PCR-SSP分型结果一致。对1例与血清学吸收放散结果不一致的标本进行RHD exon 9测序分析,证实均为1227A纯合子。熔解曲线分析法的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和总符合率均为100%,约登指数为1.0。结论:成功建立用于红细胞RHD c.1227G>A基因分型的熔解曲线分析方法,可以高效、快速地进行RHD c.1227G>A基因检测研究。

RhD阴性患者输注“亚洲型”DEL型红细胞短期内引起高效价抗-D的同种免疫研究

目的通过对1例RhD阴性患者输注“亚洲型”DEL红细胞后诱发同种抗-D免疫的研究分析,探讨RhD阴性患者输注DEL型策略。方法采用血清学方法进行ABO及Rh系统血型抗原检测、不规则抗体筛查及鉴定,高分辨熔解曲线和基因测序分析检测DEL型的RHD基因分型。结果受血者为O型,RhD阴性。供血者为RHD 1227G>A突变的“亚洲型”DEL,Rh表型为Ccee。受血者输血后抗体筛查阳性,并鉴定为抗D和抗C,抗D效价512,抗C效价128。结论RhD阴性患者输注“亚洲型”DEL红细胞会引起抗-D同种免疫。因此对于RhD阴性献血者应加强DEL型的筛查,必要时可以增加RHD基因检测以保障输血安全。

大连RhD阴性献血者中DEL血型的分子生物学背景研究

目的研究大连地区RhD阴性献血者中,DEL血型的频率、Rh表型及DEL血型的分子生物学背景。方法收集大连市血液中心2018年11月~2019年10月,经RhD确认实验为RhD阴性的献血者标本共355份。用单克隆抗体的血清学方法检测标本的Rh C、c、E和e表型;吸收放散实验检测DEL血型;磁珠分离法提取全血DNA;熔解曲线分析法检测DEL血型标本是否存在RHD 1227G>A基因突变;Sanger测序法对RHD基因所有外显子进行测序。结果 355例RhD确认阴性的献血者中,55例(15.5%)为DEL血型,其余300例(84.5%)为RhD真阴性。在55例DEL血型中,Rh表型以Ccee为主(45/55,81.8%);而在300例RhD真阴性中,Rh表型则以ccee为主(210/300,70.0%)。55例DEL血型中,51例(92.7%)存在RHD 1227G>A基因突变,其余4例(7.3%)为RHD基因其它位点突变。结论大连地区RhD确认阴性的献血者中,DEL血型频率为15.5%,DEL血型主要以Ccee表型及RHD 1227G>A基因突变为主。