^(125)I-脱氧尿嘧啶核苷对肺癌细胞A549的杀伤作用

目的探讨125I-脱氧尿嘧啶核苷(125I-UdR)对体外培养的A549肺癌细胞的杀伤作用及其影响因素。方法测定A549肺癌细胞在含有不同浓度125I-UdR的RPMI 1640培养液中培养48 h后细胞及细胞核摄取125I-UdR的量;测定肺癌细胞A549及脐静脉内皮细胞(ECV304)在含有100 kBq/ml 125I-UdR的RPMI 1640培养液中培养2～48 h后不同时间细胞摄取125 I-UdR的量;用细胞克隆形成法评价不同浓度125 I-UdR对A549肺癌细胞的杀伤作用。结果 A549细胞和细胞核摄取125I-UdR的量随培养基中125I-UdR浓度增加而增加;在含有100 kBq/ml浓度125 I-UdR的培养液中,随培养时间的延长A549细胞和细胞核摄取125 I-UdR的量增加。在不同培养时间下,A549细胞摄取125I-UdR的量在各时间点均明显高于ECV304细胞的摄取量。细胞存活分数随培养基中125I-UdR浓度增加呈递减趋势。结论 125I-UdR能够被A549肺癌细胞摄取,并快速进入细胞核内,且摄取量存在浓度依赖性和时间依赖性1,25I-UdR对肺癌细胞具有明显的杀伤作用。

^(125)I-脱氧尿嘧啶核苷瘤内注射治疗人膀胱癌的动物实验研究

目的研究125I-脱氧尿嘧啶核苷(125I-UdR)在荷人膀胱癌裸鼠移植瘤模型中的应用效果和安全性,为125I-UdR临床应用提供实验依据。方法荷人膀胱癌裸鼠移植瘤瘤内注射相对合适剂量(123.33 MBq/kg)的125I-UdR,通过肿瘤生长抑制率、肿瘤病理及电镜改变以及γ计数仪测量各脏器放射性活度来分析其疗效和安全性。结果荷人膀胱癌裸鼠移植瘤二次瘤内注射相对合适剂量的125I-UdR,肿瘤体积缩小明显,病理示坏死彻底(核消失),电镜见核溶解、消失。外周血常规及肝肾功能无明显变化,正常组织无明显病理改变。结论荷人膀胱癌裸鼠二次瘤内注射125I-UdR(123.33 MBq/kg)是安全有效的。

HPLC法同时测定人血浆中5-氟尿嘧啶及其活性代谢物5-氟-2′-脱氧尿嘧啶核苷的浓度

目的:建立一种同时测定人体血浆中5-氟尿嘧啶及其活性代谢物5-氟-2′-脱氧尿嘧啶核苷浓度的HPLC法。方法:以肌苷为内标,血浆样品用硝酸银(10%)沉淀蛋白质,采用C_(18)柱,检测波长为266nm,流动相:0.01mol·L^(-1)磷酸盐(用2mol·L^(-1)氢氧化钠溶液调pH为7.0)-甲醇(96∶4),流速1.0mL·min^(-1),柱温为45℃。结果:5-氟尿嘧啶和5-氟-2′-脱氧尿嘧啶核苷分别在0.1～20μg·mL^(-1)(r=0.9997)和0.2～40μg·mL^(-1)(r=0.9997)浓度范围内线性关系良好,最低检测浓度分别为5和10ng·mL^(-1),方法回收率分别为98.2%～101.2%、99.5%～102.3%,日内、日间RSD均小于6%。结论:方法灵敏、快速、准确,适用于临床上测定5-氟尿嘧啶及其活性代谢物5-氟-2′-脱氧尿嘧啶核苷的血药浓度及药动学的研究。

5-氟尿嘧啶-2’-脱氧核苷经胃左动脉介入灌注后的药代动力学实验研究

目的研究术前经胃左动脉行介入灌注后5鄄氟尿嘧啶鄄2’鄄脱氧核苷(FUDR)的药代动力学变化。方法将20头健康幼猪随机分成2组,分别于术前经胃左动脉行介入化疗(IAC)或全身性静脉化疗(SC)。标本中FUDR的浓度用高效液相色谱(HPLC)法测定。结果IAC组胃壁和胰腺中FUDR的曲线下面积(AUC0鄄49)明显高于SC组;注药后60min时部分胃周淋巴结中的FUDR平均浓度明显高于SC组;在心脏和肾脏中明显低于SC组。结论术前经胃左动脉行介入化疗后,FUDR的药代动力学变化明显优于全身性静脉化疗。本实验为在临床上术前采用经胃左动脉介入化疗治疗胃癌提供了实验性依据。

海绵疣孢菌FIM06031产生的2'-脱氧尿嘧啶核苷

目的研究分离自海绵的菌株FIM06031产生的次级代谢产物。方法系统发育、形态特征和生理生化特性分析鉴定菌株FIM06031到属水平。有机溶媒提取菌株FIM06031发酵液,用正相硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析和高速逆流色谱等方法对菌株次级代谢产物进行分离和纯化。通过紫外光谱、红外光谱、核磁共振氢谱(1H)和碳谱(13C)等分析对化合物FW03101进行结构鉴定。结果与结论菌株FIM06031属于疣孢菌属(Verrucosispora),定名为Verrucosispora sp.FIM06031,其中一个代谢产物FW03101与2'-脱氧尿嘧啶核苷(2'-Deoxyuridine)同质。本文首次报道从疣孢菌中分离到2'-脱氧尿嘧啶核苷。

5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记实验性牙移动大鼠血管内皮祖细胞的研究

目的探讨5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记大鼠外周血血管内皮祖细胞(EPCs)的最佳标记时间与剂量。方法建立实验性牙移动大鼠模型,密度梯度离心分离大鼠外周血EPCs并体外培养;免疫细胞化学、荧光化学鉴定细胞表面抗原;终浓度分别为5、10、15μmol/L的BrdU标记EPCs,并于标记后12、24、48、72、96h检测各组BrdU的标记率,筛选BrdU的最佳标记计量和时间。结果所培养细胞CD34、CD133呈阳性表达,且DiI-ac-LDL、FITC-UEA-1呈双荧光阳性;终浓度为10μmol/L的BrdU标记细胞72h后标记率达(66.8±2.9)%,与5μmol/L组相比差异有统计学意义(P<0.05),与15μmol/L组相比无统计学意义(P>0.05)。各浓度BrdU对细胞均无毒性影响。结论成功分离、培养了实验性牙移动大鼠外周血EPCs;终浓度为10μmol/L的BrdU标记EPCs72h后可获得较高标记率。本实验可为研究EPCs的趋化、分化机制奠定基础。

5-溴脱氧尿嘧啶核苷体外标记肌源性干细胞:最佳浓度及时间

背景:肌源性干细胞移植入动物体内可以修复骨、肌肉、软骨或神经系统的损伤,但要了解其在体内的迁移、增殖及分化的情况,还需要一种有效、安全的标记方法来追踪其在体内的变化。目的:观察5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记肌源性干细胞的效果,探讨其最佳标记浓度和时间。方法:采用差速贴壁法体外分离SD大鼠肌源性干细胞,免疫细胞化学染色法鉴定第2代细胞并进行细胞计数。以终浓度5,10,15,20μmol/L的5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记肌源性干细胞,检测其最佳标记浓度,免疫细胞化学染色法分析其标记率;通过MTT法、锥虫蓝排斥实验观察5-溴脱氧尿嘧啶核苷对细胞增殖的影响。结果与结论:免疫细胞化学染色显示肌源性干细胞呈Desmin阳性,阳性率为(85.7±6.0)%;经5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记的肌源性干细胞与未进行标记细胞在活力和增殖上相比未见明显差异(P>0.05),标记后的肌源性干细胞活细胞率可达(92.3±2.1)%。其中浓度为10,15,20μmol/L标记组标记效果均优于5μmol/L标记组,10μmol/L为最佳工作浓度,最佳标记时间为3d,标记率为(70.9±4.5)%,随时间延长无明显变化。证实应用5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记肌源性干细胞后,对细胞的活力及增殖情况无影响,标记率也能达到细胞移植对其示踪的要求。

5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷标记大鼠骨髓间充质干细胞的有效性

背景:深入准确地研究骨髓间充质干细胞在体内外增殖、分化的规律,寻找安全、有效、灵敏度高、特异性强、简便的标记活细胞的方法至关重要。目的:探索5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷标记骨髓间充质干细胞的有效性及对其增殖能力的影响。方法:全骨髓贴壁法培养扩增SD大鼠骨髓间充质干细胞至第3代。将细胞以5×107L-1浓度接种于96孔板中,掺入法加入终浓度为0,10,20,50μmol/L5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷,分别在培养24,48和72h检测5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷标记细胞的阳性率、标记后的细胞形态,并绘制标记细胞的生长曲线。结果与结论:各浓度组标记率均随标记时间延长而升高(P<0.05);各时间点标记率随标记浓度的升高而增加,但其差别无显著性意义(P>0.05)。10μmol/L5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶标记骨髓间充质干细胞72h即可获得良好的标记率。标记前后各组间充质干细胞生长曲线均呈"S"形。说明在实验浓度范围内应用5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷体外标记骨髓间充质干细胞有效,不影响细胞的增殖,且10μmol/L5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷标记骨髓间充质干细胞72h即可获得良好的标记率。

3′,5′-二辛酰基-5-氟尿嘧啶脱氧核苷的合成及性质研究

目的 研究 5 氟尿嘧啶脱氧核苷 (FUdR)的前体药物 3′ ,5′ 二辛酰基 5 氟尿嘧啶脱氧核苷 (DO FUdR)的合成路线、降解规律和体外抗肿瘤细胞增殖活性。方法 通过酯化反应合成了DO FUdR ,采用MS ,NMR等进行了鉴定 ;HPLC测定DO FUdR在不同pH值缓冲液和小鼠组织匀浆中浓度的变化 ,计算其在不同介质中的降解速率常数 ,并测定了DO FUdR的溶解度和分配系数 ;3 H TdR掺入法测定了DO FUdR对U2 5 1星型胶质瘤细胞体外增殖活性的抑制作用。结果 合成化合物为DO FUdR ;其在缓冲溶液和组织匀浆中的降解过程符合表观一级反应 ;与FUdR具有相似的抗胶质瘤细胞增殖活性。结论 DO FUdR是一种值得进行进一步研究和开发的前体药物。

5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记骨髓间充质干细胞的技术探讨

①目的 探讨 5 -溴脱氧尿嘧啶核苷 (BrdU)标记骨髓间充质干细胞的可行性。②方法 利用密度为 1 .0 73g mL的Percoll分离骨髓的单核细胞 ,以含 1 0 %胎牛血清的低糖DMEM培养基培养与扩增MSCs细胞 ,纯度可达 95 %左右。用BrdU标记骨髓间充质干细胞 2 4、48、72和 96小时后的检测标记率。③结果 随着标记时间的延长 ,标记率逐渐增高 ,标记 72小时后标记率在 85 %以上。④结论 用BrdU标记骨髓间充质干细胞的最佳时间是 72小时 ,最佳浓度为 1 0 μg mL。

5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记在喉黏膜干细胞的研究

目的以5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromodeoxyuridine,5-BrdU)为标记对小鼠喉黏膜可能存在干细胞进行初步研究。方法选取出生3 d的昆明小鼠36只,随机分为A、B和C组,每组12只。A组小鼠皮下注射100μg/g的5-BrdU,B组小鼠皮下注射50μg/g的5-BrdU,C组小鼠皮下注射生理盐水。第8周后分别处死各组小鼠,并取小鼠喉黏膜进行免疫组化检测,计算其标记滞留细胞的阳性率。结果 8周后,注射了5-BrdU的A组与B组小鼠喉黏膜鳞状上皮有标记滞留细胞表达但两组间表达无统计学意义(t=0.06,P=0.949)。C组小鼠喉黏膜鳞状上皮无标记滞留细胞表达。结论 A、B两组小鼠喉黏膜存在标记滞留细胞,此标记滞留细胞具有喉黏膜成体干细胞的一些特点,可能是成体干细胞的来源。

^(125)I粒子联合5-氟尿嘧啶缓释化疗粒子植入治疗晚期胰腺癌疗效观察

目的:观察125I粒子联合5-氟尿嘧啶缓释化疗粒子植入治疗晚期胰腺癌的疗效。方法:12例无法切除晚期胰腺癌患者于术中先植入5-氟尿嘧啶缓释化疗粒子,再植入放射性125I粒子。其中,放射性125I粒子源强为0·4mCi^0·5mCi,肿瘤周边匹配剂量为60Gy^100Gy,平均每例使用125I粒子16粒和5-氟尿嘧啶1000mg。结果:疼痛均得到缓解,止痛有效率为91·7%;瘤体均有不同程度缩小,局部控制率为83·3%;1y生存率为25%。结论:125I粒子联合5-氟尿嘧啶缓释化疗粒子植入治疗晚期胰腺癌方法简单、安全、有效。

^(125)I-寡核苷酸-长循环脂质体的制备

目的 制备1 2 5I-寡核苷酸(ON) -长循环脂质体(L CL) ,并测定其包封率。方法 设计合成ON,包括针对bcl- 2 m RNA蛋白编码区的反义寡核苷酸(ASON)、正义寡核苷酸(SON)和无义寡核苷酸(NON)。以三氯化铊(Tl Cl3)为氧化剂进行ON的1 2 5I标记,分离纯化后,测定其标记率、放射化学纯度(放化纯)和放射性比活度。37℃条件下,测定不同时间1 2 5I- ON在0 .0 1m ol/L HEPES洗脱液(p H=7.4 )和人血清中的放化纯,观察其稳定性。采用改进的逆相蒸发法制备1 2 5I- ON-长循环脂质体(1 2 5I- ON- L CL ) ,并对其质量进行评价。结果 1ASON、NON和SON的1 2 5I标记率、放化纯和比活度分别为(72 .80±0 .6 8) %、(98.33±0 .39) %和(0 .6 3±0 .11) MBq/μg;(72 .77±0 .81) %、(98.4 2±0 .4 0 ) %和(0 .6 2±0 .11) MBq/μg;(72 .2 1±0 .6 0 ) %、(98.2 8±0 .36 ) %和(0 .6 3±0 .14 ) MBq/μg。2 37℃条件下,1 2 5I- ASON在0 .0 1mol/L HEPES洗脱液(p H=7.4 )中1h、2 h、4 h时的放化纯均大于93% ,在人血清中均大于80 %。31 2 5I- ASON、1 2 5I- NON和1 2 5I- SON的L CL 包封率分别为(6 6 .2 1±0 .2 1) % ,(70 .93±0 .0 3) % ,(6 7.6 7±0 .10 ) % ,平均粒径115 nm,聚分散指数(PDI) =0 .10 3,Zeta电位为- 2 9.2 3m V。

^(125)I脱氧嘧啶核苷内照射治疗肝癌的实验研究

目的评价瘤内注射125I脱氧嘧啶核苷(UdR)对大鼠肝癌的治疗效果。方法制备Wistar大鼠肝癌动物模型后,于瘤内注射125I UdR,第14 d光镜及电镜检查肿瘤组织的病理变化,观察生物的生存期,同时检测第2次给药后7 d、14 d以上指标的变化。结果瘤内注射125I UdR后第14 d治疗组光镜和电镜检查发现局部肿瘤组织呈轻度坏死表现。治疗组I载瘤大鼠的生存时间延长,平均生存期为49.6±6.6 d,与对照组大鼠的平均生存期(25±5.3 d)相比有显著性差异(P<0.05)。治疗组Ⅱ局部肿瘤组织呈中度坏死表现,大鼠的生存期为64.5±8.5d,与单次给药相比有显著性意义(P<0.05)。结论瘤内注射125I UdR对肝癌移植瘤动物有显著的治疗效果,二次注射125I UdR后,增强了对肿瘤的杀伤作用。

马兜铃酸Ⅰ-脱氧核苷结合物对照品制备方法研究

建立了以马兜铃内酰胺Ⅰ为原料的溴化及交叉偶联二步有机合成工艺,粗产物经过4种溶剂除杂纯化,制得马兜铃酸Ⅰ(aristolochic acidsⅠ,AAⅠ)的3种脱氧核苷结合物产物AAⅠ-dA、AAⅠ-dG、AAⅠ-dC,2步反应的收率均可达到90%,产物纯度均大于98%,满足中药化学对照品定性定量要求。该工艺重复性好,适合放大制备,具有制备步骤短及纯化操作高效、勿需色谱分离、产品收率及纯度高等特点。相比其他方法,该方法优势显著,更适于马兜铃酸Ⅰ-脱氧核苷结合物化学对照品制备。新开发的工艺为马兜铃酸Ⅰ-脱氧核苷结合物对照品的制备提供了技术支撑,为相关毒理学研究提供了坚实的物质基础。

^(125)I-UdR瘤内注射治疗Lewis肺癌荷瘤小鼠效果观察

目的研究125I标记脱氧尿嘧啶核苷(125I-UdR)在Lewis肺癌荷瘤小鼠模型治疗中的药物分布、用药安全性和治疗效果。方法在Lewis肺癌荷瘤小鼠模型瘤内注射125I-UdR(3.7 MBq/10μL),通过γ-计数器测量各脏器放射性活度和SPECT显像来观察125I-UdR的药物分布;分析用药后外周血象、肝肾功能等指标及骨髓象来评价125I-UdR的安全性;观察用药后瘤体的组织细胞学变化并作生存分析。结果125I-UdR局部注射后可在瘤内持续浓聚并致肿瘤细胞坏死;其外周血象、肝肾功能和骨髓象无明显变化,接受治疗的荷瘤鼠生存期明显延长。结论荷瘤鼠瘤内注射125I-UdR治疗Lewis肺癌安全有效。

miR-125a-5p抑制胶质瘤细胞增殖和糖酵解的初步研究

目的研究微小核苷酸125a-5p(miR-125a-5p)在胶质母细胞瘤组织中的表达及其对胶质瘤细胞增殖和糖酵解的影响。方法定量反转录聚合酶连锁反应(qRT-PCR)检测miR-125a-5p在人源胶质母细胞瘤组织中的表达情况;利用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测miR-125a-5p对细胞活力的影响;分别利用三磷酸腺苷(ATP)和乳酸试剂盒检测miR-125a-5p对ATP和乳酸生成的影响。结果 miR-125a-5p在胶质母细胞瘤组织中的表达明显低于肿瘤周边组织;miR-125a-5p对胶质瘤细胞具有生长抑制作用;miR-125a-5p减少了胶质瘤细胞中ATP和乳酸的产生;miR-125a-5p和有氧糖酵解抑制剂2-脱氧葡萄糖(2-DG)具有协同抑制胶质瘤细胞增殖的作用。结论 miR-125a-5p抑制胶质瘤细胞的增殖和糖酵解,将来可能是潜在的胶质瘤治疗新靶点。

^(125)IUdR对人脑胶质瘤细胞SHG44的杀伤作用

为评价12 5IUdR对人脑胶质瘤细胞SHG4 4的杀伤作用 ,把12 5IUdR加入到SHG4 4细胞的培养基中 ,孵育后测量细胞摄取12 5IUdR的放射性活度 ;采用克隆形成法测定12 5IUdR对SHG4 4细胞生长抑制的效果。结果表明 ,培养基中12 5IUdR浓度增加时 ,SHG4 4细胞对12 5IUdR的摄取量也相应增加 (相关系数r =0 .9917)。SHG4 4细胞摄取12 5IUdR后生长受到明显抑制 ,细胞存活分数与培养基中12 5IUdR浓度呈直线负相关 (r =- 0 .9736 ) ,其半数致死剂量LD50 为 (8.7± 0 .12 )kBq/mL ,12 5IUdR组的SHG4 4细胞存活分数明显低于Na12 5I组 (P <0 .0 0 1)。结果提示 ,12 5IUdR能够掺入到SHG4 4细胞中 ,12 5IUdR对SHG4 4细胞有明显的杀伤作用 ,说明12 5IUdR可望成为治疗脑胶质瘤的潜在的一种放射性药物。

大鼠膀胱内灌注^(125)I脱氧尿嘧啶核苷的药代动力学及组织分布

目的探讨125I-脱氧尿嘧啶核苷(125I-UdR)在大鼠膀胱内灌注后药代动力学及组织分布情况。方法将8只SD大鼠随机分成2组,每组4只。A组每只大鼠单纯125I-UdR(7.5MBq/kg体重)膀胱内灌注给药,B组每只大鼠单纯125I-UdR(7.5MBq/kg体重)经尾静脉注射给药。连续采集血液,用γ计数仪测定其放射性;12只SD大鼠随机分为3组,每组4只。每只膀胱内灌注125I-UdR1.5MBq,经0.5、2、24h后分组处死,取相关脏器后测量放射性计数。结果膀胱灌注125I-UdR后的大鼠体内代谢符合二房室分布模型,按化学剂量100μg/kg体重灌注后测得,平均T1/2α为3.34h,T1/2β为36.78h,Cmax为0.54μg/L,Tmax为1.72h。静脉注射125I-UdR后的大鼠体内代谢符合一房室分布模型,按化学剂量100μg/kg体重静注后测得,平均T1/2为0.09h,Cmax为14.55μg/L,Tmax为0.00h,膀胱灌注的绝对生物利用度F为38.46%。膀胱灌注后125I-UdR主要分布在大鼠膀胱,肝脏,脾脏中。结论125I-UdR用于膀胱灌注可以提高局部组织药物浓度,延长其在靶器官的滞留时间,并可减少对周围组织的毒副作用。

酶法合成2＇－脱氧－5－氟尿苷

本文采用大肠杆菌核苷磷酸化酶，以５－氟尿嘧啶（ＦＵ）、２＇－脱氧尿苷（ｄＵ）和磷酸盐为底物酶法合成２＇－脱氧－５－氟尿苷，实验结果表明，含１０ｍｍｏｌ／ＬｄＵ、３０ｍｍｏｌ／ＬＦＵ、１０－３０ｍｍｏｌ／Ｌ磷酸盐的混合物加入５％培养２４ｈ的大肠杆菌湿菌体于ｐＨ７．０反应３ｈ，底物ｄＵ的转化率可达４５．９％。