抗人CD40 mAb 5H6的^125I标记及其与卵巢癌细胞株HO8910体外结合的生物学特性

目的:研究抗人CD40单克隆抗体(mAb)5H6的125I标记及与卵巢癌细胞株HO8910体外结合的生物学特性。方法:氯氨-T法125I标记mAb5H6(125I-5H6),纸层析法测定125I-5H6的标记率和放射化学纯度,三氯醋酸沉淀法分析125I-5H6体外稳定性,细胞结合饱和实验进行Scatchard分析,lindmo法及其改良方法计算125I-5H6的免疫活性分数,细胞结合实验分析125I-5H6同HO8910细胞的内化和滞留。结果:(1)mAb5H6的125I标记率为(85.4±5.2)%,放射化学纯度为(99.2±0.5)%。(2)125I-5H6存放于4℃磷酸缓冲液中7d后其放射化学纯度为(80.3±4.7)%,在37℃血浆中存放24h后其放射化学纯度为(95.3±0.8)%。(3)125I-5H6与HO8910细胞亲和力Kd=(0.711±0.06)nmol/L,最大结合位点数(Bmax)=(2.17±0.08)×105个/细胞。(4)125I-5H6免疫活性分数达(38.6±5.4)%。(5)4℃2h125I-5H6同HO8910细胞滞留率为(89.8±6.0)%,37℃2h125I-5H6同HO8910细胞内化率达(54.9±2.6)%。结论:氯氨-T法进行125I-5H6标记具有良好的标记率和放射化学纯度,以及良好的体外稳定性和较高的免疫活性分数,且125I-5H6与HO8910细胞具有很高的亲和力,可用于动物体内实验。

^125I标记Ki67反义多肽核酸对裸鼠人肾癌移植瘤的抑制作用

放射性核素反义治疗是近年来提出的一种新的肿瘤治疗策略,它将反义技术阻抑癌基因表达与放射性核素基因靶向照射有机结合,从而提高治疗效果.我们既往研究发现125I标记肿瘤增殖基因Ki67反义多肽核酸(125I-PNAs)具有较强的体外抑制肾癌细胞增殖、促进凋亡作用.本研究通过建立裸鼠人肾癌移植瘤模型,进一步观察其在体内对靶基因表达及肿瘤生长的抑制作用.

125I标记美妥昔单抗在不同肿瘤模型中的显像研究

目的:该研究旨在评估针对CD147的美妥昔单抗靶向结合其他肿瘤的能力。方法:在人肿瘤细胞系的BALB/c裸小鼠转移瘤模型中,以^(125)I标记美妥昔单抗HAb18F(ab’)2,利用小动物SPECT/CT显像长时间持续观察HAb18F(ab’)2靶向结合人肝癌SMMC-7721、胰腺癌SW1990和肺癌A549细胞的能力,并利用仪器自带的InVivo Scope软件计算肿瘤/肌肉(tumorto-muslce,T/M),比较不同肿瘤摄取^(125)I-HAb18F(ab’)2的能力。结果:SPECT/CT显像结果表明,SMMC-7721、SW1990和A549细胞均高度摄取^(125)I-HAb18F(ab’)2,呈现明显的肿瘤放射性浓集,全身放射性本底低,影像对比度高,T/M比值分别达432、234和26。其中,SW1990与SMMC-7721一样持续摄取长达9 d以上。结论:3种不同类型的肿瘤细胞均能高度摄取美妥昔单抗,并且在肿瘤中滞留时间较长。美妥昔单抗不仅可以用于肝癌,也可试用于肺癌、胰腺癌等其他肿瘤的诊断和治疗。

^125I标记碳纳米材料石墨烯及其稳定性研究

目的研究放射性核素^125I标记聚乙二醇修饰的碳纳米石墨烯材料（Graphene-PEG 18kDa）的可行性及其标记产物的稳定性。方法采用氯氨一T法标记石墨烯材料（GP-18）．Millipore超滤离心管对产品进行分离纯化，并测定^125I-GP-18的标记率；纸层析法测定放射化学纯度；将^125I-GP-J8，按1：20的比例分别加入到生理盐水、血清中，置于37℃、4℃、室温条件下，测定放置2h、4h、24h、48h后标记物的放化纯度以评价其体外稳定性。结果^125I标记GP．18的标记率为（56．93±2．85）％，^125I-GP-18的放射化学纯度（97．93±0．70）％．放射性比活度为52．81MBq／mg。4aC生理盐水中放置48h的放射化学纯度仍可达（93．48±1．20）％，但在37屯血清中放置2h放化纯降为（71．94士5．47）％（P〈0．01）。结论可用^125I标记碳纳米材料石墨烯，所得产物放射化学纯度及放射性比活度高，但在37℃血清中稳定性欠佳，其结构有待进一步改进。

^(125)I标记反义寡核苷酸及其识别淋巴瘤细胞的实验研究

目的 探讨用1 2 5I标记免疫球蛋白重链V1家族框架区 (IgHV1FR)mRNA反义寡核苷酸(1 2 5I FR ASON)作为反义显像剂和反义治疗药物的可能性。方法 用DNA合成仪将含酪胺 (tyramine)的单体连接在 18聚体寡核苷酸的 5′端 ,再用氯胺 T法进行1 2 5I标记。用阳离子脂质体DMRIE C包裹1 2 5I ASON转导Namalwa细胞 (B淋巴瘤细胞系 )和HL 6 0细胞 (人髓系白血病细胞系 ) ,测定转导效率 ,同时比较未用脂质体情况下的转导效率。质量分数为 2 0 %聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)测定tyramine ASON与血清保温后的稳定性。结果 标记率为 80 .7% ,放化纯为 98.7% ,2 4h放化纯仍高于 90 %。脂质体介导ASON转导Namalwa细胞的效率为 (2 6 .8± 1.5 4 ) % ,是未用脂质体的近 18倍 ,转导HL 6 0细胞的效率是 (13.6± 2 .5 4 ) % ,两组比较差异有显著性 (P <0 .0 1)。质量分数 2 0 %PAGE于2、6和 2 4h时点未见异常条带。结论 通过连接酪胺碘标记寡核苷酸法是比较成功的方法。1 2 5I FR ASON对Namalwa细胞具有较强的特异性 ,可用于淋巴瘤反义显像和反义放射治疗的研究。

^(125)I标记酪氨酸-多壁碳纳米管在小鼠体内的生物分布

背景与目的:研究125I标记酪氨酸-多壁碳纳米管经尾静脉注射后在小鼠体内的生物分布。材料与方法:合成酪氨酸-多壁碳纳米管,并用125I进行标记,尾静脉注射进入健康雌性ICR小鼠体内,于注射后10min、30min、1h、6h、12h、24h、48h处死小鼠,取血、心、肝、脾、肺、肾、脑、肌肉、骨、胃、肠、皮肤和胸腺等进行125I放射性检测,计算每克组织百分注射剂量率并进行分布分析。结果:肺脏的125Ⅰ含量最高,且48h内无明显降低(P>0.05);肾脏125Ⅰ含量其次,且随着时间的增加迅速降低(P<0.05);肝脏和脾脏有一定125Ⅰ含量累积效应,随时间的增加无持续降低趋势;血液、心脏、肌肉、骨骼、胃、肠、皮肤、胸腺的125Ⅰ含量很低,且随着时间的增加呈持续降低趋势;脑125Ⅰ含量最低。结论:尾静脉注射后酪氨酸-多壁碳纳米管主要分布于小鼠肺脏中,且肺脏、肝脏和脾脏对酪氨酸-多壁碳纳米管可能具有一定蓄积作用。

3-正丁基锡-N-琥珀酰亚胺苯甲酸酯的合成及其^(125)I标记

合成了3-正丁基锡-N-琥珀酰亚胺苯甲酸酯(ATE)和N-琥珀酰亚胺-3-碘苯甲酸酯(SIB),其产率分别为45.4%和71.4%,并用核磁、质谱、红外等对它们的结构进行了表征。对ATE进行了125I标记,得到S125IB,标记率可达93.0%,放化纯度>98.0%。本方法为放射性药物碘的间接标记提供了重要参考。

^(125)I标记抗Flt4多抗的制备及对淋巴结定位的动物实验

目的 研究氯胺T法标记兔抗鼠血管内皮生长因子受体 3的多克隆抗体 (Flt4PcAb) ,以此探索Flt4PcAb对体内淋巴结的导向定位能力 ,旨在为前哨淋巴结 (sentinellymphnode,SLN)的特异性定位提供实验依据。方法 应用氯胺T法对Flt4PcAb行12 5I标记 ,对标记产物行性质鉴定并进行大鼠体内导向定位实验。结果 标记率为 39.5 % ,标记产物比活度为 1.75MBq/μg ,放化纯度为 95 .4 % ;标记产物性质稳定 ,无热源 ;动物实验显示淋巴结与血液及各脏器单位重量的放射性比值较高。结论 Flt4PcAb具有良好的淋巴结的导向定位能力 ,是探索SLN准确定位的新途径。

Annexin V的^(125)I标记及其在正常小鼠体内的分布

采用Iodogen法对Annexin V进行了125I标记,并观察了其在正常小鼠体内的分布情况。标记结果显示,125I-Annexin V标记率达94.9%,纯化后放化纯度达99%;室温放置72 h后,放化纯度仍保持在92%以上,表明其体外稳定性较好。生物分布结果显示,125I-Annexin V在肾脏中放射活性最高,其次为血液、肝脏、心、肺、脾;脑不吸收125I-Annexin V;肌肉、骨骼组织摄取亦较少;各组织、器官放射性摄取在1 h内除血液下降稍慢外,其余均有明显下降。表明125I-Annexin V适合用作核医学诊断试剂。

重组人内皮抑素的^(125)I标记及其体内代谢

目的探讨重组人内皮抑素(rhEndo)的^(125)I标记及其标记物(^(125)I-rhEndo)的生物学活性和体内药代动力学。方法采用小剂量Iodogen多次重复标记法标记rhEndo,细胞增殖抑制试验和亲和力试验检测^(125)I-rhEndo活性,并研究其在大鼠体内的药代动力学。结果0.5μg Iodogen3次重复标记rhEndo的标记率可达84%,放射化学纯度(94.7±2.44)%。^(125)I-rhEndo抑制bFGF诱导内皮细胞增殖的作用与未标记rhEndo相当,且能与其竞争结合内皮细胞表面受体。大鼠单次股静脉注射^(125)I-rhEndo2μg后,血药浓度-时间曲线符合两室模型,T1/2α为(0.45±0.12)h,T1/2β为(19.53±3.41)h,AUC为(484.57±137.99)ng·h·mL-1。结论小剂量Iodogen多次重复^(125)I标记不影响rhEndo蛋白的生物学活性。^(125)I-rhEndo大鼠体内单次静脉注射的药代动力学符合两室模型,半衰期约19h。^(125)I-rhEndo标记为肿瘤的靶向显像和治疗奠定了基础。

重组抗人CD22嵌合抗体SM03的^(125)I标记及生物活性

为了探讨125I标记的重组抗人CD22嵌合抗体SM03的生物活性,采用Iodogen法进行单克隆抗体SM03的125I标记,Sephacryl S-300 HR色谱柱分离标记混合物,测定分离后样品的纯度与浓度。采用竞争结合法和酶联免疫吸附法(ELISA)测定纯化后样品的活性。抗体经过放射性标记后,放化纯度>99%,回收率>47%1。25I-SM03的生物活性与未标记抗体差异没有显著性,P=0.907。用125I-SM03筛选CD22抗原表达量最多的细胞,在Raji、Daudi和Ramos细胞中,SM03与Ramos细胞的特异性结合量最多,每个细胞的结合量为1.3 pmol。以上结果表明,Indogen法可以用于单克隆抗体SM03的标记,标记后不影响SM03的生物活性。

^(125)I标记重组人血小板生成素的小鼠体内分布和代谢特征

建立了125I标记重组人血小板生成素(rhTPO)的标记方法,并研究其在小鼠体内分布及药物动力学特征,为临床应用提供参考。利用Iodogen法制备125I-rhTPO,纸层析法检测放化纯度,凝胶过滤层析法测定标记率。制备的125I-rhTPO放化纯度为95.85%,标记率为96.25%。尾静脉注射1μg.kg-1的125I-rhT-PO,在小鼠体内可以二室模型拟合血药浓度的动态变化,T1/2α为0.30 h,T1/2β为6.20 h1。25I-rhTPO在小鼠体内主要经肾脏排泄,部分可经肝胆系统代谢。在各骨组织中以富含骨髓细胞的胸骨放射性计数最高,股骨次之,而乏骨髓的胫骨放射性计数最低,提示骨髓是rhTPO作用的靶组织。

细胞间粘附分子-1^(125)I标记及其纯度、免疫活性的鉴定

目的 :建立细胞间粘附分子 -1(intracellularadhesionmolecule -1ICAM -1)125I标记方法及鉴定其纯度和免疫活性。方法:用氯胺 -T法标记ICAM -1 ,用SephadexG -50柱层析分离,用纸层析法鉴定125I-ICAM -1的纯度 ,放免法检测其免疫活性。结果:125I-ICAM -1比活度为77.84μCi/μg蛋白,标记率为65.54 % ,125I -Na的放化纯度为97.27 %,125I-ICAM -1能够与ICAM -1-Ab的最大结合为88.64 % ,并且随ICAM -1-Ab滴度的降低而增高。结论:成功建立 125I标记ICAM -1的方法 ,并且 125I-ICAM

^(125)I标记眼睛蛇神经毒素透过家兔直肠吸收实验研究

目的 :建立测定家兔血浆中眼睛蛇神经毒素 ( Neurotoxins,Nt)的放射性核素 ( 1 2 5I)示踪法 ,观察冰茶栓中 Nt透直肠粘膜吸收情况。方法 :1 2 5I-Nt采用氯胺 T法标记 ,血浆中 Nt浓度采用同位素结合三氯醋酸 ( TCA)沉淀法测定。结果 :Nt浓度在5～ 5 0 0 ng/ml之间线性关系良好 ,相关系数 r=0 .9990 ,平均回收率 =86.8% ,RSD小于 1 0 % ,最小检测线为 3ng/ml。冰茶栓中 ,家兔按 0 .39mg/kg直肠给 1 2 5I-Nt后 ,能检测到 Nt在血浆中含量。结论 :放射性核素 ( 1 2 5I)示踪法可用于血浆中 Nt含量测定 ,冰茶栓中 Nt能透过直肠粘膜吸收。

两种^(125)I标记的神经紧张肽类似物的动物体内分布

采用氯胺T法对神经紧张肽类似物NT1和NT2进行125I标记,并观察了125I-NT1和125I-NT2在正常小鼠和荷人结肠癌裸鼠体内的分布。结果显示,125I-NT1和125I-NT2标记率分别为68%和76%,经Sep-Pak-C18反相柱分离后,放化纯度>98%;两种125I标记的NT类似物血液清除较快,部分由肝、肾脏排泄,体内分布基本一致,对肿瘤具有相似的靶向性。这说明两种NT类似物N端Arg和Lys互换对其体内的分布特性没有明显影响。与125I-NT1相比,125I-NT2在体内的清除速度更快,在胃中更稳定,其T/NT也更高,更适于作进一步研究。

^（125）I标记激素与蛋白质类物质的标记率测定方法探讨

我们在研究１２５Ｉ标记胰岛素、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）和牛血清白蛋白（ＢＳＡ）等一些激素、蛋白质类物质的同时，对４种测定方法进行了实验比对，提出采用简单、方便、省时的ＴＣＡ沉淀法测定标记率较为适宜。标记率是评价一个标记方法好坏和标记条件选择是否恰当的重要指标［１］，通过它还能较为简便地计算出被标记物的比活度［２］。通常，１２５Ｉ标记物的标记率测定采用淋洗分离时标记产品峰计数率与诸峰计数率之和的比值［３］或标记产品峰的计数率与校正后１２５Ｉ投料量的比值［４］来确定，有时也采用对标记液进行层析、电泳、三氯醋酸（ＴＣＡ）沉淀等方法来测定。

^(125)I标记眼镜蛇毒组分Ⅲ在小白鼠体内的分布和药代动力学研究

目的：探讨眼镜蛇毒（Ｎａｊａ ｎａｊａ ａｔｒａ）蛇毒组分Ⅲ在小鼠体内的分布状况和在兔体内的药代动力学过程。方法：用氯胺－Ｔ法对眼镜蛇毒组分Ⅲ进行１２５Ｉ标记，用放射性核素示踪动力法检测血液中的药物浓度，以放射性参与量（脏器与血液放射比）的比值作为组分Ⅲ在组织中分布的依据。结果：小鼠尾静脉注射１２５Ｉ－组分Ⅲ后，２ｈ及 ４ ｈ放射性参与量大于 １的器官为肝脏、肾脏、肺脏、心脏和肌肉，其中以肾脏分布最高，且 ４ ｈ放射性参与量高于２ｈ。兔静脉注射眼镜蛇毒组分Ⅲ７５、１５０和３００μｇ／ｋｇ三个剂量后，快分布相半衰期Ｔ１／２α为３９．６～４２．５ｍｉｎ，慢性分布相半衰期Ｔ１／２β为１６．８～１７．３ ｈｒ，消除相半衰期Ｔ１／２γ为２１．７～２２．１ｈｒ。结论：小鼠静注组分Ⅲ后２ｈ，以肾脏分布最高，肝脏与肺脏的放射性参与量也较高，尿中含量很高。兔静脉注射组分Ⅲ３个剂量后，血药－时间曲线经３Ｐ８７药动学程序拟合符合三房室模型特征，三个时相的半衰期各剂量组之间无显著性差异，ＡＵＣ与剂量成正比，表明药物在兔体内的分布和消除为一级线性动力学过程。

重组人纤溶酶原Kringle 5的^(125)I标记及其体内代谢

目的:探讨放射性碘标记纤溶酶原Kringle 5(K 5)的生物学活性及其体内药代动力学。方法:采用基因工程方法制备重组人纤溶酶原Kringle 5(rhK 5),以小剂量Iodogen多次重复标记法标记rhK 5,细胞增殖抑制试验和亲和力试验检测125I-rhK 5活性,并研究其在大鼠体内的药代动力学。结果:125I-rhK 5的标记率为86%,放射化学纯度为96%。细胞增殖抑制试验表明,125I-rhK 5的生物活性与未标记rhK 5相当。大鼠单次股静脉注射2μg125I-rhK 5后,血药浓度-时间曲线符合两室模型,T 1/2α为(0.31±0.03)h,T 1/2β为(14.48±0.73)h,AUC为(436.58±34.6)ng.h.m-l 1。结论:小剂量Iodogen多次重复125I标记不影响rhK 5的生物学活性1。25I-rhK 5大鼠体内单次静脉注射的药代动力学符合两室模型,半衰期约为15h。125I-rhK 5为肿瘤的显像和靶向治疗奠定了基础。

^(125)Ⅰ标记重组人血小板生成素在大鼠体内的药动学

目的 :用12 5Ⅰ标记重组人血小板生成素 (12 5Ⅰ rhTPO) ,研究大鼠单剂量皮下注射12 5Ⅰ rhTPO的药动学特性。方法 :将SD大鼠随机分成 3组 ,分别予12 5Ⅰ rhTPO 0 5 ,2及 8μg·kg-1,sc ,于不同时相取血测放射性计数 ,计算相应的血药浓度及药动学参数。结果 :在大鼠体内均可以用二室模型拟合血药浓度的动态变化。低、中、高 3个剂量的cmax分别为 (0 4 3± 0 0 7) ,(1 2 9± 0 10 ) ,(4 4 4± 1 17) μg·L-1;tmax分别为 (16 80± 6 5 7) ,(11 6 0± 0 5 5 ) ,(8 4 0± 2 19)h ;AUC0→t分别为 (2 4 4 3± 1 32 ) ,(6 2 93± 6 96 ) ,(2 33 80± 5 6 2 2 ) μg·h·L-1;MRT分别为 (4 1 6 9± 3 0 7) ,(36 0 0± 1 6 4 ) ,(38 2 2± 2 80 )h ;T1/ 2 (β) 分别为 (32 30±4 2 0 ) ,(2 7 2 7± 5 5 4 ) ,(30 0 5± 3 81)h。经统计分析 ,T1/ 2 (β) 在 3个剂量组间无统计学差异 (P >0 0 5 ) ;tmax,MRT有统计学差异(P <0 0 5 ) ;cmax和AUC0→t随剂量增加而显著增加 (P <0 0 1)。12 5Ⅰ rhTPO 2 μg·kg-1,sc后 ,在大鼠体内分布广泛 ,96h后经尿和粪排泄的放射活性及甲状腺组织富集的碘达 80 %。结论 :12 5Ⅰ rhTPO的tmax,MRT ,cmax,AUC0→t在 3个剂量组间有统计学差异 ,而T1/ 2 (β)

^(125)I标记重组融合蛋白dTMP-GH在小鼠体内分布的实验研究

目的研究重组融合蛋白dTMP-GH在小鼠体内的分布情况,明确其是否具有靶向分布特点。方法实验室制备dTMP-GH重组融合蛋白;用放射性125I标记融合蛋白dTMP-GH后,按100μg/kg的标准小鼠尾静脉注射125I-dTMP-GH,分别于给药后5 min、15 min、30 min、1 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h取心、肝、脾、肾、股骨、甲状腺等进行放射性计数。结果制备得到纯度大于98%的重组融合蛋白dTMP-GH;125I标记率为71.53%,放化纯度为96.53%,比活度为0.22 MBq/μl;尾静脉注射125I标记的dTMPGH后30 min股骨的放射性计数占到注射总量的10%,并随时间推移经肝脏和肾脏代谢。结论融合蛋白dTMP-GH经尾静脉注射后在小鼠体内主要分布于骨髓,具有骨髓组织偏向分布特点。