线粒体12S核糖体核糖核酸基因突变儿童接种疫苗若干问题的探讨

线粒体12S核糖体核糖核酸(Ribosomal Ribonucleic Acid,rRNA)基因突变是发生耳聋的重要遗传因素之一,携带线粒体12S rRNA突变基因的人对氨基糖甙类抗生素(Aminoglycosides Antibiotic,Am An)高度敏感,接触Am An可导致不可逆性的听力损伤。近年来,一些地区将基因筛查引入新生儿体检,从而及时发现线粒体12S rRNA基因突变儿童,采取针对性指导,避免临床用药中使用Am An,减少药物性耳聋的发生。儿童接种用疫苗由于工艺要求存在痕量抗生素的残留,但目前尚无针对12S rRNA基因突变儿童接种疫苗的指导意见。现从线粒体12S rRNA基因突变与Am An致聋机制、疫苗中抗生素应用现状及接种疫苗后耳聋报告等方面综述,探究线粒体12S rRNA基因突变儿童接种疫苗致聋的安全性。

E．coli核糖体蛋白质S12依赖链霉素突变抑制λN基因表达的分子机制

本文利用ＰＣＲ方法克隆了Ｅ．ｃｏｌｉＴ８３依赖链霉素（ｓｔｅｒｐｔｏｍｙｅｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ，Ｓｍ＾ｄ）菌株中编码突变的核糖体蛋白质Ｓ１２的ｒｐｓＬ＾ｄ基因，并进行了ＤＮＡ序列分析，发现第４２位密码子由编码赖氨酸（Ｌｙｓ，Ｋ）的ＡＡＡ变为编码谷氨酰胺（Ｇｌｎ，Ｑ）的ＣＡＡ。依据Ｇａｒｎｉｅｒ原理预测了突变对Ｓ１２蛋白质二级结构形成趋势的影响，结果表明。

蛤蚧及其混伪品基于12S rRNA序列的Bar-HRM鉴定研究

目的:为实现蛤蚧与其常见混伪品的高效鉴别和掺伪检测,并建立蛤蚧中药材的DNA条形码-高分辨率熔解曲线(Bar-HRM)鉴别方法。方法:本研究收集了7个物种48份动物样品和10份蛤蚧粉。基于12S核糖体核糖核酸(12S rRNA)序列对蛤蚧及其6种常见混伪品进行高分辨率熔解曲线(HRM)鉴定研究并测序验证。采用HRM方法进行灵敏度和掺伪检测分析,并对市场蛤蚧粉进行检测验证。结果:蛤蚧及其6种常见混伪品均可通过12S rRNA-HRM曲线分析进行鉴别;可实现纳克级的准确检测,最低掺伪检测限为1%;10份市售蛤蚧粉中6份质量可疑。结论:基于12S rRNA序列的Bar-HRM技术可实现蛤蚧与其常见混伪品的准确鉴别,在掺伪检测中具有独特优势,对市场药材的快速检测及质量评估有一定应用价值。

血液细菌16S rRNA基因检测的诊断价值

目的探索快速可靠的检测细菌感染的新方法。方法用PCR技术扩增实验室保留株10株的16SrRNA基因,以乙型肝炎病毒-DNA、白假丝酵母菌和人类基因组DNA为对照,检测该方法的特异性;采用10倍比稀释法进行该方法的灵敏度检测。结果对所测细菌株均获得475bp扩增产物,而与乙型肝炎病毒-DNA、白假丝酵母菌和人基因组DNA无交叉反应;PCR最低能检测1.5×104/L大肠埃希氏菌。结论16SrRN基因PCR检测细菌感染的方法具有特异性、快速性和敏感性高等特点。

淋病奈瑟菌对大观霉素耐药性及耐药基因

目的探讨淋病奈瑟菌对大观霉素耐药及其机制。方法采用琼脂稀释法对临床分离的95株淋病奈瑟菌进行大观霉素敏感性测定,根据结果对耐药菌株和部分敏感菌株进行PCR扩增核苷转移酶、16S核糖体核糖核酸(16SrRNA)等特异基因片段,并对后者进行测序分析。结果根据最小抑菌浓度(MIC),95株淋病奈瑟菌对大观霉素的敏感率、中度敏感率及耐药率分别为94.7%(90/95)、4.2%(4/95)和1.1%(1/95)。未检测出核苷转移酶ANT基因,对耐药株的16SrRNA基因序列进行分析时发现其相当于大肠杆菌的第1192位发生了C→T的突变。结论大观霉素仍为目前治疗淋病的首选药物,但已出现耐药株,应引起重视。淋病奈瑟菌对大观霉素的耐药与16SrRNA的突变有关。

东南亚燕窝的12S rRNA和Cytb基因序列分析

目的对实地采集的25份未进行任何加工的东南亚燕窝样品的12S rRNA和Cytb基因序列进行分析,确定东南亚地区燕窝来源物种的真实身份,其中包括2份珍贵的采集自马来西亚燕洞的黄燕和血燕标本。方法25份未经过任何加工的样品采集自马来西亚、新加坡和越南地区的燕洞和燕屋,以直接提取自燕窝的基因组DNA为模板,利用重新设计的引物扩增得到12S rRNA和Cytb基因序列,并进行克隆测序。结果测序结果与GenBank中的同源序列进行BLAST比对分析并构建亲缘关系树,结合样品采集地的金丝燕种类信息初步确定爪哇金丝燕(Aerodramusfuciphagus)和大金丝燕(Aerodramus maximus)。结论分析结果证实扩增的均为正确的来自对应金丝燕属的线粒体基因序列,结合金丝燕种源地的物种分布资料和基因序列信息,为制定进口燕窝的质量标准提供了依据。

线粒体DNA标记在头足纲动物分子系统学中的应用

动物线粒体DNA(mt DNA)具有在细胞中大量存在、缺少重组、多为母系遗传、缺少内含子以及进化速率高等特点,广泛应用于比较和进化基因组、种群遗传、物种鉴定和不同分类水平上的系统发生学研究。头足类作为软体动物门中的重要经济种类,其分类和系统进化研究历来是热点领域。本研究主要对头足类动物mt DNA组成与特点(包括基因组成、重排等)、常用mt DNA标记对其不同分类阶元的适用性以及线粒体基因片段和全基因组在头足类系统演化中的作用进行了阐述,并对其未来发展进行展望。

杭州地区结核分枝杆菌链霉素耐药相关基因rpsL和rrs突变分析

目的分析杭州地区结核分枝杆菌链霉素耐药相关基因核糖体蛋白S12编码基因(rpsL)和16SrRNA编码基因(rrs)的突变情况。方法采用比例法对杭州地区74株结核分支杆菌临床分离株进行药敏试验;设计特异性引物,对目的基因片段rpsL和rrs进行扩增、克隆后测序分析。结果 74株结核分枝杆菌中有31株耐链霉素表型阳性,耐药率41.9%。31株耐药株中,20株rpsL 43(AAG→AGG)位点发生突变,占总耐药菌株的64.5%;2株rpsL 88(AAG→AGG)位点发生突变,占总耐药菌株的6.5%;2株两个位点同时发生突变者占总耐药菌株的6.5%。43株链霉素敏感结核分支杆菌中未见rpsL和rrs基因发生突变、插入或缺失。结论杭州地区结核分支杆菌耐链霉素主要由rpsL基因突变引起。其中,rpsL 43(AAG→AGG)位点突变占绝大部分。

大兴安岭地区人群埃立克体感染的调查

目的 了解我国大兴安岭地区可疑人群是否存在人埃立克体感染。方法 用 16SrRNA基因特异引物进行半巢式多聚酶链反应及基因序列分析技术 ,检测大兴安岭地区的一些人血标本中查菲埃立克体 (Ehrlichiachaffeensis,EC)和人粒细胞埃立克体 (humangranulocyticehrlichia)的16SrRNA基因 ,并进行序列分析 ,将测出的序列与GenBank中注册的基因序列进行最大同源性比较。结果 从蜱咬后出现发热等病症的 35例病人和近一年内有蜱咬史的林场工人血中检测到这两种埃立克体的 16SrRNA基因片段 ;对 1份可疑埃立克体病人血标本进行了人粒细胞埃立克体 16SrRNA全基因扩增 ,测出的序列与美国 1株人粒细胞埃立克体的该基因仅差 1个碱基。

西南区域核心地区中老年男性自然人群饮酒量与口腔菌群关系初探

目的分析西南区域核心地区中老年男性自然人群饮酒量对口腔菌群的影响,探寻超量饮酒相关菌群与饮酒相关癌症的关系。方法2018年3月-6月,采集目标人群唾液样本进行16S核糖体RNA基因测序,并进行以饮酒史为目标变量的问卷调查。根据饮酒量将受试者分为不饮酒组、适量饮酒组、超量饮酒组,进行菌群α多样性分析、组间菌群丰富度差异分析、菌群功能预测、受试者操作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线模型预测等分析。结果共纳入59例调查对象,其中不饮酒组23例(39.0%),适量饮酒组23例(39.0%),超量饮酒组13例(22.0%);平均年龄为(61.90±8.85)岁。超量饮酒可提高口腔菌群丰富度(P<0.05),改变消化链球菌(Peptostreptococcus)、TM7门[G-6]菌(TM7_[G-6])等特定菌属丰度(P<0.05),调节癌症相关通路(P<0.05)。ROC曲线分析发现TM7_[G-6]等3种菌属可有效区分不饮酒组与超量饮酒组(曲线下面积=0.915)。结论消化链球菌(Peptostreptococcus)、TM7门[G-6]菌(TM7_[G-6])菌属为西南区域核心地区中老年男性自然人群潜在超量饮酒标志物菌群,超量饮酒相关菌群与口腔癌关系密切。