1例足月小样儿15q11-q13基因缺失变异至Prader-Willi综合征

1病史及临床特征患儿女,10 d,因“反应低下10 d”就诊于湖北医药学院附属十堰市人民医院新生儿科,患儿系第3胎第2产,试管婴儿,孕38+5周剖宫产出生,出生时羊水清亮、量中,1 min及5 min Apgar评分均为10分,无抢救病史,脐带、胎盘、胎膜未见明显异常,出生体重2.43 kg。生后家长发现患儿喂养困难,吸吮力弱,体形瘦小,反应差,少哭少动,于当地妇幼保健院就诊,住院10 d,患儿病情好转不明显,遂转入本院。患儿父母非近亲结婚,均否认家族遗传病史,其母孕期行规律产检,胎动少。

大豆核因子GmNF-YA13基因的克隆及功能分析

【目的】探究大豆核因子GmNF-YA13基因在大豆应对非生物胁迫中的生物学功能,为GmNF-YA13基因在抗逆育种中的应用奠定基础。【方法】以大豆北豆9号和烟草NC89的种子为供试材料,将大豆培养至第一片三出复叶展开后,分别进行干旱、高盐、低温和脱落酸(ABA)处理,通过实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)对GmNF-YA13在以上4种非生物胁迫下的相对表达量进行检测,并对GmNF-YA13进行克隆及生物信息学分析,将GmNF-YA13转化烟草,并对转基因烟草中抗逆相关基因(NtABA2、NtOsmotin、NtAPX2、NtSOD、NtCAT1和NtCaMK3)的表达量进行qRT-PCR检测。【结果】干旱、高盐、低温和ABA处理均能不同程度诱导GmNF-YA13的表达,其中干旱胁迫和ABA处理对GmNF-YA13的诱导效果尤为显著。GmNF-YA13位于大豆基因组13号染色体,开放阅读框915 bp,编码含有304个氨基酸的蛋白质,该蛋白质分子量75.14 ku,等电点5.10。GmNF-YA13蛋白序列包含一个保守的DNA结合结构域。蛋白系统进化分析结果表明,GmNF-YA13与GmNF-YA7和拟南芥AtNF-YA1亲缘关系较近。启动子顺式作用元件预测分析结果表明,GmNF-YA13启动子区含有3个ABA响应元件ABRE、1个厌氧诱导元件ARE、1个防御和胁迫反应元件TC-rich repeats及1个干旱诱导的MYB转录因子结合位点MBS。GmNF-YA13在大豆叶片中的相对表达量最高。同时构建GmNF-YA13植物表达载体,并将GmNF-YA13转化烟草,获得3株转基因烟草植株。转基因烟草中抗逆相关基因表达量检测结果显示,转基因烟草中的NtABA2、NtOsmotin和NtAPX2相对表达量均显著高于野生型烟草,转基因烟草中NtSOD、NtCAT1和NtCaMK3的相对表达量与野生型烟草差异不显著。【结论】GmNF-YA13与大豆干旱、高盐、低温等非生物胁迫之间关系密切,GmNF-YA13可能通过促进抗逆相关基因表达量的升高以提高转基因烟草的抗逆性。

马铃薯RPP13基因RNAi载体的构建及遗传转化

RPP13是一种能够通过识别病原物效应子诱发植物免疫反应的典型R基因。植物病毒学实验室前期对马铃薯纺锤块茎类病毒(PSTVd)所侵染的5个马铃薯品种进行了转录组测序分析,发现RPP13基因在5个马铃薯品种中均上调。为了研究该基因在马铃薯中是否与PSTVd抗性相关,应用DNAMAN 8.0软件对转录组测序所得到的RPP13上调基因序列进行序列比对分析,选取其共同的保守区域作为沉默对象,构建了以该保守区域为臂,马铃薯体细胞胚发生激酶类似受体基因(SERK1)(登录号为EF175216)内含子为环的茎环结构反向重复序列RNAi载体pROKⅡ-RPP13,通过冻融法将pROKⅡ-RPP13载体转入农杆菌LBA4404中,应用农杆菌介导的马铃薯遗传转化方法转化马铃薯品种民丰红,以苗龄28 d的健康马铃薯叶片为材料,经过预培养2 d、农杆菌浸染10 min、黑暗条件下共培养2 d,应用抗性筛选培养基诱导生根、生芽,将再生植株进行PCR检测,筛选得到3株阳性转基因植株;以马铃薯的ef1a基因作为内参基因,利用实时荧光定量PCR技术检测马铃薯转化植株中RPP13基因的表达量。结果表明:所获得的3株转基因植株中RPP13基因的表达量与未转基因的对照相比具有显著差异,在所获得的RNAi转基因马铃薯植株中,RPP13基因表达量的降低幅度为35%~60%。

一种新的SLC25A13基因大片段缺失变异的识别:1例希特林缺陷病患者临床和遗传学分析

目的:探讨1例希特林缺陷导致的新生儿肝内胆汁淤积症(NICCD)患儿的临床和分子遗传学特征。方法:整理分析患儿临床资料,提取患儿及其父母外周血DNA标本,采用高通量测序检测致病突变,通过Sanger测序验证阳性发现,并根据ACMG指南和标准,分析新变异的致病性。结果:患儿为1.5月龄女婴,因发现皮肤黄染1月余入院。体检发现皮肤巩膜黄染,肝右肋下1 cm,质软。生化检查示血清总胆汁酸、直接胆红素、γ-谷氨酰转肽酶、甲胎蛋白等水平升高,伴低蛋白血症、凝血功能障碍和贫血。诊断为胆汁淤积症。遗传学分析发现患儿为SLC25A13基因c.852_855del与c.1314-4144_c.1452+3373del7658bp的复合杂合子;前者为母源性致病性变异,后者导致整个外显子14缺失,为父源性新变异,根据ACMG标准判定为致病性变异,病因诊断NICCD。经更换无乳糖并强化中链甘油胆汁的配方奶粉喂养,患儿病情迅速好转。结论:通过分析1例NICCD患儿的临床和分子遗传学特征,识别一个长达7658bp的SLC25A13基因缺失变异,扩展了SLC25A13突变谱,为NICCD确诊和遗传咨询提供了新的分子标记物。

甘蔗ScbHLH13基因的RT-PCR克隆与功能分析

bHLH转录因子是植物体内重要的调节因子,对植物的生长发育、次生代谢以及花青素生物合成等方面具有调节作用。本研究以高粱bHLH13(XM_002440799.2)为探针序列,从甘蔗中通过RT-PCR克隆获得一个ScbHLH13基因,并对其在不同胁迫响应转录组数据中进行表达模式分析,同时对该基因及其所编码蛋白进行了理化性质预测以及系统进化、原生质体亚细胞定位和实时荧光定量PCR表达量分析。结果显示,ScbHLH13所编码蛋白包含586个氨基酸残基,以无规则卷曲和α螺旋为主,亲水且不稳定,呈弱碱性;具有典型核定位信号,无跨膜结构;其序列内包括bHLH-MYC、HLH 2个典型保守结构域,属于bHLH超家族成员。在系统进化中ScbHLH13属于Ⅲ (d+e)类组,与高粱亲缘关系最近。在转录组数据中, ScbHLH13的表达在甘蔗品种ROC22上受低氮胁迫和黑穗病菌侵染抑制,轻微受高粱花叶病毒侵染诱导;而在Badila受低氮、在YC05-179受甘蔗黑穗病菌侵染诱导。亚细胞定位结果显示,在烟草表皮细胞中瞬时表达ScbHLH13定位于细胞核和细胞膜,在甘蔗原生质体瞬时表达ScbHLH13则定位于细胞核。qRT-PCR分析表明,ScbHLH13在甘蔗原生质体中过表达并不能诱导花青素合成代谢通路上主要基因的表达,说明ScbHLH13与甘蔗中花青素合成相关下游基因表达调控相关性较低。本研究借助甘蔗原生质体瞬时表达系统上对ScbHLH13进行了初步的表达调控探究,为进一步研究甘蔗功能基因研究以及bHLH基因家族的结构与功能研究奠定了一定的基础。

ESR和MUC13基因多态性位点与美系大白猪生长性状的关联性分析

为探究雌激素受体(ESR)Pvu II酶切位点和粘蛋白13(MUC13)c.908A>G位点的多态性与美系大白猪生长性状的关联性,本研究应用PCR扩增和Sanger测序检测了399头150日龄美系大白猪的ESR基因PvuII酶切位点和MUC13基因的c.908A>G位点的多态性,并结合生长性状进行关联分析。多态性检测结果显示,大白猪ESR基因Pvu II酶切位点共有3种基因型:AA、AB和BB,优势等位基因型为AB(0.474),优势等位基因为B(0.518);MUC13基因的c.908A>G位点的基因型为:AA、AG和GG,优势等位基因型为AG(0.566),优势等位基因为A(0.551)。群体遗传分析表明,这2个位点在美系大白猪群体中属于中度多态性(0.25AB型>AA型的遗传趋势;MUC13基因c.908A>G位点与大白猪的体重、日增重、背膘厚、眼肌面积和瘦肉率显著相关。体重、日增重和背膘厚总趋势为GG型>AG型>AA型,而AG型的眼肌面积和瘦肉率显著大于GG型。有利于产仔数和抗腹泻的合并基因型BB-GG个体的体重和日增重高于其他基因型。综上,ESR和MUC13基因多态性与大白猪的部分生长性状相关,可为育成综合高产仔、抗腹泻和快速生长为一体的大白猪品系提供重要的参考。

Hoxc13基因多态性与滩羊二毛性状关联研究

试验旨在探究Hoxc13基因与滩羊二毛期羊毛性状相关性,利用PCR和DNA测序方法进行Hoxc13基因多态性与滩羊二毛性状的关联研究。结果显示:Hoxc13基因在滩羊群体中存在3种基因型即CC型、CT型和TT型,群体中CC基因型频率17%,CT基因型频率为38%,TT基因型为45%,等位基因频率为C (64%)、G(36%)。通过Hoxc13基因与二毛性状关联分析可知,基因型CT个体毛长显著高于基因型CC、GG (P<0.05)。研究表明,Hoxc13基因可作为滩羊二毛性状分子标记辅助选育的关键基因,在育种工作中可选择Hoxc13基因CT基因型个体进行滩羊串子花品系选育。

ALG13基因变异致早发性婴儿癫痫性脑病一例

1病例介绍患儿,女,7月龄,因“发现后仰动作2~3个月”于2020年7月于武汉儿童医院神经内科就诊。患儿入院前2~3个月前无明显诱因出现后仰动作,伴双手上抬,蹬腿,成串或孤立发作,2~3串/日,2~3下/串,多在刚睡醒时发作,无发热,无吐泻。家长未注意,后因患儿不能抬头至武汉儿童医院康复科就诊,行视频脑电图检查提示高度失律,遂至神经内科就诊。

Hoxc13基因在滩羊羔羊不同生长时期皮肤组织的表达分析

试验旨在研究Hoxc13基因在滩羊羔羊不同生长时期皮肤组织的表达差异。利用实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)分析Hoxc13基因在滩羊羔羊不同生长时期(35、55日龄)皮肤组织中表达差异。结果显示,Hoxc13基因在55日龄滩羊羔羊皮肤组织含量极显著高于35日龄皮肤组织(P<0.01)。研究表明,Hoxc13基因在35、55日龄滩羊羔羊皮肤组织中存在差异表达,55日龄皮肤的表达高于35日龄,Hoxc13基因可能与毛囊发育的过程密切相关。

过表达S100A13基因对甲状腺癌TT细胞增殖特性的影响

背景与目的:有研究表明,S100A13基因与肿瘤的发生有关,而S100A13基因在人甲状腺组织中高表达。本研究旨在探讨S100A13基因过表达对甲状腺癌TT细胞增殖特性的影响。方法:应用Lipofectamine 2000将真核表达载体pCDNA3.1/NT-GFP-S100A13和空载体pCDNA3.1/NT-GFP导入TT细胞,经G418抗性筛选得到稳定的克隆并扩大培养成细胞系,激光共聚焦显微镜观察外源性S100A13蛋白在细胞中的定位。采用real-time RT-PCR和Western blot鉴定稳定过表达S100A13的TT细胞。分别应用细胞生长曲线、流式细胞术方法检测过表达S100A13基因对TT细胞生长速率和细胞周期的影响。结果:成功建立了稳定过表达S100A13和空载体的细胞系TT-S100A13-GFP、TT-GFP。分别将1×104个TT-S100A13-GFP、TT-GFP和TT细胞培养7d后,各组细胞数目分别为(2.30±0.24)×105个、(1.40±0.25)×105个和(1.50±2.20)×105个(P<0.05);TT-S100A13-GFP、TT-GFP和TT细胞经流式细胞仪检测S期的细胞比例分别为(6.47±0.14)%、(5.86±0.23)%和(5.99±0.28)%(P<0.05),G2/M期的细胞比例分别为(50.27±0.66)%、(39.39±0.23)%和(39.64±0.64)%(P<0.05)。结论:过表达S100A13基因对甲状腺癌TT细胞的增殖具有促进作用,促进TT细胞周期从G0/G1期向S期及G2/M期过渡。

西藏绒山羊WNT4和HOXC13基因对绒毛纤维直径性状的遗传效应分析

试验旨在探索WNT 4和HOXC13基因多态性及其对西藏绒山羊绒毛纤维直径性状的影响,寻找与西藏绒山羊绒毛纤维直径性状相关的分子标记。以380只1岁西藏绒山羊群体为研究对象,利用混池DNA直接测序法检测WNT 4和HOXC 13基因的SNP,利用飞行时间质谱技术对SNP分型,利用SAS 9.1软件中最小二乘方差模型对SNP位点与绒毛平均纤维直径、纤维直径标准差、纤维直径变异系数进行关联分析。结果表明,WNT 4基因第3外显子区域检测到2个SNPs位点(SNP1和SNP2),HOXC 13基因第2外显子区域检测到2个SNPs位点(SNP3和SNP4),均处于中度多态(0.25<PIC<0.50)。χ2检验表明,群体中WNT 4基因的SNP1和SNP2位点均处于Hardy-Weinberg不平衡状态(P<0.05)。关联分析结果表明,4个SNPs位点均与平均纤维直径呈极显著相关(P<0.01),SNP2和SNP3与纤维直径标准差呈极显著相关(P<0.01),SNP2与纤维直径变异系数呈极显著相关(P<0.01)。综上,WNT 4和HOXC 13基因对西藏绒山羊绒毛纤维直径有显著影响,可以尝试将其SNPs位点作为影响西藏绒山羊绒毛纤维直径的分子标记之一,为超细型西藏绒山羊选育工作提供理论依据。

婴儿肝内胆汁淤积症SLC25A13基因突变分析

目的探讨SLC25A13基因突变在中国婴儿肝内胆汁淤积症患儿中的检出率,初步了解突变患儿血生化及氨基酸谱特征,肝脏活组织病理变化。方法2003年12月至2006年12月就诊于复旦大学附属儿科医院的婴儿肝内胆汁淤积症患儿,满足本研究入选条件者共115例进行了血氨基酸质谱分析,伴血浆瓜氨酸明显升高的患儿进行SLC25A13基因全部外显子及邻近序列测序,不伴血浆瓜氨酸明显升高的患儿进行SLC25A13基因常见突变851del4(突变Ⅰ)及突变1638ins23(突变Ⅲ)筛查,突变851del4采用实时荧光定量PCR双标记探针法检测,突变1638ins23采用PCR产物直接电泳法检测,对仅检出单个位点突变的筛查对象,继续进行其余已报道的10种突变位点检测。检测结果仍为单个杂合突变的对象进行SLC25A13基因所有外显子区及其邻近序列分析。对确诊突变患儿的临床表现、血生化及血氨基酸特征等进行分析。结果5例伴血瓜氨酸明显升高的患儿共检出突变4例,其中纯合突变851del4/851del41例,复合杂合突变851del4/1638ins231例,杂合突变851del42例;110例不伴血浆瓜氨酸明显升高患儿共检出突变6例,其中纯合突变851del4/851del41例,复合杂合突变851del4/1638ins231例,杂合突变851del44例。115例婴儿肝内胆汁淤积症患儿共检出SLC25A13基因突变10例,占8.7%。突变患儿血生化改变包括胆红素、γ-谷氨酰转移酶以及碱性磷酸酶等明显升高,AST升高较ALT明显。血串联质谱发现5例突变患儿有特征性氨基酸瓜氨酸、苏氨酸及蛋氨酸升高,另5例突变患儿并无血氨基酸改变。10例患儿中有7例行肝脏活组织病理学检查,4例有显著的脂肪变性。结论SLC25A13基因突变是中国婴儿肝内胆汁淤积症的重要原因之一。肝脏活组织病理、血生化及氨基酸谱等检查对诊断SLC25A13基因突变患儿有重要意义,但最终仍需通过基因检测确诊。

水稻OsDHHC13基因参与氧化胁迫响应的初步研究

DHHC型锌指蛋白参与细胞内蛋白质的棕榈酰化修饰,对细胞和个体的生长发育起着重要的调控作用.OsDHHC13是典型的DHHC型锌指蛋白基因.生物信息学分析发现,OsDHHC13的启动子区域含有胁迫及光响应元件,而且其编码蛋白是具有4个跨膜结构域的典型膜蛋白.对OsDHHC13过表达株系进行H2O2的氧化胁迫处理发现,过表达株系幼苗的根显著长于野生型,说明OsDHHC13能解除H2O2对根生长的抑制,提高了抗氧化胁迫的能力.随后H2O2含量测定发现,OsDHHC13过表达株系幼苗根部的H2O2含量显著低于野生型.进一步的qRT-PCR分析发现,与清除H2O2相关的酶基因的转录水平在过表达株系中显著升高,说明OsDHHC13能促进清除H2O2的相关酶基因的表达,调节内源性H2O2的动态平衡.总之,本研究结果初步证明锌指蛋白基因OsDHHC13正调控水稻的抗氧化胁迫能力.

先天性肛门直肠畸形Hoxd 13基因表达的研究(英文)

目的 检测Hoxd 13基因在肛门直肠畸形病人和正常人的直肠末端表达状况 ,探讨Hoxd 13基因与人类先天性肛门直肠畸形发生的关系。方法 应用RT -PCR方法检测Hoxd 13基因在 16例肛门直肠畸形患儿和 5例正常儿童直肠末端的表达水平。结果 Hoxd 13基因mRNA在先天性无肛畸形直肠末端表达水平明显低于正常直肠末端的表达 (0 .32± 0 .36vs 0 .73± 0 .10 )。 (P <0 .0 1)。结论 Hoxd

Citrin缺陷所致新生儿肝内胆汁淤积症SLC25A13基因突变的分子诊断

目的探讨citrin缺陷导致的新生儿肝内胆汁淤积症(NICCD)患儿的SLC25A13基因突变情况。方法选取17例确诊NICCD患儿,应用PCR-RFLP方法检测其SLC25A13基因中8种中国人最常见的突变,并结合常规实验室检查结果进行分析。结果 17例患儿中,6例为SLC25A13基因纯合突变、3例为SLC25A13基因复合杂合突变,8例为SLC25A13基因单杂合突变。共检测出3种突变类型,分别为851del4(73.1%)、1638ins23(11.5%)和IVS6+5G>A(15.4%)。17例患儿的出生体质量偏低,存在病理性黄疸,实验室检查改变包括肝功能异常、高胆红素血症、高胆汁酸血症、低蛋白血症、低血糖、凝血功能障碍、高血乳酸和高血氨等,符合NICCD患儿的典型症状。结论 851del4、1638ins23和IVS6+5G>A为中国人SLC25A13基因的突变热点。对于检测SLC25A13基因突变PCR-RFLP方法是一项便捷可靠的NICCD分子诊断技术。

环江香猪黏附素13基因多态性及其与仔猪腹泻的相关性分析

试验旨在对环江香猪仔猪腹泻抗性/易感的黏附素13基因(MUC13)单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)/单倍型与仔猪腹泻的相关性进行分析。试验采用高分辨率熔解曲线(high resolution melting,HRM)技术对93头环江香猪腹泻仔猪和95头健康对照仔猪进行基因分型,结合DNA测序对HRM检测结果进行验证,并通过SHEsis在线平台确定其单倍型。结果显示,环江香猪MUC13基因的G224A位等位基因分布频率在腹泻组和对照组间差异显著(P<0.05),GG、GA和GG+GA基因型分别与AA基因型相比差异均显著(P<0.05)。A112G、T170C和G164C位点各基因型频率和等位基因频率在腹泻组和对照组之间差异均不显著(P>0.05),腹泻组与对照组E位点均为野生纯合基因型。单倍型Ⅹ(GTAC)在腹泻组的分布极显著高于对照组(P<0.01)。因此,MUC13基因G224A位点和单倍型Ⅹ(GTAC)与环江香猪仔猪断奶前腹泻相关。

S100A13基因真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的表达

目的构建以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因的重组表达质粒pcDNA3.1/NT-GFP-S100A13,观察S100A13基因在COS-7细胞中的表达及定位。方法采用克隆和亚克隆技术构建S100A13基因真核表达载体,脂质体介导转染COS-7细胞,RT-PCR和western-blot验证其mRNA和蛋白的表达,荧光显微镜观察该基因亚细胞定位。结果酶切和测序结果证实重组质粒含有S100A13编码区序列且插入方向正确,转染后观察该基因亚细胞定位于全胞浆。结论成功构建了S100A13基因真核表达载体,该基因在COS-7细胞中成功表达,S100A13基因表达定位于全胞浆。

IL13基因rs1295686多态性与北方汉族儿童哮喘易感性的关联分析

目的研究白细胞介素13（IL13）基因SNP位点rs1295686多态性与北方汉族儿童哮喘易感性的关系。方法采用SNaPshot方法对435例哮喘儿童和601例对照儿童的IL13基因位点rs1295686和对照位点rs9312717进行分型检测，并进行统计学分析。结果IL13基因rs1295686位点的T风险等位基因频率分布在病例一对照组中差异显著（P=0．012，OR：1．265，95％CI1．052～1．520）。对照位点rs9312717在两组中差异无显著性（P=0．359）。通过logistic回归分析rs1295686位点的基因型在病例一对照组中的分布，发现T基因型纯合子携带者发生哮喘的相对危险度较携带纯合CC基因型、杂合CT基因型者显著增高（P=0．026，OR=1．568，95％CI1．055～2．330）。结论IL13基因SNP位点rs1295686多态性与北方汉族儿童哮喘易感性具有显著相关性。

白介素13基因多态性与湖北汉族人群哮喘的关系

目的 :为了探讨IL 13基因编码区精氨酸 (Arg) 110谷氨酰胺 (Gln)多态性是否与湖北地区汉族人群哮喘及血浆总IgE水平升高相关。方法 :采用PCR RFLP方法 ,检测湖北地区 4 3名哮喘患儿、4 5名成人哮喘患者、31名非哮喘儿童和 4 6名体检健康成人的IL 13外显子 4Arg110Gln的等位基因频率和基因型频率。用化学发光法测定血浆总IgE。结果 :IL 13基因4 2 5 7位等位基因a在儿童、成人中的频率分别为 0 39、0 32。IL 13基因Arg110Gln多态性的GlnGln型与儿童哮喘和血浆总IgE升高相关 (P分别为 0 0 30、0 0 0 0 9) ,但与成人哮喘、血浆总IgE水平之间无统计学意义 (P分别为 0 2 19、0 174 )。结论 :研究显示IL 13外显子 4Arg110Glng a单核苷酸多态性与湖北汉族儿童哮喘和血浆总IgE水平相关 ,但与成人哮喘、血浆总IgE水平之间无统计学意义。

多指并指家系的HOXD13基因分析

目的:分析常染色体显性遗传多指并指家系的HOXD13基因。方法:采集一个常染色体显性遗传多指并指家系的外周血,应用聚合酶链反应(PCR)和直接测序(directsequencing)技术,对该家系成员中HOXD13基因的外显子进行分析。结果:2号染色体上的HOXD13基因未出现基因变异。结论:HOXD13基因不是该家系的致病基因,该家系的致病基因很可能是一个新基因。