《民法典》第137条第2款第2、3句评注

从文义上来看,《民法典》第137条第2款第2句第1分句并非对本款第1句到达标准的具体化,而是特别规定。本款第2、3句采用了“指定/未指定特定系统”的立法模式,对于“数据电文”“指定系统”等来自相关示范法、公约的术语的解释可以参考其规则、说明与判例。但考虑到相关国际示范法、公约与本款第2、3句的实质性区别,在生效时间的认定上,仍须立足于我国民法体系下的基本原理。本款第2句第1分句应被目的性限缩为相对人指定了特定系统时,该数据电文进入指定系统并通常可被相对人知悉时生效。若相对人指定了特定系统但数据电文进入了非相对人所指定的系统,适用本款第1句,以相对人实际知道时为生效时间。若数据电文未进入相对人指定的系统,须区分原因存在表意人侧或相对人侧处理。不论相对人是否指定了特定系统,若相对人实际知道时间早于通常可期待其知道的时间,以实际知道时间为准认定生效时间。

黑色素细胞中过量表达miR-137对TYRP-1和TYRP-2的影响

【目的】证明miR-137通过调控MITF而间接影响小鼠黑色素细胞TYRP-1和TYRP-2的表达,从而影响黑色素的生成。【方法】通过细胞转染技术在细胞水平过量表达miR-137,对黑色素细胞中黑色素含量进行了测定,经RT-PCR以及western blot检测转染后细胞TYRP-1和TYRP-2在mRNA和蛋白水平的变化。【结果】黑色素含量明显减少,在mRNA水平,TYRP1显著降低至0.4倍,TYRP-2显著降低至0.6倍。在蛋白水平,TYRP-1显著降低至0.61倍,TYRP-2显著降低至0.73倍。【结论】过量表达miR-137会通过调控MITF而使黑色素细胞TYRP-1和TYRP-2的表达量降低,从而揭示了miR-137通过调节TYRP-1和TYRP-2的表达间接调控了黑色素的生成。

CD137和CD28分子对衰老T细胞bcl-2表达的调控

目的观察两种共刺激分子CD137及CD28对D-半乳糖致亚急性衰老模型小鼠及自然衰老小鼠T细胞活化后的bcl-2表达的调控,分析这两种共刺激分子调节衰老T细胞凋亡的可能机制。方法7周龄BALB/c雄性小鼠每日背部皮下注射D-半乳糖溶液(120mg/kg,溶于0.1ml蒸馏水中),连续注射5个月,建立亚急性衰老模型组;自然衰老组为16月龄BALB/c雄性小鼠。分离小鼠的脾脏T细胞,分别用conA+IgG、conA+CD137单抗、conA+CD28单抗体外活化,48h后用流式细胞术及半定量RT-PCR分析各组T细胞bcl-2的表达。结果(1)衰老模型组T细胞经conA+IgG、conA+CD137单抗、conA+CD28单抗活化48h后,胞内bcl-2蛋白表达率分别为(24.4±1.5)%、(34.4±2.4)%、(45.1±2.7)%,自然衰老组T细胞经conA+IgG、conA+CD137单抗、conA+CD28单抗活化48h后,胞内bcl-2蛋白表达率分别(19.6±2.0)%、(26.3±1.9)%、(48.5±2.2)%;(2)衰老模型组T细胞经conA+IgG、conA+CD137单抗、conA+CD28单抗活化48h后,胞内bcl-2mRNA表达率(IOD(bcl-2)/IOD(β-actin)分别为0.309±0.039、0.547±0.036、0.780±0.041,自然衰老组T细胞经conA+IgG、conA+CD137单抗、conA+CD28单抗活化48h后,胞内bcl-2mRNA表达率分别0.283±0.038、0.535±0.041、0.771±0.063。结论CD137单抗及CD28单抗,均可以显著提高衰老模型组及自然衰老组小鼠T细胞bcl-2mRNAbcl-2蛋白的表达,这可能是CD137分子及CD28分子抑制衰老T细胞凋亡、维持衰老T细胞功能的主要机制之一。

原因不明复发性流产患者外周血Th1/Th2与共刺激分子B7-1、B7-2的关系

目的探讨原因不明复发性流产患者外周血单核细胞共刺激分子B7-1、B7-2、辅助性T淋巴细胞1(Th1)及辅助性T淋巴细胞2(Th2)的表达水平,分析B7-1、B7-2与Th1/Th2比率的关系。方法流式法检测20例原因不明复发性流产女性(流产组)、19例正常妊娠女性(正常妊娠组)和15例正常未孕女性(正常未孕组)的Th1/Th2和B7-1、B7-2的表达水平。结果流产组Th1/Th2(15.8±4.2)、B7-1的表达水平(11.4±1.6)%,显著高于其余2组(P<0.01);流产组B7-2的表达水平(17.5±2.0)%,显著低于其余2组(P<0.01);流产组Th1/Th2与B7-1的表达水平之间存在显著正相关(r=0.9136,P<0.01);流产组Th1/Th2与B7-2的表达水平之间存在显著负相关(r=-9571,P<0.01)。结论原因不明复发性流产患者B7-1、B7-2、Th1及Th2的表达水平显著异常,B7-1、B7-2与Th1/Th2比率显著相关,可能是原因不明复发性流产发生的重要原因。

血清miR-137、Notch1表达与糖尿病视网膜病变的关系

目的探讨血清微RNA-137(miR-137)、缺口受体1(Notch1)表达与糖尿病视网膜病变(DR)的关系。方法选取2021年1月至2022年12月河北省保定市第一中心医院(以下简称“我院”)收治的147例2型糖尿病(T2DM)患者为T2DM组,根据是否并发DR分为DR组45例和非DR组102例,根据DR分期分为增生期组15例和非增生期组30例,另选取我院同期52名健康体检者为对照组。收集T2DM患者临床资料,采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测血清miR-137、Notch1 mRNA表达。采用Pearson相关系数分析DR患者血清miR-137与Notch1 mRNA表达的相关性,分析T2DM患者并发DR的影响因素。受试者操作特征(ROC)曲线分析血清miR-137、Notch1 mRNA表达对T2DM患者并发DR的预测价值。结果与对照组比较,T2DM组血清miR-137表达升高,Notch1 mRNA表达降低(P<0.05)。与非DR组比较,DR组血清miR-137表达升高,Notch1 mRNA表达降低(P<0.05)。DR患者血清miR-137与Notch1 mRNA表达呈负相关(r=-0.780,P<0.001)。与非增生期组比较,增生期组血清miR-137表达升高,Notch1 mRNA表达降低(P<0.05)。多因素logistic回归分析显示,T2DM病程延长、糖化血红蛋白升高、miR-137≥1.47为T2DM患者并发DR的独立危险因素,Notch1 mRNA≥0.98为独立保护因素[OR(95%CI)=1.181(1.059~1.318)、1.613(1.170~2.224)、3.550(0.734~0.958)、0.188(0.071~0.498)]。ROC曲线分析显示,血清miR-137、Notch1 mRNA表达联合预测T2DM患者并发DR的曲线下面积>miR-137、Notch1 mRNA单独预测(P<0.05)。结论T2DM患者血清miR-137高表达和Notch1低表达与DR密切相关,可能成为DR辅助预测指标。

miR-137对卵巢癌的抑制作用及其机制

目的分析miR-137的表达对卵巢癌的抑制作用及可能的作用机制。方法采用正常卵巢上皮细胞株HOSE及人卵巢癌细胞株SKOV3、3AO、SW626,分析卵巢癌中miR-137的表达水平,研究其对卵巢癌抑制作用及可能的作用机制。结果与miR-137在正常卵巢上皮细胞HOSE表达水平比较,卵巢癌细胞3AO、SW626、SKOV3中表达水平明显依次下降(P <0. 05);通过Kaplan-Meier生存分析,卵巢癌中miR-137高表达的细胞生存期明显长于低表达(P <0. 05);靶基因双荧光素酶实验显示卵巢癌SW626、SKOV3分别转染的wt-EZH2 3'-UTR与mut-EZH2 3'-UTR载体48 h后,野生型wt-EZH2 3'-UTR的相对双荧光素酶活性明显低于突变型mut-EZH2 3'-UTR(P <0. 05);同时卵巢癌SW626、SKOV3分别经转染过表达miR-137明显降低EZH2基因mRNA水平及EZH2 mRNA蛋白水平的表达。Western Blot实验显示卵巢癌细胞miR-137降低EZH2蛋白的表达,通过过表达EZH2作用后EZH2蛋白的表达水平得到恢复(P <0. 05);克隆形成实验显示卵巢癌细胞miR-137过表达后克隆形成能力下降,通过过表达EZH2作用后克隆形成能力得到恢复(P <0. 05);同时经EdU检测提示卵巢癌SW626、SKOV3中miR-137抑制卵巢癌细胞的生长,通过EZH2过表达作用后可恢复卵巢癌细胞的生长能力。结论 miR-137高表达能够抑制卵巢癌细胞增殖,促进其凋亡,其可能的作用机制与miR-137下调EZH2表达水平有关。

miR-137对喉癌Hep-2细胞增殖、侵袭与凋亡的影响及可能机制

目的探讨miR-137对喉癌Hep-2细胞增殖及迁移能力的影响及可能机制。方法采用miR-137模拟物转染喉癌Hep-2细胞,实验分为空白对照组组(未进行转染)、miR-137阴性对照组(转染无关序列)、miR-137模拟物转染组(进行miR-137模拟物转染)。real-time PCR法验证转染效率,采用CCK8法检测miR-137对喉癌Hep-2细胞增殖的影响,采用Transwell实验检测转染后Hep-2细胞的侵袭能力变化,采用流式细胞术检测miR-137对Hep-2细胞凋亡的影响;Western blot检测转染后Hep-2细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3以及侵袭相关蛋白T细胞因子-4(TCF-4)蛋白表达的变化。结果与空白对照组或阴性对照组相比,miR-137模拟物转染组Hep-2细胞miR-137的表达水平显著高于对照组(P<0.01),喉癌Hep-2细胞的增殖与侵袭能力显著降低,细胞凋亡率明显升高,凋亡相关蛋白Bcl-2表达水平降低,而Bax与caspase-3蛋白表达升高,侵袭相关蛋白TCF-4表达降低。结论过表达miR-137抑制Hep-2细胞增殖与侵袭、诱导细胞凋亡,与上调Bax、caspase-3蛋白表达和下调Bcl-2、TCF-4表达相关。

miR-137对人喉癌细胞株Hep-2细胞增殖的影响

目的研究miR-137对喉癌细胞株Hep-2细胞增殖及细胞周期的影响。方法将Hep-2细胞分为转染miR-137寡聚核苷酸组(A组)、转染无义序列组(B组)和空白对照组(C组)。采用RT-PCR、MTT法、流式细胞仪和Western blot技术评价各组细胞增殖和细胞周期的生物学特征。结果转染miR-137寡聚核苷酸后,Hep-2细胞中miR-137表达显著增加。与C组相比,A组细胞增殖水平明显抑制,miR-137寡聚核苷酸能够有效诱导Hep-2细胞周期阻滞在G1/G0期;A组细胞分裂周期蛋白42表达水平明显下调,细胞周期调控因子蛋白CDK4及细胞周期素D1蛋白表达水平明显降低。结论 miR-137寡聚核苷酸能够显著抑制喉癌细胞Hep-2的增殖,miR-137是潜在的人喉癌细胞基因治疗的候选靶点。

LncRNA XIST沉默对非酒精性脂肪肝小鼠T细胞免疫功能的作用机制

目的探讨长链非编码RNA XIST(LncRNA XIST)调节微小RNA-137-3p(miR-137-3p)/Krüppel样转录因子2(KLF2)轴对非酒精性脂肪肝(NAFLD)小鼠T细胞免疫功能的影响。方法建立NAFLD小鼠模型,检测脾脏CD4+T、CD8+T细胞及细胞中LncRNA XIST表达,将CD4+T细胞分为si-NC组、si-XIST组、si-XIST+anti-NC组及si-XIST+anti-miR-137-3p组,分别检测LncRNA XIST、miR-137-3p和KLF2表达水平、细胞增殖与凋亡;将各组转染的CD4+T细胞与人肝细胞HL-7702共培养,分别检测TGF-β1、IL-10、IFN-γ、IL-17水平及Th17、Treg细胞比例;双荧光素酶报告基因实验验证LncRNA XIST、KLF2与miR-137-3p靶向关系。结果NAFLD组小鼠CD4+T细胞比例显著升高,CD8+T细胞比例显著降低(P<0.05),且LncRNA XIST在CD4+T细胞中表达水平显著升高(P<0.05);抑制LncRNA XIST表达可显著抑制CD4+T细胞增殖,诱导细胞凋亡,诱导CD4+T细胞TGF-β1、IL-10分泌,抑制IFN-γ、IL-17水平,升高Treg细胞比例,降低Th17细胞比例;抑制miR-137-3p表达可逆转抑制LncRNA XIST表达对CD4+T细胞的影响;双荧光素酶报告基因实验证实,LncRNA XIST可调控miR-137-3p表达,KLF2是miR-137-3p下游靶点。结论LncRNA XIST在NAFLD小鼠CD4+T细胞中表达水平升高,抑制LncRNA XIST表达可通过调节miR-137-3p/KLF2信号轴,调节炎性因子分泌,升高Treg细胞比例,降低Th17细胞比例。

电针对系统炎症诱导认知功能障碍小鼠海马CD137、CD137L及TREM2的影响

目的:探讨电针足三里对脂多糖引起的系统炎症诱导认知功能障碍小鼠海马白细胞分化抗原137(CD137)、CD137配体(CD137L)和髓样细胞触发受体2(TREM2)的影响。方法:将24只小鼠随机分为对照组、模型组和电针组,每组各8只,模型组、电针组腹腔注射脂多糖(1 mg/kg)进行造模,对照组给予同等容量0.9%氯化钠注射液。电针组于造模后及造模后24 h给予15 min 10 Hz、0.5 mA的连续波电刺激足三里穴,对照组、模型组不做处理。干预后采用新物体识别实验检测小鼠新物体识别指数以评价小鼠学习记忆能力,采用酶联免疫吸附法检测小鼠海马CD137、CD137L和TREM2的含量。结果:与对照组比较,模型组小鼠新物体识别指数、TREM2含量显著降低,CD137、CD137L含量显著升高(均P<0.01);与模型组比较,电针组小鼠新物体识别指数、TREM2含量显著升高,CD137、CD137L含量显著降低(均P<0.01)。结论:电针足三里可改善系统炎症诱导的认知功能障碍,其作用机制可能与降低海马区CD137、CD137L含量及提高TREM2含量有关。