嗜热菌Thermaerobacter subterraneus DSM13965磷酸三酯酶的原核表达、纯化及性质表征

将来源于嗜热菌Thermaerobacter subterraneus DSM13965的磷酸三酯酶基因在大肠杆菌BL21中高效表达,并采用超声、热失活和组氨酸标签镍柱对产物进行分离纯化,通过SDS-PAGE和Western-blot对表达产物进行鉴定.结果表明:该重组酶以二聚体的寡聚体形式存在;其最适温度为70℃,最适pH=10.0,具有良好的热稳定性.

嗜热菌DSM 13965磷酸三酯酶样内酯酶的真核表达、纯化和性质表征

试验以来源于嗜热菌DSM 13965的磷酸三酯酶样内酯酶基因在毕赤酵母GS115中进行表达,旨在得到嗜热磷酸三酯酶样内酯酶,经组氨酸标签镍柱法纯化后,从底物非专一性、热稳定性、最适温度及最适pH、pH稳定性等方面进行酶的性质表征。结果表明:嗜热菌磷酸三酯酶样内酯酶具有水解磷酸三酯与内酯的双重水解能力;最适温度为75℃;最适pH为7;在75℃下半衰期为8 h,在碱性条件下的稳定性高于酸性条件。因此嗜热磷酸三酯酶具有较高热稳定性及可溶性,能够在实际的工业应用中抵抗苛刻的工业生产条件,因而具有更好的应用潜力。