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重组大鼠14-3-3γ蛋白在大肠杆菌中的融合表达与分离纯化
1
作者
彭少君
何明
周复辉
《郑州大学学报(医学版)》
CAS
北大核心
2006年第1期58-60,共3页
目的:利用分子克隆技术在原核细胞中研究14-3-3γ融合蛋白的表达及分离纯化。方法:采用RT-PCR法从大鼠心肌组织中扩增14-3-3γcDNA编码区,并将其重组于谷胱甘肽硫转移酶(GST)融合蛋白表达质粒pGEX-KG中,免疫印迹法检测表达产物。结果:...
目的:利用分子克隆技术在原核细胞中研究14-3-3γ融合蛋白的表达及分离纯化。方法:采用RT-PCR法从大鼠心肌组织中扩增14-3-3γcDNA编码区,并将其重组于谷胱甘肽硫转移酶(GST)融合蛋白表达质粒pGEX-KG中,免疫印迹法检测表达产物。结果:经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导表达,表达产物的蛋白量约为菌体总蛋白的27.08%,相对分子质量为56000左右。能与抗鼠14-3-3γ多克隆抗体特异性结合。结论:表明成功构建了GST-14-3-3γ融合蛋白载体,在大肠杆菌中有高效表达,并具有良好的免疫反应性。
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关键词
重组
14—3—3γ蛋白
原核表达
GST-融合
蛋白
分离纯化
多克隆抗体
大鼠
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职称材料
14-3-3γ对烧伤及LPS诱导所致大鼠心肌损伤的保护作用
2
作者
刘丹
尹东
+3 位作者
严广华
孙惦
许旻
何明
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第7期1160-1165,共6页
目的:研究14-3-3γ在烧伤及脂多糖(LPS)引起的心肌损伤中的保护作用。方法:体内实验建立大鼠烧伤及LPS损伤模型,检测3、6、12、24 h各时点心功能及心肌细胞14-3-3γ蛋白表达水平的改变;体外实验采用新生大鼠心肌细胞,构建pFLAG-14-3-3...
目的:研究14-3-3γ在烧伤及脂多糖(LPS)引起的心肌损伤中的保护作用。方法:体内实验建立大鼠烧伤及LPS损伤模型,检测3、6、12、24 h各时点心功能及心肌细胞14-3-3γ蛋白表达水平的改变;体外实验采用新生大鼠心肌细胞,构建pFLAG-14-3-3γ质粒,于LPS损伤前24 h转染至心肌细胞,实验结束后检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,MTT法测定细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,线粒体肿胀实验检测线粒体通透性转换孔(mPTP)开放。结果:烧伤及LPS损伤模型大鼠心电图ST段均有明显改变,心肌细胞14-3-3γ蛋白表达水平均显著升高。转染了pFLAG-14-3-3γ质粒的心肌细胞能明显对抗随后的LPS损伤,与未转染组比较,14-3-3γ能明显提高细胞存活率,降低LDH活性,减少细胞凋亡,抑制mPTP的开放。结论:14-3-3γ可能通过抑制mPTP的开放对烧伤及LPS所致的心肌损伤起保护作用。
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关键词
14—3—3γ蛋白
脂多糖类
烧伤
心肌
线粒体通透性转换孔
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职称材料
题名
重组大鼠14-3-3γ蛋白在大肠杆菌中的融合表达与分离纯化
1
作者
彭少君
何明
周复辉
机构
宜春学院医学院生物化学与分子生物学教研室
江西医学院药理学教研室
宜春学院医学院生理学教研室
出处
《郑州大学学报(医学版)》
CAS
北大核心
2006年第1期58-60,共3页
基金
国家自然科学基金资助项目30460048
文摘
目的:利用分子克隆技术在原核细胞中研究14-3-3γ融合蛋白的表达及分离纯化。方法:采用RT-PCR法从大鼠心肌组织中扩增14-3-3γcDNA编码区,并将其重组于谷胱甘肽硫转移酶(GST)融合蛋白表达质粒pGEX-KG中,免疫印迹法检测表达产物。结果:经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导表达,表达产物的蛋白量约为菌体总蛋白的27.08%,相对分子质量为56000左右。能与抗鼠14-3-3γ多克隆抗体特异性结合。结论:表明成功构建了GST-14-3-3γ融合蛋白载体,在大肠杆菌中有高效表达,并具有良好的免疫反应性。
关键词
重组
14—3—3γ蛋白
原核表达
GST-融合
蛋白
分离纯化
多克隆抗体
大鼠
Keywords
recombined
14
-
3
-
3γ
protein
prokaryotic expression
GST-fusion protein
purification
polyclonal antibody
rat
分类号
Q782 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
14-3-3γ对烧伤及LPS诱导所致大鼠心肌损伤的保护作用
2
作者
刘丹
尹东
严广华
孙惦
许旻
何明
机构
南昌大学医学院
南昌大学第二附属医院江西省分子医学重点实验室
出处
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第7期1160-1165,共6页
基金
国家自然科学基金资助项目(No.30460048
No.81072632
+2 种基金
No.81160402
No.81100104)
博士后基金资助项目(No.20110491496)
文摘
目的:研究14-3-3γ在烧伤及脂多糖(LPS)引起的心肌损伤中的保护作用。方法:体内实验建立大鼠烧伤及LPS损伤模型,检测3、6、12、24 h各时点心功能及心肌细胞14-3-3γ蛋白表达水平的改变;体外实验采用新生大鼠心肌细胞,构建pFLAG-14-3-3γ质粒,于LPS损伤前24 h转染至心肌细胞,实验结束后检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,MTT法测定细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,线粒体肿胀实验检测线粒体通透性转换孔(mPTP)开放。结果:烧伤及LPS损伤模型大鼠心电图ST段均有明显改变,心肌细胞14-3-3γ蛋白表达水平均显著升高。转染了pFLAG-14-3-3γ质粒的心肌细胞能明显对抗随后的LPS损伤,与未转染组比较,14-3-3γ能明显提高细胞存活率,降低LDH活性,减少细胞凋亡,抑制mPTP的开放。结论:14-3-3γ可能通过抑制mPTP的开放对烧伤及LPS所致的心肌损伤起保护作用。
关键词
14—3—3γ蛋白
脂多糖类
烧伤
心肌
线粒体通透性转换孔
Keywords
14
-
3
-
3
T protein
Lipopolysaccharides
Burns
Myocardium
Mitochondrial permeability tran- sition pore
分类号
R363 [医药卫生—病理学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
重组大鼠14-3-3γ蛋白在大肠杆菌中的融合表达与分离纯化
彭少君
何明
周复辉
《郑州大学学报(医学版)》
CAS
北大核心
2006
0
下载PDF
职称材料
2
14-3-3γ对烧伤及LPS诱导所致大鼠心肌损伤的保护作用
刘丹
尹东
严广华
孙惦
许旻
何明
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012
0
下载PDF
职称材料
已选择
0
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