14-去氧穿心莲内酯/β-环糊精包合作用的研究

目的研究β-环糊精对14-去氧穿心莲内酯的包合作用。方法采用微波辅助饱和水溶液法制备14-去氧穿心莲内酯-β-环糊精包合物,紫外分光光度法测定包合物的包合常数,并确定14-去氧穿心莲内酯β-环糊精的包合比例,红外分光光度法及核磁共振法确证包合物的形成。结果14-去氧穿心莲内酯与β-环糊精形成了包合物,包合常数为1315.789mol·L-1,包合比例为1∶1。结论β-环糊精可以包合14-去氧穿心莲内酯,且包合效果较好。

超滤法和HPLC法测定14-去氧穿心莲内酯的血浆蛋白结合率

目的测定14-去氧穿心莲内酯在大鼠与人血浆中的蛋白结合率。方法超滤法和HPLC法测定14-去氧穿心莲内酯在大鼠与人血浆中的血浆蛋白结合率。结果 14-去氧穿心莲内酯与大鼠和人血浆中的平均血浆蛋白结合率分别为(93.88±2.16)和(95.55±0.83)%。结论 14-去氧穿心莲内酯与大鼠和人血浆蛋白均具有很强的结合能力,而且无明显的浓度依赖性。

14-去氧穿心莲内酯-β-环糊精包合机制的研究

目的从包合比例、主客体分子间相互作用、包合部位和包合稳定性方面研究阐明14-去氧穿心莲内酯和β-环糊精形成包合物的机制。方法采用差示热分析法确证包合物的形成,紫外法测定包合常数并计算热力学常数,IR、1H-NMR确证包合部位。结果包合常数(Ka)值为1 292.631 L/mol;包合过程ΔG=-16.854 8;ΔH=-25.532;ΔS=-0.029 12。由IR和1H-NMR可以看出包合物中14-去氧穿心莲内酯五元内酯环及十氢萘环部分发生了变化。结论形成包合物的主客体比例为1∶1,范德华力在包合过程中起主要作用,包合部位为十氢萘环及五元内酯环,形成的包合物常温下比较稳定。

HPLC-ELSD测定穿心莲超分子提取物中三种穿心莲内酯的含量

目的建立穿心莲超分子提取物中穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯和14-去氧穿心莲内酯的含量测定方法。方法HPLC—ELSD；色谱柱：Agilent ZORBAX Extent—C18（4．6mm×250mm，5μm）；检测器：蒸发光散射检测器（ELSD）；流动相：乙腈-水，线性梯度洗脱，流速0．8mL·min^-1，柱温：40℃。结果穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯和14-去氧穿心莲内酯线性范围分别为0．920～9．200μg（r=0．9996），0．397～3．952μg（r=0．9993）和0．395～3．936μg（r=0．9993）；三者的回收率分别为98．9％、97．8％和98．4％，RSD分别为1．1％、2．2％和2．1％（n=6）。结论本法简便，快捷，结果真实可靠，可用于穿心莲超分子提取物穿心莲内酯等有效成分的含量测定。

14-脱羟-11,12-二脱氢穿心莲内酯对1型糖尿病大鼠急性心肌缺血的保护作用

目的观察14-脱羟-11,12-二脱氢穿心莲内酯对1型糖尿病急性心肌缺血大鼠心肌组织的保护作用。方法选取50只SD大鼠分为正常组和实验组,正常组10只大鼠,实验组40只大鼠均一次性腹腔注射1%链脲佐菌素(STZ)55 mg/kg,制造1型糖尿病动物模型,后选取造模成功的30只大鼠随机分为模型组、药物低剂量组、药物高剂量组,每组10只。药物低、高剂量组分别给予14-脱羟-11,12-二脱氢穿心莲内酯100 mg·kg^(-1)·d^(-1)、200 mg·kg^(-1)·d^(-1),正常组和模型组分别腹腔注射等体积的0.9%氯化钠注射液,连续给药14 d。给药结束后24h,除正常组外,各组大鼠均皮下注射异丙肾上腺素(ISO)5 mg/kg,记录注射异丙肾上腺素后大鼠的Ⅱ导心电图,根据ST段(J点)的偏移判断心肌缺血的程度。断尾取血,测空腹血糖;腹主动脉取血,检测生化指标,苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠心肌组织的形态变化,蛋白质印迹法检测心肌核因子(NF)-_κBp65的表达,免疫组织化学检测肿瘤坏死因子(TNF)-α的表达量。结果 14-脱羟-11,12-二脱氢穿心莲内酯100 mg·kg^(-1)·d^(-1)、200 mg·kg^(-1)·d^(-1)组均能降低1型糖尿病大鼠急性心肌缺血时的空腹血糖,可降低肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH1)(P<0.05),200 mg·kg^(-1)·d^(-1)组能显著改善糖尿病急性心肌缺血大鼠心电图ST段的偏移程度(P<0.01),100 mg·kg^(-1)·d^(-1)组对ST段的偏移改善不明显(P>0.05)。100 mg·kg^(-1)·d^(-1)组、200 mg·kg^(-1)·d^(-1)组均能改善大鼠的心肌组织病理改变,显著减少TNF-α的表达(P<0.05)和NF-_κBp65的表达(P<0.05)。结论 14-脱羟-11,12-二脱氢穿心莲内酯能降低糖尿病急性心肌缺血大鼠心肌组织中NF-_κBp65、TNF-α的表达,改善心肌组织的损伤。

穿心莲内酯酰胺类衍生物的合成及其COX-2表达抑制活性

目的:合成穿心莲内酯酰胺类衍生物并研究其对环氧化酶-2(COX-2)表达的抑制活性。方法:根据穿心莲内酯类似物具有与穿心莲内酯相似的生物活性及生物电子等排原理,以穿心莲内酯的3种类似物为原料,在无水甲醇中,经氯化氢气体醇解、酰胺化生成目标化合物。按蛋白质印迹免疫分析法(Western blot)测试此类衍生物对脂多糖诱导的小鼠巨噬细胞中COX-2的表达抑制活性。结果与结论:合成了未见文献报道的12个穿心莲内酯酰胺类衍生物,目标化合物结构经IR,1HNMR,MS与元素分析确证。部分化合物进行了药理活性测试,其中1个目标化合物、2个中间体与穿心莲内酯的抑制活性相当。

新型穿心莲内酯衍生物AL-1的定性定量方法研究

目的建立穿心莲内酯衍生物14-硫辛酰-3,19-二羟基-穿心莲内酯(AL-1)的定性定量研究方法。方法采用化学显色法和薄层色谱鉴定其理化性质,采用高效液相色谱法进行定性定量分析,色谱柱为Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.05%磷酸二氢钾缓冲液(77∶23),流速1.0 mL.min-1,检测波长224 nm,柱温30℃。结果 AL-1的峰面积与浓度线性关系良好,回归方程为:y=18.5x-36.08,r=0.999,线性范围0.025～160μg.mL-1,平均加样回收率为97.6%,RSD为2.4%。结论本法简便、准确、可靠,可作为AL-1的定性定量方法。

两个穿心莲内酯苷的波谱学研究

利用柱色谱对穿心莲地上部分的提取物进行分离,得到3,14-二去氧穿心莲内酯苷和14-去氧穿心莲内酯苷。利用核磁共振氢谱(1H-NMR)、碳谱(13C-NMR)以及双量子滤波相关谱(DQFCOSY)、总相关谱(TOCSY)、异核多量子相干谱(HMQC)、异核多键相关谱(HMBC),解析这两个化合物的结构。确定了1H-NMR的氢信号和13C-NMR的碳信号的归属,并且用NOESY对3,14-二去氧穿心莲内酯苷的立体结构进行了研究。

RP-HPLC法同时测定复方苦木消炎片中5种成分

目的建立RP-HPLC法同时测定复方苦木消炎片（穿心莲和苦木）中5种成分的含有量。方法该药物50%乙醇提取液的分析采用Agilent Eclipse Plus C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）;流动相乙腈（A）-0.1%磷酸（B）,梯度洗脱;体积流量1.0 m L/min;柱温25℃;检测波长254 nm（0~26 min,4-甲氧基-5-羟基铁屎米酮）、225 nm（26~40 min,穿心莲内酯）、205 nm（40~55 min,新穿心莲内酯、去氧穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯）。结果4-甲氧基-5-羟基铁屎米酮、穿心莲内酯、新穿心莲内酯、去氧穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯分别在0.055~1.378、0.099~2.470、0.045~1.115、0.041~1.030、0.073~1.813μg范围内呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为98.6%、99.1%、97.1%、101.0%、97.8%,RSD（n=6）分别为1.3%、0.98%、1.3%、1.6%、1.7%。结论该方法简便快捷,可用于复方苦木消炎片的质量控制。

玄参的化学成分研究

利用正、反相硅胶以及各种色谱技术进行分离,经理化性质和光谱分析鉴定中药玄参(Scrophularia ningpoensis)有效成分。从玄参(S.ningpoensis)根的乙醇提取物中分离了8个化合物,分别鉴定为14-去氧-12(R)-磺酸基穿心莲内酯(14-deoxy-12(R)-sulfo and rographolide,Ⅷ)、肉桂酸(cinnamic acid,Ⅰ)、对羟基肉桂酸(p-hydroxycinnamic acid,Ⅱ)、丁二酸(succinic acid,Ⅲ)、β-谷甾醇(β-sitosterol,Ⅳ)、胡萝卜甙(daucosteol,Ⅴ)、葡萄糖(gluose,Ⅵ)、熊果酸(ursolic acid,Ⅶ)。Ⅷ为在玄参中首次发现的天然化合物。

基于体内外相关性的穿心莲片内酯成分溶出度测定条件的筛选

为提高穿心莲片的质量控制水平,建立与体内吸收具有良好相关性的体外溶出度测定方法,本试验以穿心莲片中的活性内酯类成分为研究对象,首先采用HPLC法测定了穿心莲片中穿心莲内酯、新穿心莲内酯、14-去氧穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯在不同pH值溶出介质(pH 1.0盐酸、pH 4.5乙酸盐缓冲液、pH 6.8磷酸盐缓冲液和水)及不同转速(50、75和100 r/min)条件下的溶出曲线;然后采用LC-MS/MS法测定Beagle犬口服穿心莲片后4种活性内酯类成分在不同时间点的血药浓度。利用Phoenix软件分别拟合穿心莲片中4种内酯的体外溶出和体内吸收过程,考察不同条件所得的体外溶出率与体内吸收分数的相关性,以确定与体内吸收具有最好相关性的体外溶出度测定条件。结果显示,4种穿心莲内酯在以pH 4.5乙酸盐缓冲液为溶出介质、转速100 r/min条件下测得的溶出率与体内吸收分数的相关性最佳,表明该条件为评价穿心莲片体外溶出的合理条件,可用来评价穿心莲片的质量。

穿心莲内酯衍生物对花生四烯酸致炎抑制作用的研究

目的:研究穿心莲内酯衍生物对花生四烯酸致炎抑制作用。方法:通过花生四烯酸(AA)致小鼠耳肿胀实验研究穿心莲内酯衍生物不同剂量(230,460和920 mg·kg-1)对耳肿胀的抑制作用,在细胞水平研究穿心莲内酯衍生物(12.5,25和50μmol·L-1)对环氧酶-2(COX-2)和5-脂氧酶(5-LOX)表达和前列腺素E2(PGE2)和白三烯B4(LTB4)的产生的影响。结果:穿心莲内酯衍生物(460和920 mg·kg-1)能够抑制花生四烯酸致小鼠耳肿胀(P<0.01)、耳片中前列腺素E2(PGE2)和白三烯B4(LTB4)的产生(P<0.05)。在细胞水平穿心莲内酯衍生物(25和50μmol·L-1)能够抑制环氧酶-2(COX-2)和5-脂氧酶(5-LOX)表达(P<0.001)和前列腺素E2(PGE2)和白三烯B4(LTB4)的产生(P<0.001)。结论:穿心莲内酯衍生物对花生四烯酸致炎有抑制作用。

小桃儿七中的1个新化合物

目的研究小桃儿七Helleborus thibetanus的化学成分。方法运用硅胶柱色谱及重结晶等方法进行分离纯化,根据理化性质和核磁共振波谱对化合物进行结构鉴定。结果从小桃儿七乙醇提取物中分离得到1个新化合物,鉴定为14β-羟基-3β-[(β-D-葡萄吡喃糖基)氧]-5α-蟾酥甾-20,22-二烯(1)。结论化合物1为新化合物,命名为铁筷子苷A,属于蟾蜍二烯羟酸内酯类强心苷类化合物。

蟾皮中的蟾蜍甾烯类成分及其细胞毒活性研究

目的研究蟾皮(中华大蟾蜍Bufo bufo gargarizans的干燥皮)中的蟾蜍甾烯类成分及其细胞毒活性。方法利用硅胶、ODS、凝胶、高效液相色谱等方法对中药蟾皮的化学成分进行分离,运用IR、UV、NMR、MS及单晶X-衍射等波谱学方法对分离得到的化合物进行结构鉴定,采用MTT法测试化合物对人肝癌HepG2细胞、人非小细胞肺癌A549细胞及人宫颈癌He La细胞的增殖抑制活性。结果从蟾皮95%乙醇提取物的氯仿萃取部位共分离鉴定了14个蟾蜍甾烯类成分,分别为3,23-二羟基-γ-内酯-24-去甲-14,20(22)-二烯-21-胆酸(1)、3-表-酯蟾毒配基(2)、3-表-去乙酰华蟾蜍精(3)、3-表-蟾蜍灵(4)、3-氧-去乙酰华蟾蜍精(5)、3-氧-蟾蜍它灵(6)、3-氧-伪沙蟾蜍精(7)、3-oxo-Δ4(5)-resibufogenin(8)、3-oxo-Δ4(5)-cinobufotalin(9)、3-dehydroscillarenin(10)、3-氧-毛地黄毒苷配基(11)、digirezigenin(12)、bufogargarizin A(13)、bufogargarizin B(14)。化合物6、9、10对Hep G2、A549及He La细胞具有显著的增殖抑制活性,半数抑制浓度(IC50)为0.11~1.67μmol/L。结论化合物1为新天然产物,并首次报道其核磁数据;化合物1~14均为首次从蟾皮中分离得到;化合物6、9、10具有显著的细胞毒活性。

炎琥宁注射液治疗幼儿急疹87例疗效分析

幼儿急疹（exanthema subitum,ES）是婴幼儿常见出疹性热病,主要是人疱疹病毒6型（HHV-6）B种感染所致,少数是HHV-7型感染,也叫婴儿玫瑰疹。临床上以突起发热,热退疹出为特点。HHV-6属于有包膜的双链DNA病毒,呈球形,由包膜和核壳体构成,HHV-6有HHV-6A和B两种变异株。HHV-6主要嗜CD4＋T淋巴细胞,能感染表面表达CD 4的多种组织细胞。幼儿急疹目前临床上没有特效药物治疗,治疗原则以对症处理为主。我科采用炎琥宁治疗幼儿急疹取得较好疗效,现报告如下。