烟粉虱MED隐种14-3-3基因克隆及时空表达谱分析

【目的】真核生物中,14-3-3蛋白是一类可与多种蛋白互作的调节蛋白,能够参与信号转导、免疫反应、生长发育和胁迫响应等。本研究旨在克隆烟粉虱Bemisia tabaci MED隐种的14-3-3基因的全长cDNA序列,了解该基因编码的蛋白特征和该基因的时空表达模式。【方法】使用RT-PCR技术克隆烟粉虱MED隐种的14-3-3基因全长cDNA序列,通过生物信息学软件和在线网站分析14-3-3基因的生物学特性;使用RT-qPCR测定14-3-3基因在烟粉虱MED隐种不同发育阶段(卵、1-4龄若虫和成虫)、雌雄成虫以及雌成虫头、胸和腹中的表达量。【结果】克隆并鉴定了烟粉虱MED隐种14-3-3基因的两个亚型:Bt14-3-3 epsilon(GenBank登录号:XM_019046102.1)和Bt14-3-3 zeta(GenBank登录号:XM_019057395.1),开放阅读框(ORFs)分别长771和744 bp,分别编码256和247个氨基酸,编码的蛋白是无跨膜螺旋区和信号肽的亲水性蛋白,其二级结构主要由α旋螺旋组成。系统发育树分析表明,Bt14-3-3 epsilon与褐飞虱Nilaparvata lugens、温带臭虫Cimex lectularius和茶翅蝽Halyomorpha halys的14-3-3 epsilon聚为一支,同源性较高;Bt14-3-3 zeta与褐飞虱的14-3-3 zeta的亲缘关系更近。RT-qPCR结果表明,Bt14-3-3 epsilon和Bt14-3-3 zeta在烟粉虱MED隐种的卵、雌成虫和雌成虫腹部中的表达量较高。【结论】明确了烟粉虱MED隐种14-3-3基因的两个亚型的全长序列、编码蛋白特征及时空表达特点,为后续研究14-3-3蛋白的分子功能奠定了基础。

14-3-3γ在子宫肌瘤中的表达及其临床意义

目的研究不同月经周期子宫肌瘤中14-3-3γ蛋白的表达情况及其与雌、孕激素受体、子宫肌瘤临床病理参数之间的关系。方法收集行子宫全切或次切的子宫肌瘤患者65例，取子宫肌瘤和正常子宫肌层组织，标本均经病理确诊并根据子宫内膜确定月经周期。免疫组织化学方法观察14-3-3γ的定位情况。Western blot方法检测组织中14-3-3γ、EROC、ERβ、PR蛋白的表达情况，分析14-3-3γ与月经周期、患者年龄、子宫肌瘤大小、肌瘤位置、肌瘤类型及与ERα、ERβ、PR等表达的相关性。结果（1）子宫肌瘤中14-3-3γ表达水平在不同月经周期及不同患者年龄、肌瘤大小、肌瘤类型和肌瘤位置中均无统计学差异（均P〉0．05）。（2）子宫肌瘤中14-3-3γ表达水平明显低于正常子宫肌层（P〈0．05），尤其是增殖期和分泌期。年龄〈48岁组、子宫肌瘤大小4～8cm组、多发性子宫肌瘤组和肌壁间子宫肌瘤组中，子宫肌瘤中14-3-3γ表达水平均低于正常子宫肌层组织（均P〈0．05）。（3）子宫肌瘤中ERα、ERβ、PR蛋白表达水平较正常子宫肌层增高（均P〈0．05），且子宫肌瘤中14-3-3γ表达水平与ERα呈负相关性（r=-0．305，P〈0．05），而与ERα、PR的表达无相关性（r=-0．157、-0036，均P〉0．05）。结论14-3-3γ在子宫肌瘤中的表达不受月经周期、患者年龄及子宫肌瘤大小、类型或位置而改变。14-3-3γ在子宫肌瘤中的表达低于正常子宫肌层组织，其在生育年龄妇女和4～8cm大小子宫肌瘤、多发肌瘤和肌壁间肌瘤中的作用更为重要，该作用与雌激素受体α相关。

铁皮石斛14-3-3基因家族鉴定及表达分析

【目的】14-3-3蛋白,亦称通用调节因子(GRF),由多基因家族编码,在植物生长发育和逆境应答发挥关键的作用。鉴定铁皮石斛(Dendrobium officinale)GRF基因家族,为铁皮石斛GRF基因功能研究及遗传改良提供理论依据。【方法】通过生物信息学的方法鉴定铁皮石斛14-3-3家族成员,分析其理化性质、染色体定位、系统进化发育、基因结构和启动子顺式作用元件等,同时通过荧光定量PCR技术检测它们在不同组织、低温处理及盐胁迫处理后的表达量。【结果】铁皮石斛有17个GRF家族成员,分为ε类和非ε类亚族,不均匀地分布在7条染色体上,且存在7对串联复制基因。同一亚族成员基因结构、保守基序和蛋白质二级结构相类似。DoGRF家族基因的启动子区域存在大量激素和环境胁迫应答相关的调控元件。DoGRF家族基因在铁皮石斛各组织中均有表达,具有组织表达特异性,大多数基因在花器官中表达最高,其次是茎和根。同时,在低温处理、盐胁迫处理下呈现差异化表达,可能受到低温和盐胁迫的调控,特别是DoGRF2在铁皮石斛逆境应答过程中起着关键的作用。【结论】在全基因组水平从铁皮石斛中鉴定出17个DoGRF家族成员,不同基因对非生物胁迫响应不一,并具有器官表达特异性。DoGRF2对低温和盐胁迫呈现正向响应。

滋养细胞分泌14-3-3 τ蛋白对子宫内膜基质细胞表达整合素α_vβ_3蛋白的影响

目的探讨滋养细胞分泌14-3-3τ蛋白对子宫内膜基质细胞容受性分子整合素αvβ3表达的影响。方法RNA干扰技术下调人绒癌滋养细胞株Be Wo细胞14-3-3τ蛋白的表达。Western blot法检测Be Wo细胞及培养液中14-3-3τ蛋白的表达。建立14-3-3τ蛋白表达下调的Be Wo细胞与人子宫内膜基质细胞(endometrial stromal cells,ESC)的共培养体系,Western blot法检测共培养体系培养液中14-3-3τ蛋白的表达,以及ESC容受性分子整合素αvβ3的表达变化。结果与si RNA阴性对照组相比,特异性si RNA显著下调Be Wo细胞和培养液中14-3-3τ蛋白的表达(P<0.05)。共培养体系中,与si RNA阴性对照组相比,与14-3-3τ蛋白表达下调的Be Wo细胞共培养的ESC整合素αvβ3的表达显著上调(P<0.05),提示ESC容受性增加。与单独培养的ESC相比,培养液中添加14-3-3τ重组蛋白的ESC培养24 h后整合素αvβ3的表达显著下调(P<0.05),提示ESC容受性降低。结论14-3-3τ蛋白可以被滋养细胞分泌至细胞外,并可能发挥调控ESC容受性的作用,但其作用机制仍需进一步研究。

子宫肌瘤与正常子宫肌层中14-3-3γ蛋白的表达及与雌、孕激素受体、临床病理参数相关性研究

目的分析子宫肌瘤与正常子宫肌层中14-3-3γ蛋白的表达及与雌、孕激素受体、临床病理参数的相关性。方法选取2017年1月至2019年1月于浙江省丽水市中心医院接受子宫切除术的136例子宫肌瘤患者作为研究对象。采集子宫肌瘤及正常子宫肌层标本,使用免疫组织化学方法和Western blot方法检测14-3-3γ蛋白、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)表达情况,分析14-3-3γ蛋白与ER、PR的相关性,比较不同组织14-3-3γ蛋白的表达与临床病理参数的关系。结果子宫肌瘤14-3-3γ蛋白阳性率低于正常子宫肌层,ER、PR阳性率均高于正常子宫肌层,差异均具有统计学意义(均P<0.05);子宫肌瘤及正常子宫肌层在不同月经周期中的14-3-3γ蛋白表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05),子宫肌瘤14-3-3γ蛋白表达水平低于正常子宫肌层,ER和PR表达水平均高于正常子宫肌层,差异均具有统计学意义(均P<0.05);经Pearson相关性分析,子宫肌瘤14-3-3γ蛋白与ER、PR均呈负相关(均P<0.05);年龄≥50岁、肿瘤大小<4cm及≥8cm、肌瘤类型为单发和肌瘤位置为黏膜下及浆膜下的子宫肌瘤及正常子宫肌层中14-3-3γ蛋白表达水平比较,差异均无统计学意义(均P>0.05);年龄<50岁、肿瘤大小4cm~<8cm、肌瘤类型为多发和肌瘤位置为肌壁间的子宫肌瘤中的14-3-3γ蛋白表达水平均低于正常子宫肌层,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。结论子宫肌瘤中14-3-3γ蛋白表达水平较正常子宫肌层降低,与ER、PR均呈负相关,可能是子宫肌瘤发病机制的抑制性因素,值得进一步研究应用。

IGFBP-3、ER、PR在子宫肌瘤中表达的研究

目的探讨胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)与子宫肌瘤的关系。方法子宫肌瘤患者38例(肌瘤组),正常妇女32例(对照组),分别采用酶联免疫吸附法、化学发光免疫法检测血清IGFBP-3、雌激素(E2)、孕激素(P)浓度,用免疫组化法检测子宫肌瘤患者子宫肌层和子宫肌瘤组织中的IGFBP-3、ER、PR的表达。结果肌瘤组患者血清IGFBP-3浓度低于对照组(P<0.05),E2、P浓度两组差异无统计学意义(P>0.05);IGFBP-3在肌瘤组织中表达较肌层组织中表达减弱(P<0.05);ER、PR在肌瘤组织中表达较肌层组织中表达增强(P<0.05);IGFBP-3与ER表达变化趋势呈负相关(P<0.05);肌瘤组血清IGFBP-3浓度与IGFBP-3在子宫肌瘤组织中表达强度呈正相关(P<0.05)。结论子宫肌瘤患者血清及肌瘤组织中IGFBP-3水平均降低,ER、PR在肌瘤组织中表达较肌层组织中表达增强,推测IGFBP-3表达的下降、雌激素受体与孕激素受体水平的升高与子宫肌瘤的发生有关,调控IGFBP-3、ER、PR水平有可能成为子宫肌瘤病因学治疗的研究方向。

转化生长因子-β3与纤维连接蛋白在子宫肌瘤及子宫肌层内的表达水平与生物学意义

目的:探讨转化生长因子(TGF)-β3与纤维连接蛋白(FN)在绝经或未绝经妇女子宫肌瘤及子宫肌层中表达的水平变化及其意义。方法:采用免疫组化法(SP)检测40例绝经后子宫肌瘤妇女(绝经组)、40例未绝经子宫肌瘤妇女(未绝经组)肌瘤组织及肌壁组织中的TGF-β3、FN的表达差异,同时将绝经组妇女根据肌瘤是否发生萎缩分为萎缩组(17例)、未萎缩组(23例)并进行上述指标的比较。结果:绝经组的肌瘤组织、肌壁组织中的TGF-β3表达评分分别为(3.11±0.78)分、(1.85±0.69)分均显著的低于未绝经妇女的(3.98±0.67)分、(2.31±0.82)分(P<0.05);两组妇女肌瘤组织和肌壁组织中的FN表达评分差异不显著(P>0.05)。子宫肌瘤萎缩和未萎缩患者的子宫肌瘤组织、肌壁组织中TGF-β3、FN表达在两组间差异均不显著(P>0.05),萎缩组和未萎缩组的肌瘤组织TGF-β3表达分别为(2.90±0.65)分、(3.32±0.74)分均显著的高于本组肌壁组织中的(1.85±0.67)分、(2.25±0.61)分(P<0.05);两组肌瘤和肌壁组织中的FN表达差异不显著(P>0.05)。结论:TGF-β3表达可能与患者绝经前后的激素水平改变有关。

TGF-β3、FN在绝经后子宫肌瘤及肌壁组织中的表达及意义

目的探讨转换生长因子(TGF)-β3、纤维连接蛋白(FN)在子宫肌瘤及子宫肌层内表达水平与生物学意义。方法随机选取100例绝经后子宫肌瘤患者,以萎缩性与否为标准分为两组,并对研究对象体内TGF-β3、FN水平以免疫组化SP法进行检测;TGF-β3、FN在组织内表达量采用免疫反应评分进行半定量测定,以积分形式表示。结果非萎缩组TGF-β3相对表达量比较中,子宫肌瘤中(3.68±1.94)明显高于肌壁中(2.25±1.48)(P<0.05);萎缩组TGF-β3相对表达量中,子宫肌瘤组2.91±1.91,肌壁组织1.83±1.10(P>0.05)。在组间比较中,萎缩组TGF-β3相对表达量评分均大于非萎缩组,但无统计学意义(P>0.05)。非萎缩组FN相对表达量比较中,子宫肌瘤中(5.31±2.93),明显高于肌壁(3.94±2.13)(P<0.05);萎缩组TGF-β3相对表达量中,子宫肌瘤组4.86±2.43,肌壁组织为4.46±2.67(P>0.05)。在组间比较中,萎缩组FN相对表达量评分均大于非萎缩组,但无统计学意义(P>0.05);结论在妇女绝经后体内TGF-β3、FN相对表达量比较中,萎缩组子宫肌瘤组织中均高于肌壁组织,但两组间比较无统计学意义。绝经后子宫肌瘤增大与TGF-β3、FN含量有相关性。

14-3-3蛋白在卵巢子宫内膜异位囊肿中的表达及意义

目的:研究14-3-3蛋白各亚型mRNA及蛋白在卵巢子宫内膜异位囊肿(ECO)的表达,探讨14-3-3蛋白与ECO发生发展的关系。方法:取ECO患者的异位子宫内膜组织(实验组)和正常子宫内膜组织(对照组)标本各30例。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测两组中14-3-3蛋白各亚型mRNA的表达;对两组表达差异的亚型,采用Western blot法检测其蛋白表达。结果:14-3-3蛋白7种亚型在ECO异位子宫内膜组织和正常子宫内膜组织均有表达。ECO异位子宫内膜组织中14-3-3σ亚型mRNA及蛋白表达显著下调(P<0.05),14-3-3ε、ζ亚型mRNA及蛋白表达显著上调(P<0.01)。结论:ECO异位内膜组织中14-3-3σ表达显著下调,14-3-3ε和14-3-3ζ表达显著上调,提示这3种蛋白亚型均可能与ECO的发生发展有关。

芩连四物汤治疗子宫肌瘤的效果及对血清Ang-2和IGFBP-3的影响

目的:研究芩连四物汤治疗子宫肌瘤的效果及对血清血管生成素-2(Ang-2)和胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)的影响。方法:选取鹰潭市中医院门诊2021年6月—2022年6月收治的76例子宫肌瘤患者,采用随机信封法分对照组(n=38,予米非司酮治疗)与观察组(n=38,予米非司酮联合芩连四物汤治疗),两组患者均连续治疗3个月。比较两组临床疗效、中医症候积分、子宫体积及肌瘤长径、血清激素水平、血清Ang-2及IGFBP-3水平及不良反应发生情况。结果:观察组总有效率(97.37%)与对照组(81.58%)比较,差异无统计学意义(P>0.05);观察组中医症候积分总改善率(78.95%)高于对照组(47.37%),差异有统计学意义(P<0.05);治疗3个月后,观察组子宫体积小于对照组,肌瘤长径短于对照组,血清雌二醇(E2)、卵泡刺激素(FSH)、催乳素(PRL)及孕酮(P)均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗3个月后,观察组Ang-2低于对照组,IGFBP-3高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);观察组不良反应发生率为13.16%(5/38),较对照组的10.53%(4/38)略高,但两组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:芩连四物汤治疗子宫肌瘤能明显改善患者症状,缩小肌瘤,调节血清激素水平,降低Ang-2及升高IGFBP-3水平,临床应用效果显著且安全性良好。

子宫肌瘤组织中MMP-2、MLCK、SULT1A3表达及与子宫肌瘤发生的相关性

目的:分析基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、肌球蛋白轻链激酶(MLCK)和硫酸基转移酶1A3(SULT1A3)在子宫肌瘤组织中的表达及与子宫肌瘤发生发展的可能关系。方法:收集2019年1月-2021年6月在本院行手术切除治疗的子宫肌瘤患者60例子宫肌瘤组织和正常子宫组织,分别采用RT-PCR技术和免疫组化法测定MMP-2、MLCK、SULT1A3的mRNA及蛋白表达,分析各指标表达与子宫肌瘤发生的相关性。结果:子宫肌瘤组织MMP-2(1.61±0.23)、MLCK(11.87±1.60)的mRNA相对表达量均高于正常子宫组织(1.05±0.09、6.14±1.02),SULT1A3的mRNA相对表达量(0.69±0.11)低于正常子宫组织(1.65±0.44);子宫肌瘤组织中MMP-2蛋白阳性率(68.3%)、MLCK蛋白阳性率(76.7%)均高于正常子宫组织(25.0%、26.7%),子宫肌瘤组织SULT1A3蛋白阳性率(61.7%)低于正常子宫组织(100.0%)(均P<0.05)。mRNA表达,MMP-2与MLCK呈正相关,MMP-2、MLCK与SULT1A3均呈负相关性;蛋白表达,MMP-2与MLCK蛋白表达呈正相关,MMP-2、MLCK与SULT1A3蛋白表达均呈负相关性(均P<0.05)。结论:子宫肌瘤组织中MMP-2、MLCK呈高表达,SULT1A3呈低表达,且各指标具有相关性,这种异常表达可能与子宫肌瘤的发生有关。

转化生长因子-β_3在子宫肌瘤组织中的表达和消癥煎膏的干预作用

目的研究消癥煎膏对大鼠子宫肌瘤以及子宫肌瘤中TGF-β3的影响。方法造模大鼠60只,随机分成5组,每组12只:实验组消癥煎膏分高、中、低3个剂量组,直肠给药;中桂组,予桂枝茯苓胶囊溶液灌服,每次0.5 m l/kg;模型组。另设空白组12只,每天灌服0.9%生理盐水,0.5 m l/kg/次,以上各组均给药3次/d,共4周。停药后第1天内处死大鼠,立即取标本实验研究。结果治疗组大鼠子宫重量明显减轻,宫颈和宫体处最大直径显著缩小,与模型组比治疗组子宫系数降低明显;实验组3个剂量的TGF-β3水平与模型组比较P<0.05,有显著意义;中桂组与模型组比较,P<0.05;模型组与空白组比较,P<0.01,有非常显著意义。结论消癥煎膏能使子宫肌瘤缩小,明显降低TGF-β3表达,抑制子宫肌瘤细胞增殖,使肌瘤缩小,因此推测其内可能含有TGF-β抗体类物质在起作用。

子宫内膜癌组织叉头框转录因子O亚型3a与基质金属蛋白酶-14表达水平及相关性

目的检测子宫内膜癌中叉头框转录因子O亚型(FOXO)3a和基质金属蛋白酶(MMP)-14的表达。方法 63例行子宫内膜癌根治手术患者作为观察组,并留取术后组织,40例子宫内膜复杂性增生患者术后标本作为对照组,40例增生期子宫内膜诊刮标本作为正常对照组。采用免疫组化SP法检测3组中FOXO3a和MMP-14的表达。结果 FOXO3a和MMP-14在三组中的表达有统计学意义。观察组中FOXO3a和MMP-14的阳性率均与肌层浸润深度、淋巴结累犯密切相关,FOXO3a的阳性率与肿瘤的最大径密切相关。观察组中FOXO3a和MMP-14的表达呈负相关性。结论子宫内膜癌中FOXO3a低表达、MMP-14高表达对肿瘤的形成和进展可能有促进作用,二者具有负向协同作用。

绝经后子宫肌瘤、肌壁组织中TGF-β3、FN表达变化及意义

目的观察绝经后萎缩性、非萎缩性子宫肌瘤及肌壁组织中的转化生长因子(TGF)-β3及纤维连接蛋白(FN)表达变化,并探讨其意义。方法采用免疫组化SP法检测57例绝经后非萎缩性子宫肌瘤患者(A组)及20例绝经后萎缩性子宫肌瘤患者(B组)子宫肌瘤、肌壁组织中的TGF-β3及FN。应用免疫反应评分对各指标在组织中的表达进行定性半定量测定,以评分积表示TGF-β3、NF的相对表达量。结果 A组肌瘤中TGF-β3相对表达量为3.72±2.30,显著高于肌壁的2.19±1.57,P<0.05。B组子宫肌瘤、肌壁组织中TGF-β3相对表达量分别为2.65±1.89、1.90±1.08(P>0.05)。A组子宫肌瘤和肌壁中的TGF-β3表达均高于B组,但P均>0.05。A组子宫肌瘤中FN相对表达量为5.25±2.88,显著高于肌壁的3.89±2.08,P<0.05。B组子宫肌瘤、肌壁组织中FN相对表达量为4.75±2.65、4.30±2.77(P>0.05)。A组子宫肌瘤和肌壁中的FN表达量与B组相比,P均>0.05。结论绝经后非萎缩性子宫肌瘤组织中TGF-β3及FN表达较肌壁组织增高,但与绝经后萎缩性子宫肌瘤组织和肌壁组织相比差异无统计学意义。TGF-β3、NF的高表达可能与绝经后子宫肌瘤增大有关。

来曲唑通过下调bcl-2和上调caspase-3的表达促进人子宫肌瘤细胞调亡

目的探讨来曲唑对人子宫肌瘤细胞增殖和凋亡以及bcl-2和caspase-3表达的影响。方法来曲唑处理原代培养的人子宫肌瘤细胞,用MTT法测定细胞生长曲线,流式细胞术测定细胞凋亡率,放射免疫法测定培养基中雌二醇水平,用实时定量聚合酶链反应和蛋白印迹检测bcl-2和caspase-3表达。结果来曲唑呈浓度和时间依赖性抑制子宫肌瘤细胞的增殖,降低子宫肌瘤细胞的凋亡率,同时呈浓度依赖性降低子宫肌瘤细胞雌二醇的分泌。来曲唑呈浓度依赖性降低bcl-2的表达,增加caspase-3的表达。结论来曲唑抑制子宫肌瘤细胞的增殖,促进其凋亡,其机制可能与来曲唑减少雌二醇的分泌、降低bcl-2表达和增加caspase-3表达有关。

茶树花蕾14-3-3蛋白基因的分子克隆及差异表达分析

【目的】从分子水平研究茶树花蕾发育阶段的相关基因表达,了解茶树花蕾的发育机理,利用分子生物学技术抑制茶树的生殖生长、促进营养生长。【方法】利用cDNA-AFLP技术对茶树花蕾发育早期和晚期的差异表达进行分析。采用RACE技术克隆到花蕾发育晚期阶段特异表达的、在花蕾发育中可能起重要作用的14-3-3基因,通过RT-PCR和Western-blot方法研究该基因转录水平和蛋白质表达水平的特点。【结果】在测定的大约1110个茶树花蕾cDNA片段中,122个(10.9%)是差异性表达的,其中87个在发育晚期特异表达,包括茶树14-3-3蛋白基因(GenBank登录号:DQ444463),其全长为1072bp,包含1个由783个核苷酸组成的ORF,编码260个氨基酸,5′非翻译区和3′非翻译区分别有67和222个核苷酸,该基因与其它植物的14-3-3蛋白基因在核苷酸序列和推导的氨基酸序列方面均有着比较高的相似性。RT-PCR和Western-blot分析表明该基因在茶树的晚期发育花蕾中特异表达。【结论】14-3-3蛋白仅存在于茶树发育晚期的花蕾中。cDNA-AFLP技术能用于茶树花蕾不同发育时期的基因分离研究。

基因甲基化导致鼻咽癌组织14-3-3σ表达下调

为探讨14-3-3σ基因甲基化在鼻咽癌发病中的作用,以75例鼻咽癌活检组织和25例正常鼻咽黏膜活检组织作为研究对象,采用甲基化特异性聚合酶链式反应(MSP)检测14-3-3σ基因甲基化状态,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测14-3-3σmRNA表达,免疫组织化学染色检测14-3-3σ蛋白质表达.结果发现,鼻咽癌组织14-3-3σ基因完全甲基化、不完全甲基化和未甲基化的例数分别为4例、59例和12例,正常鼻咽黏膜组织不完全甲基化和未甲基化的例数分别为7例和18例,鼻咽癌14-3-3σ基因甲基化频率显著高于正常鼻咽黏膜组织(84%vs28%,χ2=28,P<0.05).RT-PCR和免疫组织化学染色结果显示:14-3-3σ基因完全甲基化的组织样本无14-3-3σ表达,不完全甲基化的组织样本14-3-3σ表达显著降低,14-3-3σ基因甲基化与鼻咽癌淋巴结转移及鼻咽癌临床分期正相关.研究结果表明,鼻咽癌组织14-3-3σ基因存在高频甲基化,14-3-3σ基因甲基化导致14-3-3σ表达降低或缺失,14-3-3σ表达水平与鼻咽癌淋巴结转移及其临床分期相关.

日本血吸虫(中国大陆株)信号蛋白14-3-3在原核细胞的高效融合表达和特性鉴定

目的 构建重组质粒pET2 8a -Sj14 - 3- 3,并在大肠杆菌中表达 ,检测表达产物的免疫活性。 方法 用亚克隆技术把Sj14 - 3- 3基因克隆至 pET2 8aT7启动子下游 ,转化大肠杆菌DH5α和BL2 1感受态细胞 ,经IPTG诱导表达 ,SDS -PAGE和Westernblot分析。结果 获得pET2 8a -Sj14 - 3- 3重组表达载体 ,SDS -PAGE和Westernblot显示Sj14 - 3- 3基因在 pET2 8a中表达的融合蛋白约为 32 4kDa ,与天然 14 - 3- 3蛋白具有相同的免疫活性。 结论 日本血吸虫信号蛋白14 - 3- 3在原核细胞中得以高效表达 ,表达产物具有免疫活性 。

菊芋14-3-3基因家族的鉴定及其对非生物胁迫响应的分析

[目的]本文旨在鉴定菊芋14-3-3基因家族成员并分析它们对高温、低温、盐和干旱胁迫响应的表达模式,为研究14-3-3蛋白功能及菊芋育种提供依据。[方法]采用克隆和生物信息学研究基因性质,采用RNA-seq数据分析和RT-qPCR研究基因对非生物胁迫的响应模式。[结果]从菊芋中克隆到14-3-3基因家族的10个成员HtGRF1—HtGRF10,GenBank登录号为OP132618—OP132627。根据进化关系将其分为2个亚家族:HtGRF1—HtGRF7属于非ε组,HtGRF8—HtGRF10属于ε组,通常形成同源或异源二聚体。组织表达分析表明,HtGRF2/3/6/9在芽、根、茎、叶中的表达丰度较高,HtGRF3/5/9在块茎发育过程中前高后低。综合分析根和叶中HtGRF对非生物胁迫响应时发现,HtGRF6表达水平在高温、盐和干旱胁迫下下降;HtGRF2/3/7/8/9表达水平在盐胁迫下下降,而在干旱胁迫下上升;HtGRF1表达水平在低温胁迫下上升;HtGRF4/5表达水平在干旱胁迫下下降;而HtGRF10表达水平变化不显著。[结论]菊芋14-3-3蛋白是一个高度保守的多基因编码家族,在菊芋的生长发育和适应复杂环境中起着重要作用。