α-硫辛酸对胰岛素抵抗HepG2细胞糖代谢紊乱的改善作用

目的:研究α-硫辛酸对胰岛素抵抗HepG2细胞糖代谢紊乱的改善作用。方法:采用MTT法测定25~1000μmol/Lα-硫辛酸对人肝癌细胞HepG2存活率的影响,以确定α-硫辛酸给药浓度。实验设阴性对照组、胰岛素抵抗组(1×10-7 mol/L胰岛素)、联合抵抗组(30μmol/L亚砷酸钠+1×10-8 mol/L胰岛素)和α-硫辛酸低、中、高浓度组。按分组加入α-硫辛酸作用HepG2细胞12 h后,再分别给予相应浓度的亚砷酸钠或/和胰岛素继续培养24 h。采用葡萄糖氧化酶法检测细胞葡萄消耗量,比色法检测细胞己糖激酶、丙酮酸激酶活性,蒽酮法检测细胞糖原含量,Westernblot法检测细胞中葡萄糖转运体4(GLUT4)、磷酸化糖原合成激酶3β(p-GSK3β)、GSK3β蛋白表达水平和磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)/Akt、p-GSK3β/GSK3β比值。结果:25、50、100μmol/L的α-硫辛酸对细胞存活率无明显影响(P>0.05),且细胞存活率均大于96%,故将其作为后续研究的低、中、高浓度。与阴性对照组比较,胰岛素抵抗组、联合抵抗组细胞葡萄糖消耗量、己糖激酶和丙酮酸激酶活性、糖原含量、GLUT4和p-GSK3β蛋白表达水平、p-Akt/Akt和p-GSK3β/GSK3β比值均显著降低,GSK3β蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)。与联合抵抗组比较,α-硫辛酸各浓度组细胞葡萄糖消耗量(α-硫辛酸低浓度组除外)、己糖激酶(α-硫辛酸低、中浓度组除外)和丙酮酸激酶(α-硫辛酸低、中浓度组除外)活性、糖原含量、GLUT4(α-硫辛酸低浓度组除外)、p-GSK3β蛋白表达水平和p-Akt/Akt(α-硫辛酸低、中浓度组除外)、p-GSK3β/GSK3β(α-硫辛酸低浓度组除外)比值均显著升高,GSK3β(α-硫辛酸低、中浓度组除外)蛋白表达水平均显著降低(P<0.05),且α-硫辛酸高浓度组细胞糖原含量、GLUT4蛋白表达水平、p-GSK3β/GSK3β比值和α-硫辛酸中、高浓度组细胞p-GSK3β蛋白表达水平的改善效果更明显(P<0.05)。结论:α-硫辛酸对胰岛素抵抗HepG2细胞的糖代谢紊乱具有一定的改善作用,其机制可能与增加葡萄糖消耗,增强糖代谢相关酶活性,提高糖原含量,上调Akt、GSK3β蛋白的磷酸化水平和GLUT4、p-GSK3β蛋白的表达水平,下调GSK3β蛋白的表达水平有关。

新型穿心莲内酯衍生物AL-1的定性定量方法研究

目的建立穿心莲内酯衍生物14-硫辛酰-3,19-二羟基-穿心莲内酯(AL-1)的定性定量研究方法。方法采用化学显色法和薄层色谱鉴定其理化性质,采用高效液相色谱法进行定性定量分析,色谱柱为Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.05%磷酸二氢钾缓冲液(77∶23),流速1.0 mL.min-1,检测波长224 nm,柱温30℃。结果 AL-1的峰面积与浓度线性关系良好,回归方程为:y=18.5x-36.08,r=0.999,线性范围0.025～160μg.mL-1,平均加样回收率为97.6%,RSD为2.4%。结论本法简便、准确、可靠,可作为AL-1的定性定量方法。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂抑制三阴性乳腺癌细胞增殖的实验研究

背景与目的:三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)是乳腺癌中的研究热点和治疗难点,目前尚无十分有效的靶向治疗药物。本研究旨在观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitor,HDACI)对TNBC细胞增殖的影响,探讨针对组蛋白去乙酰化酶(histonedeacetylase,HDAC)的治疗对TNBC治疗的可行性。方法:将HDACI辛二酰苯胺异羟肟酸(suberoylanilidehydroxamiC acid,SAHA)作用于TNBC细胞MDA-MB-468,用MTS比色法观察细胞生长情况;用流式细胞术(theflow cytometry,FCM)检测细胞周期分布、凋亡情况,以及P21、14-3-3σ、Cyclin D1和Cyclin A2蛋白的表达状况,并进行统计分析;同时用Western blot检测以上4种蛋白的表达情况。结果:MTS比色法显示,MDA-MB-468在加入SAHA 24 h后出现细胞生长抑制并逐渐凋亡,于72 h达高峰;FCM检测显示,在加入SAHA 48 h后MDA-MB-468出现S期细胞比例下降,细胞内Cyclin A2蛋白的表达量下降,Cyclin D1、P21和14-3-3σ蛋白的表达量上升,细胞凋亡率上升,与MDA-MB-468对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);Western blot检测结果显示,MDA-MB-468在SAHA加入48 h后Cyclin A2蛋白表达量下降,P21、14-3-3σ及Cyclin D1蛋白表达量上升。结论:SAHA是TNBC细胞增殖的高效抑制剂并促进其凋亡,其抑制作用有一定的时效关系;抑癌基因表达产物P21、14-3-3σ蛋白和周期素Cyclin D1、Cyclin A2参与了SAHA对细胞增殖周期的调控。

一种从L型取代苯丝氨酸酯制备D-（-）-苏式-1-R-取代苯基-2-二氯乙酰氨基-3-氟-1-丙醇的方法

本发明公开了以工业生产拆分废液中提取和纯化的L型取代苯丝氨酸酯为原料经分步反应得到D-(-)-苏式-1-R-取代苯基-2-二氯乙酰氨基-3-氟-1-丙醇的方法。该方法简便，产率高，成本低，而且构型转化完全，是-种从L型取代苯丝氨酸酯向D型的氟甲砜霉素转化的有效简易方法，解决了利用拆分法制造氟尼康的无效对映体的废弃问题，减少环境污染，具有实用的经济价值。

葛根素对膳食诱导的高胆固醇血症大鼠的血脂调节作用

目的:观察葛根素对膳食诱导的高胆固醇血症大鼠的血脂调节作用,并对其机制进行探索。方法:SD大鼠随机分为3组,正常组、模型组和葛根素组。模型组和葛根素组均给予富含胆固醇的饲料4周,葛根素组每天灌喂葛根素溶液(300mg·kg-1·d-1)。检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)的含量。荧光定量RT-PCR分析羟基-3-甲基戊二酰CoA还原酶(HMGR),羊毛固醇14α-去甲基酶(CYP51),7α-羟化酶(CYP7A1)的mRNA转录水平。结果:葛根素显著降低高胆固醇膳食引起的血清胆固醇的升高,降低动脉粥样硬化指数,上调CYP7A1的mRNA转录水平,对HMGR和CYP51的转录水平没有影响。结论:这些数据表明葛根素能够降低血清胆固醇,减低动脉粥样硬化发生危险。其降低胆固醇的作用可能是通过促进胆固醇转化为胆酸实现的。

硫辛酸通过激活PI3K/Akt通路保护帕金森小鼠神经元的作用研究

目的:明确硫辛酸(lipoic acid,LA)是否通过活化脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(Phosphoinositide 3-kinases/Protein kinase B,PI3K/Akt)通路保护小鼠帕金森(Parkinson’s disease,PD)神经元损伤。方法:将130只健康C57BL雄性小鼠随机分为PD模型组(A组)、PD模型自然恢复组(B组)、硫辛酸干预组(C组)、硫辛酸加阻滞剂干预组(D组),对照组(E组)。采用免疫组化方法检测黑质内酪氨酸羟化酶(Tyrosine hydroxylase,TH)阳性细胞数,Western Blot方法检测中脑TH、总Akt和p-Akt蛋白表达,相应试剂盒检测中脑内GSH(Glutathione)和MDA(Malondialdehyde)的含量。结果:(1)与E组比较,A组TH阳性细胞数显著减少(P<0.01),B组、D组明显减少(P<0.05),C组无明显统计学意义(P>0.05)。(2)与E组比较,A组、B组TH蛋白表达显著减少(P<0.01),C组、D组TH表达明显减少(P<0.05);分别与A组、B组比较,C组TH表达显著增多(P<0.01),D组无明显统计学意义(P>0.05)。(3)与E组比较,A组、B组、D组中脑内p-AKT表达显著减少(P<0.01),C组差异无明显统计学意义(P>0.05);分别与A组、B组比较,C组pAkt表达显著增多(P<0.01),D差异无明显统计学意义(P>0.05)。(4)与E组比较,C组中脑GSH水平明显增加(P<0.05),A组、B组明显减少(P<0.05),D组差异无统计学意义(P>0.05;与E组比较,A组、B组MDA表达显著增加(P<0.01),C组、D组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:硫辛酸可能通过激活PI3K/Akt通路,减轻氧化应激损伤,进而发挥其保护神经元的作用。

Gemini型阳离子表面活性剂反胶束体系萃取纤维素酶的研究

本文研究了Gemini型阳离子酯季铵盐表面活性剂Ⅱ-14-3反胶束萃取纤维素酶的性能,以探索新型表面活性剂在反胶束萃取酶蛋白中的应用。考察了水相pH、离子强度、离子种类、酶浓度、表面活性剂浓度、助溶剂浓度、溶剂比和助表面活性剂(卵磷脂)等因素对萃取率的影响,确定了萃取纤维素酶的最佳条件:[NaCl]=50mmol/L,[Ⅱ-14-3]=0.3mmol/L,pH6.4,C0=0.14,溶剂比S=1.0,萃取率E接近80%,其酶活达到原来的93.38%;若加入适量的卵磷脂([Ⅱ-14-3]/[PC]=36:1)可提高萃取率,萃取率E达90%以上,且酶活达到121.41%。并且从反胶束微观结构给予解释。

甘草废渣中1个新的香豆素类化合物

目的研究甘草Glycyrrhiza uralensis废渣的化学成分。方法采用硅胶吸附柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱、高效液相色谱等分离手段进行分离纯化,根据化合物的理化性质和波谱数据鉴定化合物的结构。结果从新疆产甘草废渣75%乙醇提取物中分离得到了5个化合物,分别鉴定为槐香豆素C(1)、3β-O-对羟基-反-肉桂酰-齐墩果酸(2)、3-羰基甘草次酸(3)、3β,18-O-异丙叉-8(14),15-异右松脂烷二烯(4)、3β,18-O-异丙叉-7,15-异右松脂烷二烯(5)。结论化合物1为新的香豆素类化合物,命名为槐香豆素C;化合物2、4、5为首次从该属植物中分离得到。