免疫磁珠法检测脱水蒜制品中沙门氏菌

研究免疫磁珠法用于出口脱水蒜制品中沙门氏菌的检测,将免疫磁珠使用于400mL大体积溶液中,并使用高速离心代替磁棒进行分离。致病微生物捕获、分离实验结果表明免疫磁珠法具有特异性强、灵敏度高的特点,沙门氏菌污染量为1CFU/25g时,检出率为70%,污染量为10CFU/25g时,检出率达100%。

红豆皮多酚提取物对两种致病菌的抑菌活性及作用机理

多酚类化合物具有一定的抑菌活性,为探究红豆皮多酚对两种致病菌的抑菌机理,本实验采用高效液相色谱法确定红豆皮多酚的组成。通过最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)和抑菌生长曲线分析红豆皮多酚提取物对李斯特菌ATCC19119和沙门氏菌ATCC14028的抑菌效果,并从菌体细胞蛋白和核酸含量、细胞膜电位、细胞内ATP含量、细胞外碱性磷酸酶活力和菌体细胞形态变化的角度来揭示其抑菌机理。结果表明,红豆皮多酚组成成分中含有13种酚类化合物,红豆皮多酚提取物对李斯特菌ATCC19119和沙门氏菌ATCC14028的MIC分别为625μg/mL和2500μg/mL,红豆皮多酚提取物的添加对菌体细胞蛋白和核酸含量、细胞膜电位、细胞内ATP含量、细胞外碱性磷酸酶含量和菌体细胞形态变化等有明显影响。综上,本研究结果可为粮食源天然抑菌产品的开发和粮食加工副产物的综合利用提供理论参考。

沙门菌侵袭蛋白SipA的抗体制备及其在感染小鼠组织和巨噬细胞内的表达特点

旨在研究沙门菌侵袭蛋白SipA的表达特点。利用PCR技术从沙门菌中扩增SipA基因,然后将该基因克隆到原核表达载体pET-28a,转入至大肠杆菌BL21菌株,经诱导剂IPTG诱导表达重组蛋白SipA,纯化后的融合蛋白SipA免疫大耳白兔获得SipA抗体,利用沙门菌14028感染小鼠以及小鼠巨噬细胞Raw264.7后,通过免疫组化和免疫荧光鉴定SipA表达部位以及SipA在巨噬细胞内的分布。结果:成功表达重组蛋白SipA,纯化的SipA抗体通过间接ELISA法和Western blot检测其效价可达到1∶512 000,并具有较强特异性。免疫组化结果显示SipA在感染小鼠的空肠、肠系膜淋巴结、脾脏、肝脏、肺以及结肠均有表达,尤其在淋巴细胞和巨噬细胞的组织部位表达显著。细胞免疫组化以及细胞免疫荧光结果进一步揭示毒力蛋白SipA在Raw 264.7细胞的细胞质有大量表达,并且转位至细胞核。