15-PGDH诱导药物对人乳腺癌MCF-7细胞的生长抑制作用及其机制研究

目的探讨15-羟前列腺素脱氢酶(15-PGDH)诱导药物对人乳腺癌MCF-7细胞的生长抑制作用及其机制。方法采用MTT法测定4种非特异性15-PGDH诱导药物--布洛芬(IBU)、吲哚美辛(IND)、吡格列酮(PIO)、地塞米松(DXM)对MCF-7细胞增殖的影响;Hoechst 33258检测细胞凋亡情况;Western blotting检测15-PGDH、COX-2蛋白表达水平;ELISA法检测细胞上清液中PGE2水平。结果低毒浓度(IBU 200μmol·L^-1,IND 100μmol·L^-1,PIO 20μmol·L^-1,DXM 100 nmol·L^-1)下,4种15-PGDH诱导药物联合用药可协同增强阿霉素(ADM)、紫杉醇(TAXOL)对MCF-7细胞的生长抑制作用和凋亡诱导作用;4种15-PGDH诱导药物干预后,均可降低MCF-7细胞中COX-2蛋白表达水平和细胞上清液中PGE2水平,IBU可显著降低15-PGDH蛋白表达水平,而IND、PIO和DXM对15-PGDH蛋白表达无显著影响。结论15-PGDH诱导药物可增强ADM、TAXOL对MCF-7细胞的生长抑制作用和凋亡诱导作用,其机制可能与抑制COX-2表达、降低PGE2水平有关。

15-PGDH在食管癌中的表达特征及临床意义

目的探讨15-羟基前列腺素脱氢酶(15-PGDH)在食管癌中的表达及其与临床病理特征的关系,并初步评价其意义。方法随机收集66例食管癌手术病人的癌组织及相应癌旁正常组织,应用免疫组织化学检测15-PGDH表达,进一步分析其表达与食管癌临床病理的相关性。结果与癌旁正常组织相比,食管癌中15-PGDH的表达阳性率显著下降(P<0.01)。进一步统计分析显示,15-PGDH表达下调与食管癌的TNM分期(P<0.05)、分化程度(P<0.05)和淋巴结转移(P<0.01)密切相关。结论食管癌中15-PGDH的表达减少或缺失与食管癌的发生发展关系密切,其可以作为反映食管癌恶性生物学行为的一个重要指标。

15-PGDH在食管癌中的表达特征及临床意义

目的：探讨15．羟基前列腺素脱氢酶（15-PGDH）在食管癌中的表达及其与临床病理特征的关系，并初步评价其意义，方法：随机收集66例食管癌手术病人的癌组织及相应癌旁正常组织，应用免疫组织化学检测15-PGDH表达，进一步分析其表达与食管癌临床病理的相关性．结果：与癌旁正常组织相比，食管癌中15-PGDH的表达水平显著降低甚至缺失．进一步统计分析显示，15-PGDH表达下调与食管癌的TNM分期、分化程度和是否有淋巴结转移密切相关．结论：食管癌中15．PGDH的表达减少或缺失参与了食管癌的发生发展过程，其可以作为反映食管癌恶性生物学行为的一个重要指标．

15-PGDH表达水平与肝癌肝移植临床预后关系研究

目的探讨15-羟基前列腺素脱氢酶(15-PGDH)表达水平与肝细胞癌(肝癌)肝移植临床预后的关系。方法回顾性分析行肝癌肝移植术的94例受者临床资料。用免疫组织化学法检测所有受者病理组织切片中15-PGDH表达情况;分析15-PGDH蛋白表达水平与肝癌患者各项临床参数的关系;计算肝癌肝移植受者术后5年的无瘤生存率和总生存率;分析可能影响肝癌肝移植受者预后的独立危险因素。结果15-PGDH的表达水平与受者的年龄、Child-Pugh分级和术前甲胎蛋白(AFP)水平相关(均为P<0.05)。15-PGDH低表达组受者的无瘤生存率和总生存率均显著低于15-PGDH高表达组受者(均为P<0.05)。15-PGDH表达水平、肿瘤分化程度、美国癌症联合会(AJCC)分期是影响肝癌肝移植受者预后的独立危险因素(均为P<0.05)。结论15-PGDH表达水平是影响肝癌肝移植受者预后的独立危险因素。

15-PGDH、COX-2蛋白在胃癌发生关系的相关性研究

目的:通过检测15-PGDH、环氧合酶-2(COX-2)在胃癌组织中的表达水平,探讨15-PGDH、环氧合酶-2(COX-2)在胃癌形成过程中的可能作用机制。方法:应用免疫组法研究165例胃癌组织和87例正常胃黏膜15-PGDH、环氧合酶-2(COX-2)的表达。结果:胃癌组织15-PGDH、环氧合酶-2(COX-2)的阳性表达率分别为13.94%(23/165)和78.18%(129/165)。正常胃黏膜15-PGDH、环氧合酶-2(COX-2)的阳性表达率分别为63.22%(55/87)、25.29%(22/87);胃癌组织15-PGDH、环氧合酶-2(COX-2)的表达与肿瘤分化程度、TNM分期及淋巴结转移有关(P<0.05),其中COX-2的表达呈正相关(P<0.05),15-PGDH的表达呈负相关(P<0.05)。结论:15-PGDH、环氧合酶-2(COX-2)表达与胃癌的生物学行为显著相关性,15-PGDH和环氧合酶-2(COX-2)的表达可作为了解胃癌组织的浸润转移能力及预后判定的指标。

桂枝汤对发热及低体温大鼠下丘脑15-羟基前列腺素脱氢酶活性的影响

目的 :研究桂枝汤对发热和低体温大鼠下丘脑组织内 15 PGDH活性的影响 ,进一步阐明桂枝汤体温双向调节作用机制。方法 :采用核素示踪技术测定酵母性发热和安痛定性低体温大鼠及桂枝汤处理组下丘脑组织内 15 PGDH活性 ,并观察其与体温变化的关系。结果 :皮下注射酵母可降低下丘脑 15 PGDH活性 ,桂枝汤灌胃可剂量依赖性地抑制该变化并促进发热大鼠体温的恢复 ,两者呈正相关 ;而腹腔注射安痛定后 ,随着体温下降 ,15 PGDH活性有升高倾向 ,桂枝汤可抑制该酶活性并加速体温恢复正常 ,但两者呈弱相关。结论 :大鼠下丘脑内 15 PGDH可能参与机体体温调节并可能是桂枝汤解热作用靶点之一 ,但与其抗低体温作用关联不大。

发热大鼠脑组织15-羟基前列腺素脱氢酶活性的时相变化及桂枝汤的影响

目的 :研究发热大鼠下丘脑和其他脑组织 15 PGDH活性的时相变化及桂枝汤的影响。方法 :利用Radio TLC法测定发热大鼠及桂枝汤治疗组脑组织不同时间的 15 PGDH活性。结果 :皮下注射酵母后 ,伴随体温的升高 ,大鼠下丘脑PGDH活性先降低后逐渐恢复 ,桂枝汤可阻止该酶早期的活性降低并升高至正常值以上 ;其他脑组织PGDH活性也有类似变化 ,但桂枝汤可抑制后期的PGDH活性向正常恢复。结论 :下丘脑PGDH活性降低 ,参与了酵母性发热的早期机制 ,升高该部位PGDH活性可能是桂枝汤解热机理之一。

大肠癌相关基因PGDH原核表达质粒的构建及表达

目的构建15-羟基前列腺素脱氢酶(PGDH)原核表达质粒,并在大肠杆菌中诱导表达PGDH蛋白。方法以人正常大肠黏膜组织总RNA为模板,利用RT-PCR扩增PGDH基因的编码序列,克隆入原核表达载体pBV220,转化E.coliDH5α,经温控诱导表达,并经Ni2+-NTA亲和层析纯化,目的蛋白进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果重组质粒pBV220-PGDH-His6经PCR及酶切鉴定,证明质粒构建正确。经温控诱导后,可表达出相对分子质量约为29 000的PGDH-His6蛋白,表达产物以包涵体形式存在,3 h诱导表达量最高,约占菌体总蛋白的30%。Western blot验证了表达蛋白的特异性。纯化后目的蛋白纯度大于95%。结论已成功构建PGDH原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达了PGDH蛋白。

15-PGDH诱导药物逆转人乳腺癌MCF-7/ADR细胞耐药作用及机制

目的探讨15-羟前列腺素脱氢酶(15-PGDH)在人乳腺癌多药耐药细胞中的表达,并观察15-PGDH诱导药物对MCF-7/ADR细胞耐药性的影响。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot检测MCF-7和MCF-7/ADR细胞中15-PGDH、环氧合酶-2(COX-2)mRNA和蛋白表达;ELISA检测细胞上清液中PGE_2含量;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定15-PGDH诱导药物(吲哚美辛、布洛芬、吡格列酮、地塞米松)对乳腺癌细胞的增殖抑制作用及对多柔比星(adriamycin,ADM)敏感性的影响;Hochest 33258检测细胞凋亡。结果与MCF-7相比,MCF-7/ADR细胞中15-PGDH表达水平明显降低,COX-2表达明显增加,细胞上清液中PGE_2水平显著增加;4种15-PGDH诱导药物可增加MCF-7/ADR细胞15-PGDH表达或同时降低COX-2表达,降低细胞上清液中PGE2含量,增强MCF-7/ADR细胞对ADM的敏感性及诱导细胞凋亡的作用,部分逆转耐药。结论15-PGDH在MCF-7/ADR细胞中低表达,其诱导药物可能通过调控15-PGDH和COX-2影响PGE_2表达,增加化疗药物敏感性、促进细胞凋亡、逆转MCF-7/ADR细胞耐药。

胃癌组织中15-PGDH的表达特征及其临床意义

目的:探讨15-羟基前列腺素脱氢酶(15-PGDH)在胃癌组织和癌旁正常组织中的表达及其与临床病理特征的关系,初步评价15-PGDH在胃癌发生、发展中的作用及其意义。方法:随机收集60例胃癌手术病人的癌组织及相应癌旁正常组织,应用免疫组织化学检测15-PGDH表达特征并进行评分,进一步分析15-PGDH的表达与胃癌临床病理参数的关系。结果:胃癌组织中15-PGDH的表达水平显著降低甚至缺失(p<0.01)。结合胃癌的临床病理学特征统计分析表明,15-PGDH在低分化胃癌中明显低于高分化胃癌中的表达(p<0.05);15-PGDH在TNMⅢ期和Ⅳ期患者的胃癌组织中的染色明显低于在Ⅰ期和Ⅱ期组织中的表达(p<0.05);存在淋巴结转移的胃癌组织中15-PGDH表达显著低于无淋巴结转移胃癌组织中的表达(p<0.01)。结论:胃癌中15-PGDH的表达减少或缺失可能是胃癌发生、发展及浸润转移的重要机制之一,15-PGDH在胃癌中可能扮演着抑癌基因的角色。

前列腺素脱氢酶在大肠杆菌中的表达纯化及鉴定

15-羟基前列腺素脱氢酶(PGDH)属于抑癌基因,在多种肿瘤中表达缺失,在肿瘤的发生发展中起着重要作用。提取人正常大肠黏膜组织总RNA,利用RT-PCR方法扩增得到PGDH基因的编码序列,克隆入原核表达载体pBV220,测序鉴定正确后转化E.coliDH5α,经温控诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE和Western blot,证实为相对分子质量约为29000的PGDH-His6蛋白,表达产物以包涵体形式存在,3h诱导表达量最高,约占菌体总蛋白的30%。经Ni2+配体亲和层析纯化得到纯度大于95%的目的蛋白。重组PGDH简单复性后具有一定的生物活性,约为3.7×104U/mg,为下一步研究其在肿瘤中的作用奠定了基础。

15-羟基前列腺素脱氢酶基因转染抑制鼠胃癌细胞MFC增殖的观察

目的:构建pcDNA3.1/15-PGDH(15-羟基前列腺素脱氢酶)真核表达载体,并转染鼠胃癌细胞MFC,观察15-PGDH对MFC细胞增殖的影响。方法:通过基因重组技术构建真核表达载体pcDNA3.1/15-PGDH,转染胃癌细胞MFC,建立稳定转染细胞株,RT-PCR检测转染细胞中15-PGDH基因的表达情况;MTT法测A值,绘制细胞生长曲线;克隆形成实验分析15-PGDH对胃癌细胞增殖能力的影响。结果:15-PGDH基因转染成功,转染后鼠胃癌MFC/15-PG-DH细胞中15-PGDH基因的相对表达量为1.06±0.08,明显高于空质粒转染组的0.22±0.01及未转染细胞组的0.21±0.01,差异有统计学意义,P<0.01。且基因转染后细胞生长明显受到抑制,MTT结果显示,细胞生长至第4、6、8天,15-PGDH基因转染组细胞的A值均较低,分别为1.173±0.072、1.405±0.040和1.689±0.116,与空质粒转染组细胞的1.452±0.062、1.955±0.098和2.755±0.324相比,差异有统计学意义;与未转染MFC细胞的1.534±0.082、1.972±0.073和2.477±0.319相比,差异亦有统计学意义,P值均<0.05。15-PGDH基因转染细胞组克隆形成率为18%,与未转染细胞组63%及空质粒转染细胞组59%相比,克隆形成明显受到抑制,差异有统计学意义,P<0.01。结论:15-PGDH基因转染可显著抑制鼠胃癌MFC细胞的增殖和克隆形成能力。