内皮抑素质粒联合阿霉素对人脑胶质肉瘤GL15细胞株增殖和凋亡的影响

目的探讨内皮抑素(ES)以及ES和阿霉素联合应用对人脑胶质肉瘤细胞株GL15增殖和凋亡的影响。方法通过质粒转染的方法,运用MTT法和流式细胞仪检测了ES以及ES和阿霉素联合应用对GL15细胞株增殖和凋亡的影响。结果MTT法检测表明阿霉素对转染pcDNA3.1 ES的GL15细胞的生长抑制作用明显增强,细胞增殖明显减慢,差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞仪检测表明,转染pcDNA3.1 ES后,G0/G1期细胞明显增加(P<0.05),S期细胞明显减少(P<0.01),凋亡率明显上升(P<0.01);联合阿霉素治疗后,上述差异更加显著(P<0.01)。结论ES联合ADM可明显抑制人脑胶质肉瘤GL15细胞株的生长,二者联用可以产生协同抗瘤作用。

内皮抑素对人脑胶质瘤GL15细胞株β-catenin和Cyclin D1表达的影响

目的探讨内皮抑素对人脑胶质肉瘤细胞株GL15中β-catenin和Cyclin D1表达的影响。方法通过质粒转染的方法向GL15细胞中转染pcDNA3.1ES质粒,通过SABC免疫组织化学方法检测转染组与非转染组细胞中β-catenin和Cyclin D1表达。结果空白对照组细胞爬片中β-catenin和CyclinD1的平均光密度值分别为(0.3758±0.0371)和(0.4092±0.0417),而内皮抑素质粒转染组细胞爬片中β-catenin和CyclinD1的平均光密度值分别为(0.2462±0.0275)和(0.2046±0.0357);空白对照组中β-catenin和Cyclin D1的平均光密度值均高于内皮抑素转染组,统计学分析表明在不同组别之间,β-catenin的平均光密度值有显著性差异,其中Cy-clin D1的平均光密度值有极显著性差异。结论内皮抑素在GL15细胞株中可以抑制β-catenin蛋白的过度表达和异位表达,并通过直接和间接的途径,抑制Cyclin D1蛋白的过度表达,从而发挥抑制肿瘤发展的作用。

JQ1诱导SUP-B15细胞凋亡的Notch1通路机制研究

目的:本研究观察布罗莫结构域抑制剂JQ1诱导人Ph阳性急性淋巴细胞白血病细胞株(SUP-B15)凋亡的Notch1通路可能机制。方法:用不同浓度JQ1在不同时期处理SUP-B15细胞,用四甲基偶氮唑蓝试验(MTT法)检测细胞增殖情况;用流式细胞术检测细胞周期;实时定量PCR法检测MIS2、Notch1、Hes1、BCR-ABL mRNA的表达水平。结果:JQ1在0-4μmol/L的浓度范围内能抑制SUP-B15细胞的生长,并呈现剂量-时间依赖性;JQ1在1、2、4μmol/L处理SUP-B15细胞48 h后,诱导细胞S期阻滞,并呈剂量依赖性,与同时间对照组比较有统计学差异(P<0.05);与同时间对照组相比,JQ1能够降低MIS2、Notch1、Hes1、BCR-ABL mRNA的表达。结论:JQ1可以有效抑制SUP-B15细胞生长增殖,而Notch1通路凋亡途径很可能是JQ1促进Ph+ALL细胞凋亡的多途径之一。

活性氧簇在NG108-15细胞分化过程中的差异表达

目的:研究活性氧簇(ROS)在NG108-15细胞分化过程中的表达,验证以NG108-15细胞株替代原代培养的下丘脑神经元进行氧化应激相关研究的可行性。方法:实验细胞分为NG108-15未分化组和NG108-15分化组,以原代培养的SD雄性乳鼠下丘脑神经元为对照组;用DHE荧光染色和流式细胞术检测各组ROS表达和生成。结果:NG108-15未分化组ROS表达明显高于对照组(P<0.05),但NG108-15分化组与对照组比无统计学意义。结论:NG108-15细胞经诱导分化后,神经元ROS的基础表达与原代培养的下丘脑神经元相似,可替代原代培养的下丘脑神经元进行氧化应激相关研究。

多药耐药基因MDR1在Ph(+)急性淋巴细胞白血病伊马替尼耐药细胞株SUP-B15/RI耐药形成中的作用

目的研究多药耐药基因MDR1在Ph(+)急性淋巴细胞白血病〔Ph(+)ALL〕伊马替尼(IM)耐药细胞株SUP-B15/RI耐药机制中的作用。方法 RT-PCR技术检测敏感细胞株SUP-B15和IM耐药细胞株SUP-B15/RI MDR1mRNA表达,改良MTT法测定IM、柔红霉素(DNR)、长春新碱(VCR)、依托泊甙(VP-16)单药及联合维拉帕米作用于SUP-B15细胞和SUP-B15/RI细胞72h后增殖活性的改变,计算抑制率为50%时的药物浓度(IC50),DNR药物外排实验检测MDR1表达产物P-gp功能。结果 MDR1基因在SUP-B15/RI中的表达是敏感细胞SUP-B15的(2.02±0.04)倍(P<0.05)。IM、DNR、VCR、VP-16单药作用于SUP-B15/RI细胞的IC50值较SUP-B15细胞增高(P<0.05),相对耐药倍数(RF)分别为(20.52±2.34)、(10.33±1.88)、(9.78±1.27)、(3.84±0.69)倍。IM、DNR、VCR、VP-16与维拉帕米联合作用于SUP-B15/RI细胞后IC50值较单药时降低(P<0.05),耐药逆转倍数分别为(1.44±0.43)、(3.20±0.17)、(1.44±0.12)、(1.33±0.14)。P-gp蛋白功能在SUP-B15/RI细胞强于SUP-B15细胞,DNR泵出率分别为10.27%、3.43%。结论 MDR1基因在SUP-B15/RI细胞中表达增加,其表达产物P-gp功能增强,P-gp抑制剂维拉帕米可以部分逆转IM耐药。说明MDR1参与SUP-B15/RI细胞IM耐药机制的形成。

伊马替尼、柔红霉素和硼替佐咪对两种Ph(+)白血病细胞株抗肿瘤效应的比较研究

目的比较研究化疗药物伊马替尼、柔红霉素和硼替佐咪对两种Ph(+)白血病细胞株K562(髓系白血病细胞株,表达P210蛋白)和SUP-B15(急性淋巴细胞白血病细胞株,表达P190蛋白)的抗肿瘤效应。方法采用MTT法测定不同浓度的伊马替尼、柔红霉素与硼替佐咪分别作用72 h后两种细胞株的增殖活性,并计算3种化疗药物对两种细胞株作用的半数抑制浓度(IC50);RT-PCR法检测不同浓度伊马替尼作用48 h后两种细胞株bcr-abl基因表达的改变。结果①不同浓度伊马替尼、柔红霉素与硼替佐咪分别作用K562和SUP-B15细胞株72h,其对细胞株的IC50值分别为(0.286±0.060)μmol/L、(0.303±0.009)μmol/L、(22.127±3.592)nmol/L和(1.387±0.180)μmol/L、(0.117±0.017)μmol/L、(12.35±0.740)nmol/L,提示伊马替尼对K562细胞敏感性明显高于SUP-B15细胞,而柔红霉素对SUP-B15更敏感,硼替佐咪对两种细胞的敏感性无差异;②伊马替尼0、0.35、1.0μmol/L作用48 h后,两株细胞bcr-abl基因表达均无明显变化。结论伊马替尼、柔红霉素、硼替佐咪对Ph(+)细胞株K562和SUP-B15均有较好的抗肿瘤效应,伊马替尼对K562更敏感,而柔红霉素和硼替佐咪对SUP-B15均有较好的抑制作用;短时间伊马替尼作用后不影响bcr-abl基因的表达。

秋水仙碱体外抗乙型肝炎病毒的作用

目的:探讨秋水仙碱在体外抗乙型肝炎病毒(HBV)的作用。方法:以秋水仙碱作用于HBV全基因组转染的人肝癌细胞株(Hep G22.2.15),用罗氏电化学发光免疫分析仪检测HBsAg和HBeAg,用ABI7000荧光定量PCR扩增仪检测细胞内、外HBV-DNA、HBV-共价闭环DNA(HBV-cccDNA)(copies/cell)。数据表示为l g(x珚±s)。结果:(1)秋水仙碱6.25×10-6～1×10-4 mol·L-1能显著抑制Hep G22.2.15产生/分泌HBsAg(P<0.05,P<0.01),IC50=1.473×10-7 mol·L-1,其3.125×10-6和2.5×10-5～1×10-4 mol·L-1能显著抑制Hep G22.2.15产生/分泌HBeAg(P<0.05,P<0.01),IC50=2.387×10-7 mol·L-1,拉米夫定(lamivudine)IC50分别为3.52×10-4 mol·L-1和3.184×10-3 mol·L-1。(2)秋水仙碱和拉米夫定有类似的降低Hep G22.2.15细胞内HBV-DNA的作用(P<0.05),IC50分别为9.747×10-9 mol·L-1和2.649×10-6 mol·L-1。(3)秋水仙碱3.125×10-6和6.25×10-6 mol·L-1能明显减少Hep G22.2.15细胞内和上清液中HBV-cccDNA(P<0.05)。(4)秋水仙碱1.6×10-6～1×10-3 mol·L-1和拉米夫定2×10-4,1×10-3 mol·L-1皆能显著抑制Hep G22.2.15细胞增殖(P<0.05,P<0.01),IC50分别为7.933×10-6 mol·L-1和2.60×10-4 mol·L-1。结论:秋水仙碱在体外具有抗HBV的作用,包括降低HBsAg和HBeAg的产生/分泌,减低Hep G22.2.15细胞内、外HBV-cccDNA水平,减少细胞内HBV-DNA,且主要是由于直接抑制HBV-DNA和HBV-cccDNA的产生。