缺氧时15-脂氧化酶在体外牛肺动脉内皮细胞的表达

目的探讨急性缺氧时,15-脂氧化酶(15-LO)在体外肺动脉内皮细胞的表达部位及程度。方法通过细胞培养,然后牛肺动脉内皮细胞分别缺氧0h、0.5h、1h、2h、3h,在倒置显微镜下观察细胞形态,通过做免疫组化,观察牛肺动脉内皮细胞15-LO的表达情况及表达部位。结果正常情况下,牛肺动脉内皮细胞,倒置显微镜下呈扁平或多角形。通过免疫组化实验可观察到,15-LO在牛肺动脉内皮细胞胞质内有表达,而且在不同缺氧时间均有表达, 15-LO被染成褐色,缺氧0h时胞质内无褐色颗粒。结论缺氧条件下,在体外牛肺动脉内皮细胞15-LO确有表达, 而且随缺氧时间增加,表达增强。

15-脂氧化酶在动脉粥样硬化形成中的作用及卡维地洛的干预效果

目的探讨氧化及炎症反应在动脉粥样硬化(AS)发病机制中的作用及卡维地洛的影响和途径。方法以AS饲料制备AS大鼠模型,同时以卡维地洛灌胃,9 w后测定大鼠空腹血脂、超氧化物歧化酶(SOD)和肿瘤坏死因子(TNF)-α的水平,并自主动脉弓下取动脉组织行苏木素-伊红(HE)染色及免疫组化分析。结果与正常对照组比较,AS组和卡维地洛组中血脂、TNF-α水平明显升高(P<0.01),AS组和卡维地洛组血脂水平无统计学差异,而卡维地洛组TNF-α水平明显低于AS组(P<0.01)。AS组SOD水平低于其他两组(P<0.01),卡维地洛组与正常对照组比较无统计学差异(P>0.05)。AS组15-脂氧化酶(15-LO)水平明显高于其他两组(P<0.01),在卡维地洛组也升高,但与正常组比较无统计学差异(P<0.05)。结论在AS的发病机制中氧化及炎性反应具有重要作用。卡维地洛可抑制15-LO及TNF-α的活性而起到抗AS的作用。

缺氧条件下15-脂氧化酶在体内肺组织的表达

目的探讨缺氧过程中,在大鼠体内肺组织15-LO(15-脂氧化酶)在不同时间的表达程度和分布。方法通过制作缺氧模型,正常Wistar雌性大鼠随机分为对照组,缺氧1d、3d、5d和7d组,大鼠每天缺氧2h,其他时间置于空气中,原位杂交方法检测15-LO在体内的表达程度。结果在缺氧1d、3d、5d、7d时,通过原位杂交方法,可见在肺动脉内皮细胞和平滑肌细胞15-LO的表达逐渐增强,而且在各级肺动脉均有表达,正常对照组和缺氧7d组比较,P<0.05有显著统计学意义。结论提示在体内15-LO随缺氧时间的增加,表达逐渐加强。

12/15-脂氧化酶基因敲除对肥胖相关性肾小球疾病模型小鼠肾组织的保护作用及其机制

目的:探讨12/15-脂氧化酶(12/15-LO)基因敲除(12/15-LOKO)对高脂饮食(HFD)诱导的肥胖小鼠肾组织的保护作用,阐明其在肾脏疾病进展中的作用。方法:将16只12/15-LOKO小鼠和16只WT小鼠各自随机分为HFD组和标准饮食喂养(SFD)组,每组8只。HFD组小鼠给予HFD喂养,SFD组小鼠给予SFD喂养(即WT+HFD、WT+SFD、LOKO+HFD和LOKO+SFD组)。分别于喂养1、8和14周收集小鼠24 h尿液,14周后采血并处死小鼠。检测各组小鼠体质量、双肾质量和后腿胫骨长,分别在第1、8和14周时代谢笼收集各组小鼠24 h尿液,检测尿蛋白水平、尿蛋白肌酐比(PCR)和尿微量白蛋白肌酐比(ACR)。葡萄糖耐量试验(GTT)检测各组小鼠空腹血糖水平,实时定量逆转录PCR(RT-qPCR)法检测各组小鼠肾皮质组织中adiponectin、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)和转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA表达水平,ELASA法检则各组小鼠血清中adiponectin、TNF-α、IL-6、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和胰岛素水平。PAS染色观察小鼠肾组织病理形态表现,Westernblotting法检测各组小鼠肾皮质组织中TGF-β1和PAI-1蛋白表达情况。结果:HFD组小鼠体质量明显高于SFD组(P<0.01),肾脏质量和肾小球面积明显大于SFD组(P<0.01);WT+HFD组小鼠ACR和PCR高于WT+SFD组(P<0.05);与LOKO+HFD组比较,WT+HFD组小鼠空腹血糖水平升高(P<0.05),WT+HFD组小鼠肾皮质组织中TNF-α、IL-6和MCP-1 mRNA表达水平明显高于WT+SFD组(P<0.05);与LOKO+HFD组比较,WT+HFD组小鼠肾皮质组织中IL-6和MCP-1 mRNA表达水平明显升高(P<0.05),adiponectinmRNA表达水平降低(P<0.05)。WT+HFD组小鼠肾皮质组织中PAI-1和TGF-β1 mRNA表达水平高于WT+SFD组(P<0.05),LOKO+HFD组小鼠肾皮质中PAI-1和TGF-β1 mRNA表达水平明显低于WT+HFD组(P<0.01)。结论:12/15-LOKO有利于改善肥胖小鼠胰岛素抵抗、蛋白尿水平和肾小球肥大程度,其机制可能与抑制TNF-α和IL-6等炎症因子在肾组织中的表达、影响PAI-1和TGF-β1 mRNA的表达、从而发挥肾脏保护作用有关。

基于Tet-On Advanced的肺癌细胞15-脂氧化酶-2基因表达载体的构建与表达

目的:构建肺癌细胞15-脂氧化酶-2(15-Lox-2)的可诱导性真核表达载体pTRE-Tight-15-Lox-2,并在肺癌细胞中检测其是否可受强力霉素(DOX)诱导表达。方法:pcDNA3-15-LOX-2载体经EcoRⅠ和XbaⅠ双酶切线性化,回收15-LOX-2 cDNA片段,将其克隆入pTRE-Tight载体的EcoRⅠ和XbaⅠ位点;采用脂质体法将pTet-On-Advanced与构建的pTRE-Tight-15-Lox-2共转染肺腺癌A549细胞,DOX诱导表达后,Western印迹检测15-Lox-2的表达水平。结果:构建了pTRE-Tight-15-Lox-2诱导表达载体;Western印迹检测表明,该载体能在肺癌细胞内表达,且其表达受DOX调控。结论:Tet-On Advanced系统能严密高效地调控15-LOX-2在肺癌细胞中的表达,为进一步研究15-LOX-2在肺癌中的作用奠定了基础。

组蛋白化学修饰与12/15-脂氧化酶代谢途径在糖尿病肾病发展中的作用

糖尿病肾病(DKD)是糖尿病患者最常见的微血管并发症之一,也是终末期肾衰竭的主要原因,其发病机制比较复杂。大量实验证实表观遗传学机制包括组蛋白化学修饰与脂质代谢产物12/15脂氧化酶(12/15-LO)参与调控DKD的特征性病理生理过程,本综述将从他们之间的相互作用关系出发,进一步探讨DKD发病机制,为DKD的治疗提供新的研究方向。

脂氧化酶参与脑缺血预处理机制的研究

目的探讨缺血预处理(IPC)对小鼠缺血再灌注脑损伤的保护作用中12/15-脂氧化酶(12/15-LOX)途径的作用及机制。方法健康雄性C57BL/6小鼠随机分成假手术组、大脑中动脉区局灶性脑缺血(MCAO)组、IPC假手术-MCAO组及IPC-MCAO 4组。所有组别小鼠分别进行相应处理后处死取脑组织,通过2,3,5-氯化三苯四唑(5-triphenyl tetrazolium chloride,TTC)染色法评估小鼠脑梗死面积;应用免疫印迹法(Western blot)测定12/15-LOX蛋白表达,酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测12/15-LOX产物15-羟二十四烷四烯酸(15-HETE)的表达。结果IPC-MCAO组梗死体积百分比为[(22.49±6.82)%,n=7]较MCAO组[(32.91±6.25)%,n=7]及IPC假手术-MCAO组[(31.97±5.53)%,n=7]梗死体积明显缩小(P<0.05);并且IPC-MCAO组小鼠脑组织中12/15-LOX的蛋白表达及其调控产物15-HETE较MCAO组和IPC假手术-MCAO组也明显降低(P<0.05),而以上各指标在IPC假手术-MCAO组和MCAO组中均无统计学差异(P>0.05)。结论缺血预处理对小鼠缺血再灌注损伤脑的保护作用与其对12/15-LOX及其调控产物的抑制作用相关。

ERK1／2通路参与15-羟二十碳四烯酸收缩缺氧大鼠肺动脉的过程(英文)

缺氧诱导的15-羟二十碳四烯酸(15-hydroxyeicosateteraenoic acid,15-HETE)是引起肺动脉收缩的重要介导因子。15- HETE引起肺动脉收缩的信号转导途径尚不清楚。本研究旨在确定细咆外信号调节激酶1／2(extracellular signal-regulated kinase-1／2, ERK1／2)信号转导通路是否参与15-HETE收缩缺氧大鼠肺动脉的过程。采用组织浴槽肺动脉环张力检测、蛋白质免疫印迹 (Western blot)和免疫细胞化学方法。制备缺氧大鼠动物模型,成年雄性Wistar大鼠在低氧环境下(吸入氧分数为0．12)正常喂养 9 d。显微分离直径1～1．5mm肺动脉,剪成长为3 mm的动脉环,进行血管张力检测。用ERK1／2 上游激酶(MEK)抑制剂PD98059 抑制ERK1／2活性。结果显示,PD98059可明显抑制15-HETE对缺氧大鼠肺动脉环的收缩作用。在去除内皮的肺动脉环, PD98059仍可明显降低15-HETE的缩血管作用。Western blot和免疫细胞化学结果都显示,15-HETE能促进ERK1／2磷酸化。 由此表明ERK1/2信号转导通路参与15-HETE收缩缺氧大鼠肺动脉的过程。

链球菌感染后肾炎患者血LXA4、LTB4、15-LO水平变化的意义

目的探讨链球菌感染后肾炎患者血脂氧素A_(4)(LXA_(4))、白三烯B_(4)(LTB_(4))和白细胞15-脂氧化酶(15-LO)水平及意义。方法选取2017年1月-2018年5月在我院治疗的链球菌感染后肾炎患儿52例(观察组),同时选取健康儿童50例作为对照组,采用ELISA检测血LXA_(4)和LTB_(4)水平,采用RT-PCR检测15-LO相对表达。结果观察组血LXA_(4)、LTB_(4)以及15-LO相对表达量分别为0.50±0.15μg/L、89.32±12.12μg/L和1.20±0.31,明显高于对照组(P<0.05);观察组肌酐清除率(Ccr)<80 ml/(min·1.73m^(2))患者血LXA_(4)、LTB_(4)以及15-LO相对表达量分别为0.62±0.20μg/L、96.72±10.03μg/L和1.35±0.29,明显高于Ccr≥80ml/(min·1.73m^(2))患者(P<0.05);血LXA_(4)、LTB_(4)和15-LO与Ccr呈负相关(r=-0.343、-0.320和-0.351,P<0.05);观察组治疗后血LXA_(4)、LTB_(4)和15-LO相对表达量分别为为0.32±0.13μg/L、24.29±9.27μg/L和1.20±0.31,明显低于治疗前(P<0.05)。结论链球菌感染后肾炎患者血LXA_(4)、LTB_(4)、15-LO水平升高,与患儿肾功有一定关系。

缺氧肺动脉高压发病机制研究进展:15-LO/15-HETE的作用

缺氧肺动脉高压(HPH)以急性缺氧肺动脉收缩(HPV)和慢性缺氧导致的肺血管床重构(HPVR)引起的肺动脉压持续升高为特征的临床常见病症。参与HPH的中介因子很多,但没有一种可以完整地阐述其发病机制。本实验室前期工作发现缺氧可使肺血管15-脂酯氧化酶(15-LO)表达升高,后者催化花生四烯酸,生成15-羟基二十碳四烯酸(15-HETE)。研究发现15-LO/15-HETE参与HPV与HPVR的众多过程,提示15-LO/15-HETE可能是HPH发病过程的一个中介因子。对15-LO/15-HETE研究将更好地阐述HPH的发病机制,寻找更有效的临床治疗靶点。

缺氧抑制脑动脉Kv2.1通道作用机制的研究

目的探讨缺氧对脑动脉Kv通道抑制作用的机制是否由内源性15-羟二十碳四烯酸(15-HETE)介导。方法选取健康Wistar大鼠,通过酶法分离培养脑动脉和颈内动脉平滑肌细胞,分为正常对照组、缺氧组和去甲二氢愈创木酸(NDGA)缺氧组,正常对照组平滑肌细胞常规培养48h、缺氧组在缺氧箱内培养48h、NDGA缺氧组加入50μmol/L的NDGA后在缺氧箱内培养48h,使用RT-PCR和Western blotting技术检测大鼠脑动脉和颈内动脉平滑肌细胞上Kv2.1通道mRNA及蛋白质的表达情况。结果缺氧可以抑制大鼠脑动脉和颈内动脉平滑肌细胞上Kv2.1通道的表达,缺氧组与正常对照组相比,Kv2.1通道mRNA及蛋白质的表达下调(P<0.05);采用NDGA抑制15-脂氧化酶(15-LOX)后,导致脑动脉和颈内动脉平滑肌细胞上Kv2.1通道的表达上调,NDGA可以保护缺氧对于Kv通道的抑制,NDGA缺氧组与缺氧组相比,Kv2.1通道mRNA及蛋白质的表达明显上调(P<0.05)。结论缺氧可能通过内源性15-HETE发挥对Kv通道的抑制作用,15-HETE可能是影响脑动脉张力的重要中介因素。

15-HETE参与的脑缺血再灌注损伤中p-ERK1/2表达变化的研究

目的:通过应用15-脂氧化酶(15-Lipoxygenase,15-LOX)抑制剂去甲二氢愈创木酸(nordihydroguaiaretic acid,NDGA)抑制15-羟基-二十碳四烯酸(15-hydroxyeicosatetraenoic acid,15-HETE)的生成,观察缺血再灌注损伤中大鼠脑组织磷酸化细胞外信号调节酶(phosphor-extracellular signal-regulated kinase,p-ERK1/2)表达的变化,探讨p-ERK1/2在15-HETE参与的脑缺血再灌注损伤中的作用及其表达变化。方法:应用大脑中动脉线栓栓塞法(MCAO)制作大鼠脑梗死2小时再灌注模型。将大鼠随机分为三组:假手术组(sham组)、DMSO对照组、NDGA处理组。后两组再根据不同的灌注时间分为三个亚组:再灌注1小时组、再灌注6小时组、再灌注24小时组。采用TTC染色法检测再灌注24小时大鼠脑梗死体积;免疫印迹(Western blot)法测定梗死后再灌注不同时间点梗死核心区和梗死周围区的p-ERK1/2的表达。结果:假手术组仅有少量p-ERK1/2的表达。DMSO对照组梗死核心区p-ERK1/2的表达从梗死再灌注后1小时即开始逐渐升高(1.43±0.06),6小时达高峰(2.02±0.14),24小时有所下降(1.16±0.21),与假手术组(0.62±0.08)比较P值均<0.01;梗死周围区p-ERK1/2表现出相同的变化趋势。与DMSO对照组比较,NDGA处理组大鼠脑梗死体积显著减小(20.10±0.12%vs 17.24±0.16%,P=0.009,P<0.05),各时间点p-ERK1/2的表达均下降。与梗死核心区相比较,梗死周围区24小时仍可检测到较高含量的p-ERK1/2(1.16±0.21 vs 1.86±0.14),但梗死核心区表达相对较少。结论:脑缺血再灌注损伤中,p-ERK1/2的表达增加,说明p-ERK1/2参与其中;应用NDGA后,p-ERK1/2的表达降低,脑梗死体积减小,证实p-ERK1/2参与了15-HETE介导的脑缺血再灌注损伤,并在此过程中可能参与了细胞的凋亡。