缺氧对15-脂氧酶同工酶在肺动脉中表达的影响

目的比较15-脂氧酶的两种同工酶:15-lipoxygenase-1(15-LO-1),15-lipoxygenase-2(15-LO-2)在正常对照组和慢性缺氧组中肺动脉表达的差异,从而探讨两种同工酶在缺氧性肺血管收缩中的作用。方法18只SD大鼠随机分为两组(n=9),正常对照组和缺氧组。通过动物乏氧箱建立大鼠慢性缺氧模型。分别用免疫组化法、原位杂交法、Western blot法比较两种同工酶在两组中表达的差异。结果①15-LO-1在正常对照组肺动脉有蛋白质的表达,而15-LO-2在正常对照组蛋白质水平不表达。②缺氧时15-LO-1蛋白质表达明显强于在正常对照中的表达(P<0.01)。③缺氧时15-LO-2在蛋白质水平表达,但15-LO-1蛋白质水平表达强于15-LO-2。④15-LO-1,15-LO-2在正常对照组和慢性缺氧组均有mRNA水平的表达,而且在缺氧组中的表达高于对照组。结论缺氧同时诱导15-LO-1,15-LO-2在肺动脉中表达增加,从而使二者在缺氧性肺血管收缩中发挥一定作用。

15-脂氧酶-1基因表达调节研究进展

15-脂氧酶-1(15-LOX-1)是脂质过氧化物酶,分别以亚油酸、花生四烯酸为底物氧化生成13-羟基-十八碳二烯酸(13-HODE)、15-羟基-二十碳四烯酸(15-HETE)。15-LOX-1基因表达在转录、翻译、翻译后修饰各个水平都受到多种因素的调节,影响着15-LOX-1的表达量和酶催化活性。本文就15-LOX-1转录、翻译、翻译后修饰各个环节的调节因素作一简要介绍。

补阳还五汤对脑缺血后12/15-脂氧合酶及相关炎性产物影响

目的观察补阳还五汤对脑缺血再灌注后12/15-脂氧合酶(12/15-LOX)及下游相关代谢产物的影响。方法将雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、补阳还五汤组和12/15-LOX抑制剂PD146176组。假手术组只分离组织和剥离血管,模型组建立大鼠大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,补阳还五汤组于造模术后给予补阳还五汤16 g·kg-1灌胃,2次/d,PD146176组于造模术前30 min给予PD14617610 mg·kg-1皮下注射(同补阳还五汤组做阳性对照)。缺血再灌注后6 h、24 h、48 h和72 h运用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测脑组织12/15-LOX的表达水平;免疫荧光(IF)法观察大鼠脑组织中12/15-LOX蛋白与神经元标记物(NeuN)、小胶质细胞标记物(Iba1)及星形胶质细胞标记物(GFAP)的共定位;酶联免疫吸附(ELISA)法检测12/15-LOX抗炎代谢产物消退素D1(RvD1)的含量,以及促炎代谢产物12-羟基廿碳四烯酸(12-HETE)和15-羟基廿碳四烯酸(15-HETE)的含量;免疫荧光法检测髓过氧化物酶(MPO)的表达,反映炎症细胞浸润程度。蛋白免疫印迹法检测脑组织白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-10(IL-10)表达水平。结果与假手术组比较,模型组在脑缺血再灌注不同时间点12/15-LOX表达均升高(P<0.01),与模型组比较,补阳还五汤组在脑缺血再灌注后6 h、24 h、48 h、72 h 12/15-LOX表达均降低(P<0.05或P>0.05)。12/15-LOX与NeuN和Iba1共定位重合较多,与GFAP共定位基本无重合。与假手术组比较,模型组RvD1含量降低(P<0.01),12-HETE和15-HETE含量升高(P<0.01),MPO和IL-6表达升高(P<0.01),IL-10表达降低(P<0.01);与模型组比较,PD146176组和补阳还五汤组RvD1含量升高(P<0.05,P<0.01),12-HETE和15-HETE含量降低(P<0.01),MPO表达减少(P<0.01),IL-6蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),补阳还五汤组IL-10蛋白表达升高(P<0.01)。结论补阳还五汤可能通过抑制12/15-LOX表达而增加抗炎产物RvD1,降低促炎产物12-HETE和15-HETE,以减轻脑缺血再灌注后炎症损伤。

铁死亡调控因子花生四烯酸脂氧合酶-15与肿瘤相关性的研究进展

铁死亡(Ferroptosis)是一种铁依赖性的新型的细胞程序性死亡(PCD)方式。花生四烯酸脂氧合酶-15(Arachidonate 15-lipoxygenase,ALOX15)是铁死亡的重要调控因子,它可以催化多不饱和脂肪酸(Polyunsaturated fatty acid,PUFA)生成脂质氢过氧化物,从而促进铁死亡的发生。ALOX15参与了多种癌症的发生发展,并发挥重要作用。本文对铁死亡的重要调控因子ALOX15与乳腺癌、食管癌、胃癌、结直肠癌以及前列腺癌的相关性进行综述,为相关肿瘤的研究提供参考。

脂氧合酶在前列腺癌中的作用研究进展

前列腺癌是中老年男性的常见病。研究表明脂氧合酶(LOX)途径在前列腺癌的发生、发展、侵袭和转移中起着重要作用,可作为前列腺癌防治的一个新靶点。LOX主要包括5-LOX、12-LOX及15-LOX-1、15-LOX-2,其中5-LOX与12-LOX对前列腺癌的发生发展、侵袭和转移具有促进作用;15-LOX-1具有促进前列腺癌作用,但15-LOX-1在二十二碳六烯酸(DHA)抗前列腺癌过程中发挥着关键作用;15-LOX-2具有抑制前列腺癌作用。本文对LOX在前列腺癌中作用及机制的研究作一综述,旨在为前列腺癌的防治研究提供参考。

15-脂氧酶在子痫前期中的表达

目的:探讨15-脂氧酶(15-LO)在子痫前期的病理生理过程中的作用。方法:采用蛋白印迹法检测15-LO的两种同工酶15-LO1和15-LO2在12名正常妊娠和16名子痫前期的孕妇胎盘和脐动脉组织中的表达。结果:在子痫前期的孕妇胎盘和脐动脉组织中,15-LO1蛋白质表达明显高于其在正常妊娠中的表达(P<0.01);而15-LO2在正常妊娠组不表达,其在子痫前期的孕妇胎盘和脐动脉组织中的表达显著高于其在正常妊娠中的表达(P<0.01)。结论:15-LO在子痫前期的孕妇胎盘和脐动脉组织中高表达,可能与子痫前期的发生发展密切相关。

15-脂氧合酶-1在胃癌中的表达及其临床意义

目的检测15-脂氧合酶-1(15-LOX-1)mRNA及蛋白在胃癌及癌旁正常组织中的表达,并探讨15-LOX-1表达与胃癌临床病理因素的关系。方法采用RT-PCR、westernblot和免疫组织化学方法检测胃癌组织及相匹配的癌旁正常组织中15-LOX-1mR-NA和蛋白的表达。结果15-LOX-1mRNA及蛋白在胃癌组织中的表达均显著低于癌旁正常组织(P<0.05)。15-LOX-1蛋白表达水平与胃癌中肿瘤大小、淋巴结转移和TNM分期呈明显的负相关(P<0.05)。结论15-LOX-1蛋白可能对胃癌的发生发展有一定抑制作用。检测胃癌中15-LOX-1的表达情况对评估患者的预后可能具有意义。

姜黄中姜黄素类化合物抗前列腺癌及对15-脂氧合酶抑制活性的初步研究

目的:研究姜黄中姜黄素类化合物对前列腺癌细胞PC3,DU145,LNCaP增殖及对15-脂氧合酶(15-LOX)抑制作用,并考察两者相关性。方法:应用四甲基偶氮唑比色法(MTT)测定姜黄乙酸乙酯部位、总姜黄素、姜黄素、单去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素对前列腺癌细胞PC3,DU145,LNCa P增殖抑制;应用脂氧合酶抑制药筛选试剂盒测定对15-LOX抑制活性,分析两者的相关性。结果:姜黄素对15-LOX抑制活性最好,在6μmol·L^(-1)时,姜黄素抑制率为63.1%,且其对前列腺癌细胞PC3,DU145,LNCa P抑制活性也较好,IC50分别为(14.75±2.37),(18.99±3.43),(19.02±2.52)μmol·L^(-1);天然姜黄素类化合对前列腺癌细胞增殖的抑制活性与对15-LOX抑制活性呈一定的相关性(P<0.05)。结论:天然姜黄素类化合物抗前列腺癌作用与对脂氧合酶的抑制作用具有一定相关性,脂氧合酶可能是天然姜黄素作用于前列腺癌的靶标之一。

15-脂氧合酶-1在结肠息肉组织中的表达及临床意义

目的观察15-脂氧合酶-1(15-LOX-1)在结肠正常黏膜、增生性息肉、管状腺瘤、绒毛状腺瘤及腺癌中的表达,探讨15-LOX-1在结肠息肉恶变中的作用。方法选取肠镜检查的正常结肠黏膜15例,肠镜下摘除的增生性息肉25例、管状腺瘤38例、绒毛状腺瘤30例及活检结肠腺癌15例,采用RT-PCR检测各组织中15-LOX-1 mRNA的表达,免疫组织化学和Western blot法检测各组织中15-LOX-1蛋白的表达。结果RT-PCR结果显示,15-LOX-1 mRNA在结肠正常黏膜、增生性息肉、管状腺瘤、绒毛状腺瘤及腺癌组织中的表达逐渐降低,除管状腺瘤与绒毛状腺瘤组织之间差异无统计学意义(P=0.168)外,其余各组织之间差异均有统计学意义(P<0.05);免疫组织化学结果显示,15-LOX-1蛋白在结肠正常黏膜组织中表达最高,在腺癌组织中表达最低,除增生性息肉与正常黏膜组织之间差异无统计学意义(P=0.075),管状腺瘤与绒毛状腺瘤组织之间差异亦无统计学意义(P=0.125)外,其余各组织之间差异均有统计学意义(P<0.05);Western blot结果显示,15-LOX-1蛋白在结肠正常黏膜组织中表达最高,在腺癌组织中表达最低,除增生性息肉与正常黏膜组织之间差异无统计学意义(P=0.178)外,其余各组织之间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 15-LOX-1具有抑癌作用,其表达的降低或缺失可能促使结肠息肉发生恶变。

15-脂氧合酶-1在胃癌细胞AGS中的表达

目的研究15-脂氧合酶-1(15-LOX-1)基因在人胃癌细胞AGS中的表达及其对AGS增殖凋亡的影响。方法通过脂质体介导瞬时转染15-LOX-1基因于培养的AGS中,逆转录PCR法和免疫印迹法检测15-LOX-1 mRNA及蛋白表达;四甲基偶氮唑盐法(MTT)、流式细胞术、AnnexinV/PI染色与原位末端标记法(TUNEL)比较转染前后AGS的增殖和凋亡情况。结果胃癌细胞AGS转染后表达有15-LOX-1的mRNA及蛋白。与非转染组及空质粒转染组相比较,转染重组质粒组AGS细胞生长明显受到抑制并且细胞周期停滞在G1期,其凋亡率明显高于非转染组及空质粒转染组。结论15-LOX-1基因能够抑制胃癌细胞AGS的增殖,并促进其凋亡。

蛋白激酶B和15-脂氧合酶-1在胃癌中的表达及其临床意义

目的检测蛋白激酶B(Akt)和15-脂氧合酶-1(15-lipoxygenase-1,15-LOX-1)在胃癌及癌旁正常组织中的表达,以探讨二者在胃癌形成中的临床意义。方法采用RT-PCR法检测新鲜胃癌及癌旁正常组织标本中Akt-1、Akt-2、Akt-3和15-LOX-1 mRNA的表达;Western blot印迹法检测磷酸化Akt(p-Akt)和15-LOX-1蛋白的表达。结果Akt-1、Akt-2、Akt-3 mRNA在胃癌及癌旁正常组织中的表达水平差异均无统计学意义(P>0.05)。p-Akt蛋白在胃癌组织中的表达显著高于癌旁正常组织(P<0.05)。15-LOX-1蛋白及mRNA在胃癌组织的表达均低于癌旁正常组织(P<0.05)。p-Akt蛋白表达与胃癌的肿瘤大小、淋巴结转移和TNM分期呈正相关(P<0.05)。相关性分析表明:胃癌组织中15-LOX-1蛋白表达和p-Akt水平间无明显相关性(r=-0.252,P>0.05)。结论Akt在胃癌的发生发展中具有促进作用。15-LOX-1蛋白可能对胃癌的发生发展有一定抑制作用,但与Akt无直接关系。

15-脂氧合酶-1对胃癌细胞周期的影响及其机制研究

目的研究15-脂氧合酶-1(15-LOX-1)对胃癌细胞AGS细胞周期的影响,并探讨其作用机制。方法实验分为15-LOX-1重组质粒转染组、空载体组和AGS组,转染胃癌细胞AGS,用RT-PCR和Western blot检测15-LOX-1 mRNA和蛋白的表达,流式细胞术检测AGS细胞周期的分布,Western blot检测S相激酶相关蛋白2(S-phase Kinase associated protein 2,Skp2)和细胞周期抑制因子P27的表达。结果重组质粒转染组AGS胃癌细胞分别从mRNA和蛋白水平检测到15-LOX-1的表达,流式细胞仪结果显示15-LOX-1可使肿瘤细胞大部分滞留于G0/G1期,进入S期的细胞减少,S期比例下降,并且转染15-LOX-1后P27表达上调,而Skp2表达下降(P<0.05)。结论 15-LOX-1可能通过调节细胞周期蛋白Skp2和P27的表达,使细胞周期阻滞于G0/G1期,抑制肿瘤细胞增殖。

12/15-脂氧合酶对骨质疏松的影响

12/15-脂氧合酶是催化不饱和脂肪酸代谢的关键酶之一。研究表明,12/15-脂氧合酶及其代谢产物可通过多种途径阻碍干细胞成骨分化,促进破骨细胞生成与骨吸收,但可防止炎性反应相关的骨丢失。12/15-脂氧合酶对绝经前后女性的骨密度(BMD)产生不同的影响。本文就12/15-脂氧合酶对骨代谢调控的研究进展进行综述。

15-脂氧合酶在肿瘤中的作用

15-脂氧合酶(15-LOX)是催化不饱和脂肪酸代谢的关键酶之一。人类中存有两型15-LOX:15-LOX-1和15-LOX-2,两者在催化性质、组织分布及肿瘤生物学功能上有所差异。近年来大量研究发现15-LOX在结肠癌、前列腺癌、食道癌等恶性肿瘤表达较正常组织降低,能够抑制肿瘤生长,并使其发生凋亡,在肿瘤发生发展中起着重要作用。以15-LOX为靶向的肿瘤防治及其临床应用具有广阔的前景。

定量RT-PCR法检测冠心病患者外周血15-脂氧合酶基因表达水平的研究

目的建立检测15-脂氧合酶(15-Lipoxygenase,15-LOX)mRNA含量的实时荧光定量RT-PCR方法,测定冠心病患者外周血单核细胞中15-LOX的基因表达水平,探讨15-LOX基因表达水平与冠状动脉粥样硬化发生、发展的关系。方法构建重组质粒pMD18-T-15-LOX作为定量模板,建立以Taqman探针技术为基础的Real-ti me定量RT-PCR方法,测定了60例冠状动脉粥样硬化性心脏病患者和40例健康对照组白细胞中15-LOX mRNA的含量。结果15-LOX mRNA在60例患者单核细胞中的表达范围为4.23×104～2.67×107copy/mL;40例健康对照的表达范围为6.15×103～5.25×106copy/mL,冠心病组15-LOXmRNA的平均拷贝数显著高于健康对照组〔(7.43±3.81)×105vs(4.79±1.76)×104;P<0.05〕。结论成功建立了15-LOX基因表达含量的荧光定量检测方法,检测发现冠状动脉粥样硬化性心脏病患者单核细胞中15-脂氧合酶mRNA的含量显著高于健康对照组,单核细胞中的15-LOX表达量与动脉粥样硬化的发生、发展存在一定的相关性。

15-羟二十碳四烯酸下调肺动脉内皮型一氧化氮合酶的活性(英文)

15-羟二十碳四烯酸(15-hydroxyeicosatetraenoic acid,15-HETE)在低氧性肺血管收缩中起着重要作用,低氧肺动脉高压 下调内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS),使一氧化氮(nitric oxide,NO)的产量下降,但目前尚无关 于15-HETE与eNOS／NO相互作用研究的报道。我们通过Wistar大鼠肺动脉环张力、牛肺动脉内皮细胞NO产量、总eNOS 表达及eNOS磷酸化测定等方法对15-HETE与eNOS／NO的相互作用进行研究。首先分离大鼠肺动脉,分为eNOS抑制剂L- NAME组(0．1 mmol／L)、去血管内皮组与内皮完整组,用15-HETE作用大鼠离体肺动脉环,测定肺动脉张力。结果表明, L-NAME组、去除内皮组与内皮完整组分别比较,15-HETE对血管的收缩作用增强,且都有统计学意义(P<0．05)。培养牛肺 动脉内皮细胞,分别用15-HETE、15-脂氧酶(15-lipoxygenase,15-LO)抑制剂[(cinnamyl 3,4-dihydroxy-[alpha]-cyanocinnamate, CDC)利(nordihydroguiairetic acid,NDGA)]处理细胞,通过Greiss方法检测亚硝酸盐含量,间接测定NO产量,与对照组比较, 1 μmol／L 15-HETE 明显降低肺动脉内皮细胞NO水平(P<0．05), 10 μmol／L CDC和0．1 mmol／L NDGA显著增加NO水平(分别 是P<0．05,P<0．01);通过Western blot检测不同时间(5,10,15,20,30,60 min)eNOS的表达情况,结果显示,15- HETE的小同作用时间,没有引起eNOS表达的明显不同;用苏氨酸495位点磷酸化eNOS(Thr495)抗体进行免疫沉淀,再用 总eNOS抗体和15-LO抗体通过Western blot检测磷酸化型含量,间接测定eNOS活性,结果表明15-HETE增强Thr495磷酸 化型eNOS含量。由于Thr495为eNOS抑制性磷酸化位点,因此15-HETE降低eNOS活性。这些数据表明;15-HETE的缩 血管作用有eNOS／NO参与,15-HETE可以通过磷酸化Thr495位点降低eNOS活性,并且首次发现磷酸化eNOS(Thr495)和15- LO之间存在蛋白质相互作用。

12/15-脂氧合酶抑制剂黄芩素对软骨细胞凋亡的抑制作用研究

目的探讨12/15-脂氧合酶抑制剂黄芩素(Baicalein)对硝普钠(SNP)诱导的软骨细胞凋亡的抑制作用及可能机制。方法取8周雄性SD大鼠膝关节软骨,采用Ⅱ型胶原酶消化法提取软骨细胞并体外培养。设置对照组、SNP凋亡组和Baicalein给药组,以0.5 m M SNP作用24小时诱导软骨细胞凋亡,以5 M,25 M,50 M,100 M不同浓度的Baicalein作用细胞,确定最适浓度,对照组仅加入同体积溶剂(蒸馏水)。CCK8法检测药物对细胞毒性;Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡;免疫荧光观测凋亡诱导因子(AIF)在软骨细胞中的定位。结果 Baicalein在各浓度下对软骨细胞无明显毒性,与对照组相比,凋亡组软骨细胞活性明显下降(<0.01),与凋亡组相比,给药组细胞活性浓度依赖性地升高(<0.01);流式检测显示对照组软骨细胞早期凋亡率3.16%,凋亡组27.8%,100 M Baicalein给药组14.1%;免疫荧光检测显示,凋亡组AIF出现核内移位,100 M Baicalein给药组AIF核移位受到抑制。结论 Baicalein通过抑制12/15-脂氧合酶活性,进而抑制AIF从线粒体中的释放及核转位,发挥抗软骨细胞凋亡作用。

15-脂氧合酶-1表达与活性调节及其机制

15-脂氧合酶-1(15-LOX-1)可将亚油酸、花生四烯酸分别代谢为13-羟基十八碳二烯酸和15-羟基二十碳四烷酸。15-LOX-1及其代谢产物在肿瘤的发生发展过程中起着重要作用。15-LOX-1在机体内的分布具有组织特异性,其表达量和酶活性受其基因结构、细胞质Ca2+及自身自杀性灭活的调节;在不同肿瘤组织中其表达活性也不同。IL-4,IL-13,组蛋白脱乙酰化酶抑制剂、非甾体类抗炎药及DNA甲基转移酶抑制剂等多种生物分子能够在体外诱导15-LOX-1表达。

15-脂氧合酶及其调控的信号通路在肿瘤中的作用

由于人口的增长和老龄化,肿瘤发病率逐年增加。有研究表明,信号通路的激活和细胞因子的参与均可影响肿瘤的发展。脂氧合酶(LOX)作为脂质过氧化酶可催化多元不饱和脂肪酸形成生物脂参与人体多方面生理过程的调节,包括肿瘤。15-LOX在癌症的发生、发展中也发挥促进或抑制的作用,其中一个亚型15-LOX-1被认为是前列腺癌的致癌因子,在结肠癌中发挥抑制作用。而另一个亚型15-LOX-2在抑制前列腺癌的同时还能促进肾癌的发展。目前15-LOX在癌症中的确切发病机制仍不明确。

创伤性脑损伤后大鼠脑组织12/15-脂氧合酶的表达及作用研究

目的 12/15-脂氧合酶(12/15-lipoxygenase,12/15-LOX)参与多种中枢神经系统疾病病理过程,与神经系统氧化应激、神经细胞炎症和凋亡密切相关,但对12/15-LOX代谢途径在创伤性脑损伤(traum atic brain in jury,TB I)病理机制中的研究尚少见报道。文中探讨12/15-LOX在TB I后的表达及其对TB I后皮层凋亡和炎症中的调节作用。方法探讨TB I后12/15-LOX的表达时相变化,选择12/15-LOX表达最高的时间点,观察应用其抑制剂黄芩素对神经细胞炎症及凋亡的影响。结果 12/15-LOX在TB I后表达显着增加,TB I后6 h甚至更早即开始升高,第2天达到高峰,第7天恢复至正常水平。与TB I组相比,应用黄芩素抑制12/15-LOX能显著减少神经细胞凋亡,降低脑组织IL-6和TNF-α的表达。皮层神经细胞凋亡指数从(57.97±5.08)%下降至(47.70±4.63)%,脑组织中炎症因子IL-6含量从(0.65±0.08)ng/g降至(0.56±0.05)ng/g,TNF-α含量从(2.55±0.32)ng/g降至(2.10±0.20)ng/g。结论 12/15-LOX在TB I后炎症及凋亡的病理过程中起重要作用。12/15-LOX抑制剂可能成为有效的治疗TB I的神经保护剂。