微小RNA-150-3p靶向调控IGF1表达及对胃癌细胞侵袭迁移的影响

目的探讨微小RNA-150-3p(miR-150-3p)对胰岛素样生长因子1(IGF1)表达的靶向调控及胃癌细胞侵袭迁移的影响。方法采用荧光定量PCR(QPCR)检测正常胃黏膜细胞GES1和胃癌细胞系(AGS和MGC803)的miR-150-3p水平;脂质体法向MGC803细胞转染miR-150-3p模拟物(过表达组)或抑制物(抑制组)并以转染阴性对照序列的细胞为对照组,采用QPCR检测转染24 h后的miR-150-3p和IGF1水平以评估转染效果,划痕实验和Transwell实验分别检测划痕愈合率和穿膜细胞数目,Western blotting检测IGF1、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)水平,双荧光素酶报告基因实验检测miR-150-3p与IGF1的靶向关系。结果AGS和MGC803细胞的miR-150-3p水平为3.711±0.726和4.861±0.854,均高于GES1细胞的1.025±0.265(P<0.05)。对照组转染24 h后的miR-150-3p水平为1.045±0.574,过表达组的升高至4.168±0.897,而抑制组的降低为0.247±0.097(P<0.05)。对照组的划痕愈合率和穿膜细胞数分别为(54.5±3.2)%和(195.2±12.8)个,过表达组的分别升高至(75.2±4.1)%和(274.6±15.9)个,而抑制组降低至(21.5±2.1)%和(124.7±10.6)个(P<0.05)。与对照组比较,过表达组的p-PI3K和p-Akt水平升高,而抑制组的两蛋白水平降低(P<0.05)。miR-150-3p模拟物可抑制IGF1野生型3’端非翻译区的相对荧光素酶活性(P<0.05),但对突变型的无影响(P>0.05)。对照组IGF1的mRNA和蛋白水平分别为1.025±0.086和0.458±0.073,而过表达组分别降低至0.341±0.059和0.147±0.081(P<0.05)。结论miR-150-3p在胃癌细胞中高表达,下调该miRNA水平可抑制迁移侵袭及PI3K/Akt通路激活,可能通过靶向IGF1来发挥促癌作用,该miRNA有望成为胃癌的潜在诊疗靶点。

雷公藤多苷对高糖诱导的人肾足细胞增殖、凋亡和炎症的影响及其调控机制

目的:探讨雷公藤多苷对高糖诱导的人肾足细胞增殖、凋亡、炎症的影响及其对miR-150-3p的调控作用。方法:将正常培养的人肾足细胞设为对照组(Control组);采用高糖诱导人肾足细胞建立细胞损伤模型,设为模型组(HG组);用不同浓度(30、60、90mg/ml)雷公藤多苷处理高糖诱导的人肾足细胞(HG+Tri-30组、HG+Tri-60组、HG+Tri-90组);将miR-inhibitor-NC、miR-150-3p inhibitor转染入高糖诱导的人肾足细胞(HG+miR-inhibitor-NC组、HG+miR-150-3p inhibitor组);将miR-mimics-NC、miR-150-3p mimics转染入高糖诱导的人肾足细胞后加入90mg/ml雷公藤多苷处理(HG+Tri-90+miR-mimics-NC组、HG+Tri-90+miR-150-3p mimics组)。采用MTT法检测细胞增殖;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;采用ELISA法检测超敏C反应蛋白(hs-CRP)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;采用qRT-PCR法检测miR-150-3p表达量;采用Western blot法检测CyclinD1、Bcl-2、P21、Bax蛋白表达量。结果:与Control组比较,HG组吸光度(OD)值和CyclinD1、Bcl-2蛋白水平降低,凋亡率、miR-150-3p表达水平、P21、Bax蛋白水平以及hs-CRP、IL-1β、TNF-α水平升高(P<0.05);与HG组比较,HG+Tri-30组、HG+Tri-60组、HG+Tri-90组OD值和CyclinD1、Bcl-2蛋白水平升高,凋亡率、miR-150-3p表达水平、P21、Bax蛋白水平以及hs-CRP、IL-1β、TNF-α水平降低(P<0.05)。与control组比较,HG+miR-inhibitor-NC组OD值、CyclinD1、Bcl-2蛋白水平降低,凋亡率、miR-150-3p表达水平、P21、Bax蛋白水平以及hs-CRP、IL-1β、TNF-α水平升高(P<0.05);与HG+miR-inhibitor-NC组比较,HG+miR-150-3p inhibitor组OD值、CyclinD1、Bcl-2蛋白水平升高,凋亡率、miR-150-3p表达水平、P21、Bax蛋白水平以及hs-CRP、IL-1β、TNF-α水平降低(P<0.05)。与HG+Tri-90+miR-mimics-NC组比较,HG+Tri-90+miR-150-3p mimics组OD值和CyclinD1、Bcl-2蛋白水平降低,miR-150-3p表达水平、凋亡率、P21、Bax蛋白水平以及hs-CRP、IL-1β、TNF-α水平升高(P<0.05)。结论:雷公藤多苷可能是通过抑制miR-150-3p表达来促进细胞增殖及抑制细胞凋亡和炎症反应,从而减轻高糖诱导的人肾足细胞损伤。

miR-150-3p靶向CDH2基因对缺氧性肺动脉高压新生大鼠肺组织损伤的影响

目的:探究miR-150-3p靶向CDH2基因对缺氧性肺动脉高压(HPH)新生大鼠肺组织损伤的影响。方法:将新生Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、阴性对照组和miR-150-3p过表达组,每组10只。除对照组外,其余各组构建新生大鼠HPH模型。分别检测各组大鼠缺氧3、6、12 d时的平均肺动脉压(mPAP),酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和内皮素-1(ET-1)水平;在缺氧12 d时,Western blotting检测大鼠肺组织HIF-1α、ET-1、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和钙黏蛋白2(CDH2)表达情况,实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测大鼠肺组织miR-150-3p、CDH2 mRNA表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-150-3p与CDH2之间的靶向关系。结果:与对照组相比,模型组和阴性对照组大鼠出现反应迟钝、萎靡不振、食量减少、肺组织炎症细胞浸润、肺泡大小改变等现象;大鼠mPAP,血清HIF-1α、ET-1水平,肺组织HIF-1α、ET-1、iNOS和CDH2蛋白表达均明显升高(P<0.05);肺组织miR-150-3p表达明显降低,CDH2 mRNA表达明显升高(P<0.05)。与模型组、相比,阴性对照组上述指标均无显著差异(P>0.05)。与模型组、阴性对照组相比,miR-150-3p过表达组大鼠反应迟钝、炎症细胞浸润等不良现象均获得良好改善,且大鼠mPAP,血清HIF-1α、ET-1水平,肺组织HIF-1α、ET-1、iNOS和CDH2蛋白表达均降低(P<0.05);肺组织miR-150-3p表达明显升高,CDH2 mRNA表达明显降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果证明CDH2为miR-150-3p的靶基因。结论:miR-150-3p能够通过靶向CDH2基因减轻HPH新生大鼠肺组织损伤。