重组结核分支杆菌16000蛋白抗原(rPA16)的免疫原性研究

目的 :研究结核分枝杆菌重组 16 0 0 0蛋白 (rPA16 )诱发家兔产生抗体的能力并评价其血清学诊断的价值。方法 :家兔按注射的抗原及佐剂的不同分组 ,皮下多点注射分别进行免疫。 6次免疫后采血 ,双向琼脂扩散试验和酶联免疫吸附试验 (ELISA)跟踪兔血清抗体效价的时间效应并检测兔血清与所试各类分支杆菌PPD有无交叉反应 ;同时检测rPA16与各分支杆菌PPD的免疫羊血清的反应 ,并用rPA16抗原检测人血清标本 ,分析该抗原的临床检测的敏感性和特异性。结果 :兔血清抗体效价结果显示 :5个月后 ,加佐剂的抗原组的兔免疫血清仍能检测到抗体 ,不加佐剂组 2个月后血清抗体检测即为阴性。ELISA检测兔免疫血清比双向琼脂扩散方法要更敏感 ,rPA16抗原加佐剂引起的兔血清抗体滴度最高可达 1∶6 4 0 0 ,不加佐剂组的血清抗体滴度仅为 1∶4 0 0。ELISA法分析抗rPA16的兔血清的特异性表明其特异性较好 ,仅与牛、人型结核分支杆菌的PPD呈阳性反应 ,与其他所试分支杆菌PPD反应均为阴性。同时又分析了rPA16抗原的特异性 ,与人型PPD相比 ,该抗原只与所试各类分支杆菌、BCG、牛分支杆菌免疫的血清呈阳性反应 ,而人型PPD则基本上与结核分支杆菌免疫的血清均呈阳性反应。ELISA检测血清标本结果 :肺结核病组中rPA16和PPD检测敏感性?

结核分支杆菌16000抗原基因在大肠杆菌中的高效表达及其产物纯化

目的 获得高效表达结核分支杆菌１６ ０００ 抗原的大肠杆菌工程菌，将培养物纯化后得到重组１６ ０００ 蛋白抗原纯品，并检测其免疫学特性。方法 用聚合酶链反应（ＰＣＲ） 方法获得目的基因构建大肠杆菌高效表达株。聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳＰＡＧＥ） 分析重组蛋白抗原的相对分子质量大小及表达形式。ＤＥＡＥ及ＰＥＩ凝胶纯化重组蛋白。Ｗｅｓｔｅｒｎ 印迹及酶联免疫吸附测定法（ＥＬＩＳＡ） 分析重组蛋白的免疫原性。结果 构建了具有正确基因序列的重组表达载体，在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中诱导表达，重组蛋白占菌体总蛋白的４０％ ，Ｗｅｓｔｅｒｎ 印迹结果证实该重组蛋白能与抗结核分支杆菌多克隆抗体发生特异免疫结合反应。ＥＬＩＳＡ分析中，该纯化的重组抗原能区别抗结核抗体阳性患者血清及正常人血清。结论 实验中获得了能高效表达１６ ０００ 蛋白抗原的大肠杆菌工程菌，以可溶性形式存于胞浆内。该重组蛋白具有特异的免疫原性。

抗炎多肽对内毒素诱导的小鼠急性肺损伤的保护作用

目的研究抗炎多肽AF2（antiflammin-2）和重组多肽R2（recombinant peptide sequence2）对内毒素（LPS）诱导的小鼠急性肺损伤（ALI）的保护作用，及其对肺组织clara细胞16000蛋白（CCl6）和表面活性蛋白A（SP—A）表达的影响。方法Balb／c雄性小鼠随机分为5组：对照组，ALI模型组，AF2治疗组，R2治疗组和氢化可的松（HC）治疗组。ALI模型组和各治疗组分别腹腔注射LPS复制小鼠肺损伤模型；治疗组随后注射AF2（2mg／kg）、R2（2mg／kg）或氢化可的松（25mg／kg），对照组和Au模型组注射等量的生理盐水。在6h记录动物的呼吸频率；在12h处死动物，肺组织切片观察肺病理变化；肺组织研磨提取总RNA，半定量法检测CC16和SP—A的表达。结果（1）各治疗组动物6h呼吸频率均低于ALI模型组[（112±4）次／30S]，分别为AF2治疗组（108±2）次／30S、R2治疗组（101±2）次／30S、HC治疗组（96±2）次／30S，其中R2和HC治疗组与ALI模型组比较，差异有统计学意义。（2）肺组织病理学观察显示AF2、R2对LPS诱导的小鼠ALI肺组织的渗出、炎症细胞浸润有一定的抑制作用，各治疗组病理评分与ALI模型组比较差别均有统计学意义。（3）与ALI模型组比较，AF2治疗组CC16的表达上调，差异有统计学意义，R2和HC治疗组SP—A的表达上调，差异有统计学意义。结论抗炎多肽AF2和重组多肽R2对内毒素诱导的小鼠ALI有一定的保护作用。