携带16 kD抗原多肽的PP7噬菌体样颗粒的制备及其对结核病诊断的价值评估

目的获得表面展示有16kD抗原多肽(16kD91-110)的PP7噬菌体样颗粒(bacteriophage-like particle,BLPs),并评价其在结核病诊断中的价值。方法用普通PCR技术扩增出含16kD91-110多肽编码基因的PP7衣壳蛋白基因,将其插入到pETDuet-2PP7载体中,获得pETDuet-2PP7-16kD91-110质粒;将上述重组质粒转化大肠埃希菌,诱导表达产物用SDS-PAGE和western blot进行鉴定;将纯化的2PP7-16kD91-110作为刺激抗原,用ELISA间接法检测结核病患者血清中的16kD抗体水平。结果SDS-PAGE及电镜结果显示成功表达2PP7-16kD91-110BLPs,并且展示于PP7 BLPs表面的16kD91-110多肽表位能特异性与抗16kD抗体结合;对活动性肺结核和潜伏性肺结核患者,以2PP7-16kD91-110BLPs为刺激抗原的全血释放γ干扰素试验的敏感性分别为75%和82.9%,与北京万泰结核分枝杆菌相关γ干扰素释放试剂盒相比,差异无统计学意义。结论成功制备表面展示有16kD91-110多肽的PP7 BLPs,为应用γ干扰素释放试验检测结核分枝杆菌提供了一种安全性高、稳定性好、价格低廉的刺激抗原,为结核病的诊断提供一种新的思路。

IgG抗体适体与16kD抗原联合检测血清结核抗体研究

目的研究结核患者IgG抗体适体与16 kD抗原组合在结核病血清学检测中的应用价值。方法 SELEX技术筛选得到结核患者IgG抗体适体,并将适体构建的混合ELISA体系用于少量血清标本的检测,初步鉴定适体的检测效果,然后将适体与16 kD抗原联合构建ELISA检测体系进行221份血清标本的分析。结果 SELEX筛选得到4个高亲和适体;单适体血清学检测结果显示,适体之间存在交叉互补性;适体两两组合检测效果显示,N1+N6组合的阳性平均值与阴性平均值的比值最高;221份血清标本检测结果显示,N1+N6适体组合、16 kD抗原以及N1+N6+16 kD组合3种检测体系的敏感性和特异性分别为47.31%和92.97%、49.46%和91.41%、51.61%和92.19%,N1+N6适体组合、16 kD抗原以及N1+N6+16 kD组合3种检测体系的结核病组和健康对照组之间的t检验结果依次为t=6.564,P<0.0001;t=5.279,P<0.0001;t=4.348,P<0.0001,结核病组和非结核疾病对照组之间的t检验结果依次为t=4.196,P<0.0001;t=3.014,P=0.0031;t=2.929,P=0.004,差异均具有统计学意义,三种检测方法之间卡方检验显示,差异无统计学意义(P>0.05);单独适体组合与单独抗原检测合并计算的敏感性、特异性为67.74%、84.38%,与N1+N6+16 kD组合检测结果的卡方检验显示,敏感性差异有统计学意义(χ2=8.52,P<0.05),特异性差异无统计学意义(χ2=2.04,P>0.05)。结论 SELEX技术筛选获得的特异性IgG抗体适体和16KD抗原联合具有良好的结核病血清学诊断价值,可用于结核病的实验室诊断。