结核分枝杆菌16kD-CFP10-19kD融合蛋白的构建表达及纯化

目的构建结核分枝杆菌(MTB)16k D-CFP10-19k D融合蛋白表达载体,在大肠杆菌中对蛋白进行表达并经过纯化获得16k D-CFP10-19k D融合蛋白。方法利用聚合酶链式反应(PCR)方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板扩增16k D、CFP10及19k D基因,经过限制性内切酶处理并依次与p ET28a载体连接,构建p ET28a-16k D-CFP10-19k D重组质粒,转化至大肠杆菌表达株BL21中,在IPTG及低温诱导下获得目标蛋白,镍柱层析获得纯化蛋白。结果经过酶切及测序鉴定验证p ET28a-16k D-CFP10-19k D重组质粒构建正确,原核表达获得可溶性目标蛋白并对其初步纯化。结论成功构建表达并纯化获得16k D-CFP10-19k D融合蛋白,为开发新的结核病特异性诊断抗原研究奠定基础。

支气管哮喘患者CC16与气道炎症及Th1/Th2细胞因子的关系

目的探讨支气管哮喘(哮喘)患者CC16与气道炎症及Th1/Th2细胞因子的关系。方法采取病例对照研究,收集25例哮喘急性发作期患者和33例健康对照组。采外周静脉血分离血浆,提取外周血单个核细胞(PBMC),用ELISA测定血浆中CC16、干扰素-γ(IFN-γ)、白介素-4(IL-4)的水平;用RT-PCR法检测PBMC转录因子T-bet和Gata-3mRNA表达水平。结果 1.哮喘组CC16及IFN-γ分别为(21.96±7.31)ng/ml,(118.73±22.59)pg/ml,明显低于对照组[分别为(64.88±25.27)ng/ml和(145.53±29.50)pg/ml,(均P<0.01)],哮喘组IL-4(425.22±4.37)pg/ml高于对照组(69.72±10.15)pg/ml,(P<0.01)。2.哮喘组T-betmRNA、T-bet/GATA-3表达水平(0.12±0.01,0.25±0.04)显著低于对照组(0.48±0.12,1.894±0.65)(均P<0.01),GATA-3mRNA表达(0.45±0.05)较对照组明显升高(0.30±0.08)(P<0.01)。3.CC16与T-betmRNA表达水平、T-bet/GATA-3呈正相关(r分别为0.792,0.761,均P<0.01);与GATA-3mRNA无明显相关性(r=-0.146,P=0.551)。结论 CC16参与哮喘气道炎症反应,并以Th1/Th2细胞因子失衡为特点。

CC16及转录因子T-bet、GATA-3对支气管哮喘患者气道炎症的调控作用

目的探讨Clara细胞分泌蛋白(CC16)及转录因子T-bet、GATA-3在支气管哮喘患者气道炎症中的价值。方法采取病例对照研究,收集25例哮喘急性发作期患者和33例健康对照组。采外周静脉血分离血浆,提取外周血单个核细胞(PBMC),用ELISA测定血浆中CC16、IFN-γ、IL-4的水平;用RT-PCR法检测PBMC转录因子T-bet mRNA和Gata-3 mRNA表达水平。结果哮喘组CC16及IFN-γ分别为(21.96±7.31)ng/mL和(118.73±22.59)pg/mL,明显低于对照组[(64.88±25.27)ng/mL和(145.53±29.50)pg/mL,P均<0.01],哮喘组IL-4高于对照组[(425.22±4.37)pg/mL比(69.72±10.15)pg/mL,P<0.01]。哮喘组T-bet mRNA、T-bet/GATA-3表达水平(0.12±0.01,0.25±0.04)显著低于对照组(0.48±0.12,1.89±0.65)(P均<0.01),GATA-3 mRNA表达(0.45±0.05)较对照组(0.30±0.08)明显升高(P<0.01)。CC16与T-bet mRNA表达水平、T-bet/GATA-3呈正相关(r值分别为0.792和0.761,P均<0.01);与GATA-3 mRNA无明显相关性(r=-0.146,P=0.551)。结论哮喘患者CC16水平降低,对气道炎症的保护性削弱,可能与T-bet/GATA-3和IFN-γ/IL-4的失衡有关。

不同潮气量机械通气大白兔肺组织TNF-α和CC16的变化

目的探讨不同潮气量(TV)机械通气对大白兔肺组织TNF-α和CC16的影响。方法将30只健康雄性大白兔按随机数字表随机分成对照组、小潮气量组及大潮气量组,每组10只。对照组插管后不进行机械通气,其他组插管后机械通气,小潮气量组TV 8 ml/kg,大潮气量组TV 25 ml/kg,其他参数相同。通气时间24 h。观察实验前后动脉血氧分压变化、ELISA法测定肺组织TNF-α及CC16、测定肺组织湿/干重(W/D)值、制备肺组织石蜡切片,在显微镜下观察肺组织病理学变化。结果与对照组比较,大潮气量组实验结束动脉氧分压降低(P<0.05),肺组织W/D、TNF-α升高,CC16降低(P<0.01),小潮气量组相应指标无显著变化(P>0.05)。大潮气量组肺组织病理切片可见肺组织水肿。结论大潮气量机械通气发生了呼吸机相关性肺损伤(VILI),表现为动脉氧分压、肺组织W/D、TNF-α、肺组织病理切片的变化,而同时肺组织CC16下降,表明CC16可能在VILI发病机制中起重要作用。

Clara细胞分泌蛋白CC16与支气管哮喘的关系

CC16(Clara细胞分泌蛋白-16)是Clara细胞主要的分泌物,具有抗炎、抗氧化、调节免疫及抑制肿瘤的生成和转移等多种生物活性。我国近年来研究显示CC16与支气管哮喘的发病机制、诊断及治疗有密切关系,其中CC16与Th1/Th2失衡的关系成为一研究热点。现就CC16与支气管哮喘的关系作一综述,为以后进一步深入研究作铺垫。

多沙普仑对比尼可刹米治疗COPD合并呼吸衰竭患者临床疗效

目的观察多沙普仑、尼可刹米不同呼吸兴奋剂治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并呼吸衰竭患者疗效及其对肺表面活性蛋白(SP-D)和Clara细胞分泌蛋白(CC16)表达情况的影响。方法选取2016年12月-2017年12月邢台医学高等专科学校第二附属医院收治的194例COPD合并呼吸衰竭患者,采用随机数字表法将患者分为多沙普仑组和尼可刹米组,每组97例;在常规治疗的基础上,尼可刹米组患者给予尼可刹米静脉滴注;而多沙普仑组给予多沙普仑静脉滴注。治疗一个疗程后对患者疗效进行评估,比较治疗前后患者血气分析指标、6 min步行试验结果和生活质量,检测治疗前后血清中SP-D与CC16含量,记录2组不良反应情况。结果多沙普仑组总有效率(94.84%)明显高于尼可刹米组(75.25%),差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后2组患者PaO_(2)、OI升高,PaCO_(2)降低,多沙普仑组PaO_(2)、OI显著高于尼可刹米组[(83.61±7.34)mmHg vs(72.65±6.85)mmHg,(298.67±21.34)mmHg vs(262.41±26.64)mmHg,P<0.01],PaCO_(2)显著低于尼可刹米组[(51.03±5.71)mmHg vs(35.10±6.22)mmHg,P<0.01]。多沙普仑组患者出院后3、6个月6 min步行距离高于尼可刹米组患者(P<0.05)。多沙普仑组出院后3、6个月生活质量优于尼可刹米组(P<0.05)。治疗1个疗程后2组患者血清SP-D降低、CC16升高,并且多沙普仑组SP-D低于尼可刹米组[(0.52±0.09)ng/mL vs(0.64±0.07)ng/mL,P<0.01],而CC16水平高于尼可刹米组[(0.21±0.05)pg/mL vs(0.28±0.04)pg/mL,P<0.01]。多沙普仑组出院91例,尼可刹米组出院71例。多沙普仑组改有创通气率较尼可刹米组明显降低(P<0.05)。2组不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论多沙普仑较尼可刹米治疗COPD合并呼吸衰竭患者临床疗效更加明确,能够有效改善PaO_(2)、PaCO_(2),提高患者远期生活质量,同时降低SP-D水平,提高CCL16表达水平,安全可靠,具有一定临床应用价值。