吉祥草鲜、干品挥发油对LPS诱导的16-HBE细胞炎症的作用及机制研究

目的:研究吉祥草鲜、干品挥发油对脂多糖(LPS)诱导人支气管上皮细胞(16-HBE)炎症的作用及其机制。方法:MTT法检测各组药物对细胞活力的影响;ELISA法筛选LPS最佳诱导浓度和时间,检测给药12 h后各组上清液中IL-6、TNF-α的分泌量;qPCR法检测各组细胞内IL-6、TNF-α、iNOS mRNA表达;Western blot法分析各组细胞P38MAPK、p-P38MAPK、IκBα、p-IκBα、NF-κBP65、p-NF-κBP65蛋白表达。结果:与空白对照组比较,LPS刺激后上清液中IL-6、TNF-α的分泌量显著升高(P<0.001),表明LPS刺激16-HBE产生炎症,确定最佳刺激方案是10 mg/L LPS连续刺激12 h;与模型组比较,实验组IL-6、TNF-α显著降低,细胞内IL-6、TNF-α、iNOS mRNA的表达被抑制,P38、IκBα、P65蛋白的表达显著升高,p-P38、p-IκBα、p-P65蛋白表达显著降低(P<0.05~P<0.001)。结论:吉祥草鲜、干品挥发油均可通过抑制MAPK和NF-κB信号通路上关键蛋白的磷酸化来阻碍通路的活化,从而下调下游相关炎症因子的表达,发挥抗炎活性。

BPDE诱发16HBE恶性转化过程中eIF3 p36的表达变化

目的探讨二羟环氧苯并芘(BPDE)诱发人支气管上皮细胞(16HBE)恶性转化过程中不同阶段真核生物蛋白翻译启始因子(eIF3p36mRNA)表达水平的变化,为进一步阐明BPDE的分子致癌机理提供线索。方法应用RT-PCR和FQ-PCR方法,检测并分析BPDE诱发16HBE恶性转化不同阶段的eIF3p36mRNA表达量的变化。结果相对于非转化对照细胞,BPDE诱发恶性转化16HBE不同阶段细胞(转化细胞和成瘤细胞)的eIF3p36mR-NA基因表达水平均显著高于对照组(P<0.01或P<0.05),其中BPDE-转化细胞的eIF3p36平均表达量分别是对照细胞的2.3～5.1倍;而BPDE-转化细胞与BPDE-成瘤细胞的eIF3p36平均表达量相比,差别无显著性(P>0.05),提示eIF3p36的异常表达量与BPDE诱发16HBE细胞恶变程度之间存在一定的正向关系。结论BPDE在诱发16HBE细胞恶变过程中,存在明显的eIF3p36的异常表达现象,其表达水平与细胞的恶变程度密切相关,这可能是BPDE诱发人细胞肿瘤的重要分子致癌机理之一。

PM2.5通过ROS-Nrf2/NF-κB信号通路诱导人支气管上皮细胞炎症反应

目的探讨PM2.5暴露对人支气管上皮细胞(16-HBE)炎症反应的影响。方法2018年12月选择辽宁省沈阳市黄河北大街为采样地点收集空气中的细颗粒物,用浓度为12.5、25、50和100μg/mL PM2.5分别处理16-HBE细胞0、6、12和24 h,采用CCK-8检测16-HBE细胞活性。酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液中白介素–1(IL-1)、白介素–6(IL-6)、肿瘤坏死因子–α(TNF-α)、基质金属蛋白酶–9(MMP-9)的变化水平,荧光探针法检测细胞活性氧(ROS)相对水平,免疫印迹(WB)法检测细胞蛋白核因子E2相关因子2(Nrf2)和核因子–KB(NF-κB)通路中的IKK和P65的水平。结果PM2.5能够诱导人支气管上皮细胞增殖活性的降低和炎症反应的发生,且具有时间依赖性和剂量依赖性。结论PM2.5暴露通过ROS-Nrf2/Nf-kb信号通路诱导人呼吸道上皮细胞数量的减少和炎症反应的发生。

维生素E对纳米二氧化硅诱导人支气管上皮细胞损伤的保护作用

目的探讨纳米二氧化硅(nano-SiO_2)暴露对人支气管上皮细胞(16 HBE)的损伤作用及维生素E对其的保护作用。方法根据CCK-8细胞毒性结果,选取对照,微米级SiO_2(micro-SiO_2,20μg/ml)、纳米nano-SiO_2(5、10和20μg/ml)和维生素E(20μg/ml nano-SiO_2+50μmol/L维生素E)处理16 HBE细胞24 h,采用倒置显微镜观察细胞形态改变,Hochest 33342和膜联蛋白V-碘化丙啶(PI)双染法检测细胞凋亡,RNA酶A消化和PI染色来检测细胞周期分布。结果当nano-SiO_2浓度达10μg/ml时,细胞活力明显降低(P<0.05),随着nano-SiO_2浓度进一步增高,细胞活力呈剂量依赖性降低;细胞体积缩小,核固缩,细胞的折光性减弱。随着nano-SiO_2浓度的增加,凋亡率呈剂量依赖性升高;而维生素E组较20μg/ml nano-SiO_2组,细胞凋亡率有所降低;细胞周期出现轻微的G1期阻滞,维生素E可以改善这种阻滞现象。结论维生素E干预对由于nano-SiO_2引起的16 HBE的凋亡及细胞周期改变具有一定的保护作用。

扶正解毒含药血清对染镍细胞中信号转导通路的影响

目的通过结晶硫化镍在支气管上皮细胞系(16 HBE)中磷酸化氨基末端蛋白激酶(P-JNK)和P38的表达,探讨镍致癌的分子机制和中草药对职业性肿瘤的防治作用。方法用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白免疫印迹杂交(Western blot)法检测16 HBE细胞中P-JNK和P38的表达。结果硫化镍能明显激活P-JNK和P38的表达,硫化镍浓度越高,磷酸化P-JNK和P38的表达值越高,而且存在剂量-效应关系,染镍组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05、P<0.01)。结论结晶型硫化镍激活16 HBE细胞中P-JNK和P38的表达,可能是镍致癌的分子机制之一,扶正解毒含药血清对职业性肿瘤有一定的防治作用。

白介素17对脂多糖诱导人支气管上皮细胞炎症损伤的影响

目的:探讨白介素17A(interleukin-17A,IL-17A)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人支气管上皮细胞(16-HBE)炎症损伤的影响及其可能机制。方法:体外培养16-HBE细胞系,予LPS、IL-17A进行干预,分为空白对照组、LPS组、IL-17A组、IL-17A+LPS组。采用酶联免疫吸附法(Enzyme linked immunosorbent assay,Elisa)测定细胞培养液上清中IL-4、IFN-γ、IL-6、IL-8等炎症因子的水平,蛋白印迹法(Western Blot,WB)检测细胞中丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPKs)信号通路相关蛋白:细胞外调节蛋白激酶(ERK)、P38蛋白激酶(P38)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)的表达及其相应磷酸化蛋白(P-ERK、P-P38、P-JNK)的表达。体外培养16-HBE细胞系,予LPS、IL-17A以及ERK1/2抑制剂(U0126)、p38抑制剂(SB203580)和JNK抑制剂(SP600125),分为空白对照组、LPS+IL-17A组、IL-17A+LPS+UO126组、IL-17A+LPS+SB203580组、IL-17A+LPS+SP600125组。采用酶联免疫吸附法测定细胞培养液上清中IFN-γ、IL-4、IL-6、IL-8等炎症因子水平。结果:与空白对照组比较,LPS、IL-17A组,细胞上清中IL-6、IL-8的表达明显升高(P<0.01),IL-4的表达降低(空白组vs LPS组P<0.01,空白组vs IL-17A组P<0.05),细胞内磷酸化ERK、P38、JNK蛋白的表达明显增加(空白组vs LPS组P<0.05,空白组vs IL-17A组P<0.01)。IL-17A+LPS组细胞上清中IL-6、IL-8、IL-4水平及细胞内P-ERK、P-P38、P-JNK的表达较LPS、IL-17A组更高(P<0.05)。添加ERK、P38和JNK抑制剂后,与LPS+IL-17A组对比,IL-17A+LPS+U0126组、IL-17A+LPS+SB203580组和IL-17A+LPS+SP600125组细胞上清中IL-6、IL-8、IL-4水平下降(P<0.05)。结论:IL-17A可能通过上调IL-6、IL-8的表达加重LPS诱导的16-HBE细胞炎症损伤,MAPKs可能是这一过程中的重要信号转导通路。