16-O-去甲基去氧乌头碱在肠内细菌中的生物转化研究

采用人肠内细菌和乌头碱体外温孵的方法,探讨乌头碱的代谢产物16-O-去甲基去氧乌头碱在人肠内的生物转化。利用离子阱电喷雾串联质谱(ESIMS/MSn)方法直接分析16-O-去甲基去氧乌头碱的代谢产物。乌头类生物碱在ESI正离子模式条件下形成质子化分子[M+H]+。16-O-去甲基去氧乌头碱可被人肠内细菌转化,通过脱乙酰基、脱苯甲酰基、脱甲基、脱羟基以及酯化反应产生新型的单酯型、双酯型和脂类生物碱等10余种代谢产物。双酯型生物碱具有较高的毒性,相对应的单酯型和脂类生物碱毒性较低。16-O-去甲基去氧乌头碱被肠内细菌转化为单酯型和脂类生物碱会使其毒性降低。

16-O-去甲基乌头碱的生物转化及电喷雾质谱研究

采用乌头碱和人肠内细菌体外温孵的方法,探讨乌头碱在肠内的生物转化规律.乌头类生物碱在ESI正离子模式条件下形成质子化分子[M+H]+,利用离子阱电喷雾串联质谱和傅立叶离子回旋共振电喷雾串联质谱方法可以直接分析乌头碱的转化产物.本文首次报道了乌头碱在人肠内菌群环境中产生16-O-去甲基乌头碱,16-O-去甲基乌头碱可进一步被肠内细菌转化,通过脱乙酰基、脱苯甲酰基、脱甲基、脱羟基以及酯化反应,产生新型的单酯型、双酯型和20余种脂类生物碱等转化产物.

乌头碱去甲基代谢产物的量子化学计算

目的:采用量子化学计算方法进一步确定乌头碱的代谢产物结构。方法:采用密度泛函方法,在B3LYP/6-31G(d)水平上,对代谢产物的结构进行优化,在此基础上计算反应物和产物的能量,用以比较水解反应能量,并采用IEFPCM方法进行了溶剂效应计算。结果:分别比较4种可能产物的反应能量,确定乌头碱代谢产物有16-O-去甲基乌头碱和16-O-去甲基乌头次碱,水溶液中不同产物的能量差增大,进一步证实了产物的合理性。结论:量子化学计算的代谢产物与根据多级质谱裂解规律推测的结果相同,量子化学计算与HPLC-MSn结合,可为乌头碱代谢产物和代谢规律的研究提供依据。

HPLC法同时测定真武汤中11种活性成分的含量

目的:建立同时测定真武汤中5-羟甲基糠醛、(+)-儿茶素、芍药苷、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰芍药苷、6-姜酚、8-姜酚、白术内酯Ⅱ、6-姜烯酚、茯苓酸含量的方法。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为Phenomenex Kinetex C18,流动相为乙腈-0.2%磷酸水溶液(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,检测波长为285 nm(4.4~7 min,5-羟甲基糠醛)、203 nm[7~12 min,(+)-儿茶素]、233 nm(12~50 min,芍药苷、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰芍药苷)、200 nm(50~62.3 min,6-姜酚、8-姜酚;62.9~90 min,6-姜烯酚、茯苓酸)、222 nm(62.3~62.9 min,白术内酯Ⅱ),柱温为35℃,进样量为20μL。结果:5-羟甲基糠醛、(+)-儿茶素、芍药苷、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰芍药苷、6-姜酚、8-姜酚、白术内酯Ⅱ、6-姜烯酚、茯苓酸检测质量浓度线性范围分别为0.62~12.47μg/mL(r=0.999 6)、2.36~47.25μg/mL(r=0.999 7)、200.80~4 016μg/mL(r=0.999 7)、4.45~89.04μg/mL(r=0.999 6)、4.28~85.54μg/mL(r=0.999 5)、5.16~103.13μg/mL(r=0.999 9)、5.53~110.66μg/mL(r=0.999 9)、0.84~16.89μg/mL(r=0.999 8)、0.60~12.04μg/mL(r=0.999 9)、0.53~10.62μg/mL(r=0.999 5)、1.04~20.78μg/mL(r=0.999 7);定量限分别为0.155、0.590、1.210、1.112、1.070、0.258、0.553、0.421、0.153、0.354、0.431μg/mL,检测限分别为0.047、0.179、0.134、0.337、0.324、0.078、0.168、0.128、0.046、0.107、0.131μg/mL,精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于3%;加样回收率分别为96.06%~103.01%(RSD=2.64%,n=6)、95.11%~101.57%(RSD=2.58%,n=6)、97.22%~102.11%(RSD=1.93%,n=6)、96.43%~102.78%(RSD=2.35%,n=6)、96.42%~101.43%(RSD=2.15%,n=6)、96.86%~102.05%(RSD=2.10%,n=6)、95.32%~100.55%(RSD=1.87%,n=6)、97.04%~103.25%(RSD=2.22%,n=6)、96.78%~103.22%(RSD=2.62%,n=6)、97.04%~103.14%(RSD=2.28%,n=6)、97.08%~103.51%(RSD=2.94%,n=6)。结论:该方法准确、专属性好,可用于同时测定真武汤中11种活性成分的含量。

附子色泽与化学成分含量的相关性研究

目的:测定附子的色泽,建立附子中5-羟甲基糠醛(5-HMF)的含量测定方法,研究附子色泽与单酯型生物碱(苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱)和5-HMF含量的相关性。方法:采用色差仪的△L、△a、△b和△E值测定和描述色泽,采用高效液相色谱法(HPLC法)测定3个单酯型生物碱、5-HMF的含量,采用SPSS软件的数理统计方法对色泽与3个单酯型生物碱的含量及其总含量、5-HMF的含量进行回归分析,确定色差值与化学成分的相关程度。结果:附子的色差值△E介于20.13~37.05,平均值为26.80;3个单酯型生物碱的含量分别介于0.001%~0.079%、0.001%~0.011%、0.001%~0.017%,5-HMF的含量介于0~0.002%;△与苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱呈显著正相关(P<0.05),与苯甲酰次乌头原碱及3个单酯型生物碱总含量呈极显著正相关(P<0.01),与5-HMF呈负相关。结论:传统的色泽描述可以采用色差值进行客观的测定,且这种色泽测定结果可以间接地反映其中化学成分的含量,对全面评价附子的质量提供了科学依据。