沙门菌PCR-dHPLC基因分型方法建立

目的建立沙门菌聚合酶链反应-变性高效液相色谱(PCR-dHPLC)基因分型方法。方法采用16S～23S rRNA内转录间隔(ITS)作为沙门菌分型目的基因,确定特异性扩增引物,进行PCR扩增,扩增产物经dHPLC分离,根据dHPLC图谱峰型差异进行分型,并与血清学和生化分型结果比较。结果 89株沙门菌共分为12个dHPLC型(D型);所有沙门菌均有1个相同色谱峰,克隆测序结果表明,其片断大小为600 bp,其他8种食源性致病菌对照株无此色谱峰,应为沙门菌16S～23S rRNA基因序列的特征性条带,分型结果与血清学差异较大,与生化分型结果有一定一致性。结论所建立的沙门菌PCR-dHPLC基因分型方法具快速、操作方便、重复性好、成本低廉、高通量和自动化的特点。

探析细菌快速裂解方法

16S-23S rRNA基因是位于16SrRNA基因与23S rRNA基因之间的区间序列，具有较好的保守性和相对性，被认为是细菌鉴定的合适部位。我们认为能否快速有效地开展扩增该区间，聚合酶链反应（PCR）扩增前的标本处理是关键。故比较了3种裂解细菌的方法。