TMEM16A氯通道对心肌缺血再灌注后损伤大鼠乳酸脱氢酶和肌酸激酶同工酶的影响

目的探讨跨膜蛋白(TMEM) 16A氯通道对心肌缺血再灌注后损伤大鼠乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)的影响。方法选择SD大鼠分离与培养心肌细胞,分为A组(于常氧条件下培养心肌细胞3 h)、B组(心肌细胞未经任何处理,采用缺氧2 h、复氧1 h进行心肌缺血再灌注处理)、C组(采用TMEM16A氯通道激活剂1 mmol/L预处理20 min,再进行处理)、D组(采用TMEM16A氯通道抑制剂1 mmol/L预处理20 min,再进行处理),观察心肌细胞形态与存活情况,测定LDH和CK-MB、活性氧(ROS)表达水平,采用Western印迹方法测定活化型半胱天冬酶(cleaved caspase)-3、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、蛋白激酶B(Akt)表达水平。结果实验前各组细胞存活率均在95%以上,实验结束后A组、B组、C组、D组细胞存活率分别为(93. 44±4. 39)%、(51. 49±5. 22)%、(34. 29±5. 32)%和(78. 29±7. 21)%,各组间对比差异有统计学意义(P<0. 05)。B组、C组、D组CK-MB与LDH活性均明显高于A组(P<0. 05),D组CK-MB与LDH活性明显低于B组、C组(P<0. 05)。B、C组ROS水平明显高于A组(P<0. 05),D组ROS水平与B、C组相比明显减少(P<0. 05),但与A组相比差异依然有统计学意义(P<0. 05)。B、C组cleaved caspase-3、p-Akt相对表达水平明显高于A组(P<0. 05)。结论 TMEM16A氯通道关闭能降低心肌缺血再灌注后损伤大鼠LDH和CK-MB活性,降低ROS水平,抑制cleaved caspase-3/p-AKT信号通路激活,对心肌缺血再灌注后有良好的保护作用。

TMEM16A氯通道对心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨TMEM16A氯通道对心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法采用SD小鼠分离心肌细胞，分为4组，空白组正常培养细胞，模型组建立心肌缺血再灌注损伤模型，对照组在模型建立后采用Cl-free培养，实验组在模型建立后加入终浓度为0．1mmol／LTMEM16A氯通道抑制剂，记录和观察细胞存活率，GSH—Px、SOD、MDA、LDH酶活性变化及细胞内的Ca^2＋含量，TMEM16A、NF—KB表达变化情况。结果模型组与空白组比较细胞存活率降低、LDH升高（P〈0．05），对照组、实验组与模型组相比细胞存活率均升高，LDH均降低（P〈0．05）。模型组与空白组相比，细胞悬液中MDA含量升高，SOD、GSH—Px降低（P〈0．05），对照组、实验组与模型组比较细胞悬液中MDA含量降低，SOD、GSH—Px活性升高（P〈0．05）。空白组心肌细胞Ca^2＋含量为13．44±11．43，模型组为207．13±19．33，对照组和实验组为43．55±5．39和24．59±3．19，模型组最高（P〈0．05）。模型组的TMEM16A、NF—KB蛋白相对表达水平最高，其次为对照组，实验组和空白组最低，两两对比差异都有统计学意义（P〈0．05）。结论TMEM16A氯通道在心肌缺血再灌注损伤中起了重要作用，与增加细胞内氧化应激作用、NF—KB活性、细胞内Ca^2＋含量有一定的相关性。