绵羊附红细胞体部分16SrRNA基因序列测定和系统进化分析

从自然感染附红细胞体的石河子和杭州两地的绵羊无菌采集血液,分离附红细胞体并提取基因组,根据已公布的绵羊附红细胞体16S rRNA基因序列设计一对引物,进行PCR扩增。结果扩增出约1 100bp目的片段。测序结果表明:目的片段长1 080bp、1 079bp(GenBank收录号EU916726、FJ440328),同源性分析表明该序列与参考序列(AF338268)同源性达99.7%,证实该病原是绵羊附红细胞体。将该序列与5种支原体、14种血营养菌及立克次氏体等相应序列进行同源性比对,系统进化树表明,绵羊附红细胞体和其他血营养菌在进化关系上组成一个大的分支,与支原体科,支原体属病原最为接近,与立克次氏体科的病原较远。分析结果与Neimark等提出的观点一致,将这类血营养菌划归支原体科、支原体属。

Identification of Avian-Derived Ingredients in Livestock and Poultry Meat by PCR Technology

In order to establish a quick and specific method which could identify the avian-derived ingredients,this study used 16 S rRNA gene sequence as target site,and designed the specific primers of chicken,pigeon meat and quail meat. The DNA of common livestock and poultry meat( including mutton,beef,pork,rabbit meat,pigeon meat,quail meat,chicken,duck and goose) was used as template. Though PCR amplification and specific detection,a quick determination method was established to identify the avian-derived ingredients. The results showed that the selected primers could identify the ingredients of animal origin effectively and quickly. The method was convenient and concise,and could detect the chicken-derived,pigeon-derived,quail-derived ingredients in livestock and poultry food quickly and accurately.

PCR-Dotblot杂交法直接检测临床病原菌的报告

目的为了寻找临床病原菌系统，检测和鉴别的有力手段。方法用真细菌保守的１６ＳｒＲＮＡ基因为模板，以ＰＣＲ－Ｄｏｔｂｌｏｔ杂交的方法检测临床病原菌。结果它将１６ＳｒＲＮＡ基因的广谱性和变异性并存之特点和ＰＣＲ－Ｄｏｔｂｌｏｔ杂交的敏感性结合起来，对该法的建立进行了探讨，并初步用于临床感染的检测。结论为细菌通用检测法的建立提供了基础。

猪源粪肠球菌和屎肠球菌多重PCR快速鉴定方法的建立

粪肠球菌和屎肠球菌是引起猪感染发病的优势肠球菌种,以肠球菌的16 S rRNA基因设计属特异性引物,利用SodA基因多态性设计种特异性引物,同时优化反应条件,建立了能同时测定猪源粪肠球菌和屎肠球菌多重PCR方法。通过对来源于猪的临床菌株、粪便菌株和鲜猪肉菌株进行测定,均能成功扩增出属特异性片段和种特异性片段。经过与快速生化鉴定试剂盒(Vitek-32)和16 S rRNA测序方法比较,多重PCR与16 S rRNA测序方法对猪的临床菌株、粪便菌株和鲜猪肉菌株的鉴定符合率100%;与Vitek-32鉴定符合率为62.3%,其中,与分离于感染猪的临床菌株符合率仅有46.7%,特别是感染猪的屎肠球菌,符合率仅为22.3%。

维氏气单胞菌双基因PCR检测方法的建立

为了建立维氏气单胞菌双基因PCR检测方法,以维氏气单胞菌ATCC35624基因组DNA为模板,选取16SrRNA和核酸酶基因为靶基因,设计2对特异性引物,建立维氏气单胞菌双基因PCR检测方法。验证方法的敏感性与特异性,同时应用该方法对模拟污染样本进行检测。检测结果显示应用PCR方法同时扩增出大小约880bp和320bp的DNA片段,通过序列比对分析,16SrRNA基因片段、exu基因片段序列与GenBank中登录的维氏气单胞菌ATCC35624株的的同源性均为99%,方法的敏感性较高,能检测到的DNA浓度达到了1.58×10-4 ng/μL,特异性较强,只有维氏气单胞菌标准株及分离株结果呈阳性;人工模拟污染试验显示,该方法的样本检出率达到了90%,高于细菌分离培养的检出率73.3%。建立的维氏气单胞菌双基因PCR检测方法可以克服传统生化鉴定的不足,为维氏气单胞菌的检测提供新的途径。

连云港台北盐场嗜盐古菌多样性研究

为了保护和开发微生物资源,从连云港台北盐场采集卤水,通过分离筛选获得5株嗜盐古菌,编号分别为23、25、40、174和178,均为革兰氏阴性,杆状。用嗜盐古菌16SrRNA基因通用引物进行16srRNA基因扩增,克隆后测序,对测序结果进行系统发育学分析研究并构建系统发育树。结果表明:嗜盐古菌菌株23、40、174和178属于盐红杆菌属(Halorubrum),25属于盐盒菌属(Haloarcula)。

现代分子生物学技术在抗生素污水处理应用中的研究进展

为进一步优化抗生素污水中微生物的检测,介绍了实时荧光定量PCR技术、DGGE/TGGE技术、16S rRNA基因序列比较、T-RFLP技术、高通量测序技术在抗生素污水处理中的应用。分析了这些技术在研究抗生素污水处理发展中的优点及不足,并讨论了一些技术未来的发展前景。

副猪嗜血杆菌TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

根据副猪嗜血杆菌16SrRNA基N的保守序列设计特异性引物和TaqMan探针，通过反应条件优化和特异性、敏感性、重复性试验以及对临床样品的检测，建立了副猪嗜血杆菌TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。结果表明，该方法与猪肺炎支原体、巴氏杆菌、链球菌、葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌、肠球菌、乳杆菌、解淀粉芽孢杆菌、奇异变形杆菌以及猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒无交叉反应；标准品浓度在6．92×10^8-6．92×10^3 copies／μL范围内具有良好的线性关系，最低可检测到6．92×10^1copies／μL的标准品阳性质粒；批内和批间变异系数均小于3％。临床样品检测结果表明，该方法具有敏感性高、特异性好、稳定性强和快速的优点，可用于副猪嗜血杆菌感染的早期诊断和流行病学调查以及副猪嗜血杆菌的定量分析。