互花米草耐盐内生细菌分离及分子鉴定

通过不同盐浓度的LB培养基从盐生植物互花米草的根、茎、叶中分离耐盐内生细菌,结合生理生化分析和分子鉴定其菌种组成。结果表明,从互花米草的根、茎、叶中共分离出耐盐内生细菌35株,其中革兰氏染色阴性5株、M-R试验、柠檬酸盐试验均为阳性,V-P试验阳性为5株,吲哚试验阳性为13株;提取各菌株的DNA并扩增其16S rDNA序列,以HaeⅢ等4种酶进行酶切,选择不同类型酶切结果的代表菌株测序,BLAST比对分析并利用MEGA软件建立发育树初步推断出,所分离的内生细菌分别为肠杆菌属Enterobacter sp.、白翎芽孢杆菌Bacillus baekryungensis、花津滩芽孢杆菌Bacillus hwajinpoensis和芽孢杆菌属Bacillus sp.。为进一步了解耐盐植物的内生细菌组成以及作用提供了理论基础。

耐热酸性α-淀粉酶产生菌的分离鉴定及酶学特性的初步研究

从杭州双峰茶园的土样中筛选到一株耐高温酸性淀粉酶产生菌,经16s rDNA鉴定为芽胞杆菌(Bacillales bacterium.),命名为Bacillalesbacterium.SF-8。发酵液中淀粉酶活性最高达到6440U/mL(60℃、pH5.0),60℃处理100min后仍有66%酶活性,4℃放置10d后仍有57%的活性。酶的热稳定性和活性对Ca2+没有依赖性,Fe2+,Mg2+,Mn2+等常见金属离子对酶活性没有明显地抑制作用。酶活性染色揭示该酶的分子量约为60kDa。SF-8菌株产酸性淀粉酶活性高并且耐热性好,具有良好的工业应用前景。

一株降解树脂细菌的鉴定及培养基的优化

采用16SrDNA基因序列比对和进化树分析,鉴定出具有降解天然树脂能力的微生物Z75为enterobacterpulveris。同时,对其进行单因素实验和响应面分析设计实验,得出该菌最优发酵培养基的配方:葡萄糖12.5g/L,酵母粉38.5g/L,MgSO42.5g/L,K2HPO42.5g/L,NaCl30g/L,pH7.63,接种菌龄OD600=1.300。利用新的培养基配方发酵的发酵液,对反应底物颗粒降解从6.5%提高到22.49%,约提高了3.5倍。

微生物絮凝剂产絮菌H8的鉴定

高絮凝活性的微生物絮凝剂产生菌,对高絮凝活性的微生物絮凝剂产生菌进行生理生化鉴定及16Sr DNA序列分析鉴定,初步鉴别出该菌株为假单胞菌,再结合16S r DNA序列相似性分析鉴定进一步确定该菌株的分类,鉴定结果为假单胞菌,与Pseudomonas mandelii亲缘关系最近。

唐山地区一种新发番茄病害的病原菌分离与鉴定

在唐山地区发现一种危害越来越严重的番茄病害,该病害与文献报道的溃疡病和青枯病类似。对其病原进行分离和鉴定,关系到对该病害的预测预报和防治。从该病害的典型病株上分离获得2种细菌TSK-1和TSK-2,分别接种健康植株,TSK-1能够产生典型症状,TSK-2没有产生致病性。通过形态学鉴定和16S rDNA测序鉴定表明,该病菌为密执安棒形杆菌密执安亚种(Clavibacter michiganensis subsp.michiganensis)。因此,唐山地区的种新发番茄病害为番茄溃疡病,而不是番茄青枯病。该研究结果将为控制该病害的发生起到决定性作用。

干扰素废水菌种的筛选与产酶特性

针对干扰素废水具有抑制性导致活性污泥驯化培养难的问题,利用稀释涂布、富集培养的方法从干扰素废水中筛选出5株高效菌株,分别为IFN1~IFN5。观察5株高效菌种的菌落形态,经16S rDNA测序鉴定其中2株菌株为假单胞菌,2株菌株为索氏菌,1株为不动杆菌。完成了5株高效菌种的生理生化实验,分析其酶代谢系统：IFN1可产生蛋白酶和色氨酸酶;IFN2可产生过氧化氢酶、色氨酸酶和蛋白酶;IFN3可产生过氧化氢酶、色氨酸酶、蛋白酶和淀粉水解酶;IFN4可产生过氧化氢酶、蛋白酶和淀粉水解酶;IFN5可产生过氧化氢酶、蛋白酶。本研究为后续针对降解干扰素废水诱导酶的提取奠定基础。

劲酒传统发酵过程中可培养功能细菌群落的动态变化初步研究

运用稀释培养方法,将小曲清香型劲酒传统发酵过程中入池、发酵第四天和出窖时酒醅中的可培养细菌分为九大功能群(蛋白质降解细菌群、淀粉降解细菌群、纤维素降解细菌群、木质素降解细菌群、脂肪降解细菌群、产乙酸细菌群、产乳酸细菌群、产丁酸细菌群和产己酸细菌群),探究小曲清香型劲酒传统发酵过程中各种可培养功能细菌群的组成以及动态变化.结果表明,数量较多的优势功能细菌群为产乙酸细菌群、产乳酸细菌群和产丁酸细菌群.对分离的各功能群的细菌进行核糖体RNA亚基编码基因(16SrDNA)序列分析,发现小曲清香型劲酒传统发酵过程中的可培养细菌主要为乳酸菌和芽孢杆菌两大类,分别属于3个属、10个种.

一株降解树脂细菌的鉴定及发酵条件的优化

将具有降解天然树脂能力的菌株Z75进行16 SrDNA分子生物学鉴定。通过对菌株Z75基因组的提取,利用细菌的通用引物1。通用引物2,设计特定的反应体系和条件,得到菌株Z75的基因序列在1500 bp左右。同时利用生物信息学方法,得出:菌株Z75与Enterobacter pulveris亲缘性最近,同源性达到99%以上,最终确定菌株Z75为Enterobacter pulveris。利用单因素选择实验以及响应面分析设计,得出最优培养基配方和发酵条件为:葡萄糖1.25%,酵母粉3.85%,MgSO_40.25%,K_2HPO_4 0.25%,NaCL 3 g,H_2O 1 L,pH 7.63,底物树脂颗粒大小0.20 g,接种量3.50%,接种菌龄OD600=1.300,200 r/min,36℃发酵38 h。再经过最后的培养基和发酵条件的优化后,降解率从6.50%提高到22.49%。

一株甲胺磷农药降解菌株的分离和鉴定

从长期受有机磷农药污染的土壤中分离到一株降解菌HS-04A32,该菌能以甲胺磷作为唯一的碳源和氮源生长,本实验对该菌降解甲胺磷进行了定性研究。通过16SrDNA扩增、测序,运用BLAST检索,初步鉴定为不动杆菌属(Acinetobacter)。