温度和17α-甲基睾酮、来曲唑对棘胸蛙雄性化研究

棘胸蛙雄性个体大于同龄雌性个体,全雄育种技术已成为棘胸蛙养殖业的迫切需要。以5400尾出膜7 d(开口摄食)的棘胸蛙蝌蚪为试验对象,在21℃(TNR)、24℃(TNR)、27℃(TNR)三个水温条件下,探讨来曲唑(LZ)、17α-甲基睾酮(MT)、17α-甲基睾酮与来曲唑组合(ML)对棘胸蛙雄性化的影响。以未添加激素为对照组(CK),实验组分别在饲料中添加100 mg/kg LZ、80 mg/kg MT、40 mg/kg MT与50 mg/kg LZ组合(ML),分别在三个温度下饲养,通过性腺形态学与组织学判定幼蛙性别。结果表明:水温21℃、24℃、27℃时,CK组雄性率分别为43.07%±0.06%、47.86%±0.04%、62.16%±0.02%,中间态性腺的出现率分别为0、0、10.00%;LZ组雄性率分别为48.52%±0.02%、56.41%±0.05%、77.77%±0.01%,中间态性腺的出现率分别为14.29%、20.00%、40.00%;MT组和ML组雄性率均为100%,中间态性腺的出现率分别为0、0、36.36%和33.33%、28.57%、37.04%;27℃下变态的幼蛙个体普遍小于21℃和24℃,但无显著差异。综上,水温21~24℃下,在棘胸蛙蝌蚪期饲料中全程添加80 mg/kg MT或40 mg/kg MT与50 mg/kg LZ(ML),更有利于棘胸蛙蝌蚪的生长发育和性腺向雄性分化。

17α-甲基睾酮对赤点石斑鱼性逆转的影响

采用腹部埋植方式,用17α-甲基睾酮(17-αMT)以10mg.kg-1剂量处理2龄雌性赤点石斑鱼(每4周埋植1次,共埋植2次),检查埋植前后性腺结构、血清中性类固醇激素水平以及脑和性腺芳香化酶活性的变化。结果显示:一次埋植17-αMT即可诱导赤点石斑鱼发生不同程度的性逆转,性腺成熟系数(GSI)明显下降,性腺中卵细胞退化,精原细胞增殖,出现大量精母细胞和精子细胞,性逆转雄鱼精巢的组织结构与正常雄鱼精巢相似,部分鱼转变为功能性雄鱼,经轻微的腹部挤压可排精,精子活力与正常雄鱼相似。赤点石斑鱼埋植17-αMT后前脑、中脑的芳香化酶活性明显提高而后脑的芳香化酶活性降低,但性腺芳香化酶活性无显著变化。埋植17α-MT后第4周血清中11-酮基睾酮(11-ketotestosterone,11-KT)浓度显著升高,而睾酮(testosterone,T)和雌二醇(estradiol-17,βE2)浓度变化不显著。这些结果表明,脑部芳香化酶活性的显著升高与性逆转密切相关,17-αMT主要通过提高血清中11-KT水平诱导赤点石斑鱼发生性逆转。

17α-甲基睾酮对食蚊鱼形态雄性化及目标基因表达的影响

为研究17α-甲基睾酮(17α-methyltestosteron,MT)对生长发育期间的雌性食蚊鱼形态雄性化及目标基因表达的影响,并探讨臀鳍雄激素受体基因(ARα)mRNA表达水平作为监测养殖水体雄激素类污染物的有效生物学标记的可行性,使用浸浴法以0.5、5、50和500 nmol/L 4个MT浓度为雌性食蚊鱼幼鱼染毒,设置对照组和平行组,暴露实验持续21 d,定量测定了幼鱼体长(BL)、体质量(BW)、身体健康指数(CF)以及臀鳍第3鳍条长度(FL)、分节数(FJ)和最宽处宽度(FW);ARαmRNA的表达水平。结果显示:与对照组相比,雌性幼鱼暴露21 d后BL、CF均没有显著变化,只有高浓度组(50和500 nmol/L)食蚊鱼的BW有显著下降(P<0.05);雌性幼鱼臀鳍第3鳍条FJ显著增加,FL随之延长,并且FW也出现显著增宽(P<0.05);雌性幼鱼暴露于MT 21 d之后,ARαmRNA表达水平呈现与剂量相关的上升(P<0.05)。MT的雄激素效应明显,导致雌鱼在生长发育过程中出现形态雄性化;ARα基因mRNA表达水平可作为监测养殖水体雄激素类污染物有效的生物标记。

17α-甲基睾酮对剑尾鱼的影响

目的研究17α-甲基睾酮暴露对产后雌性剑尾鱼(Xiphophorus helleri)性逆转组织形态学变化的影响,探讨剑尾鱼第二性征变化作为水环境风险评价(ERA)的有效生物学标记的可能性。方法使用浸浴法以10μg/L 17α-甲基睾酮为剑尾鱼染毒持续7周,对实验鱼的体形、腹鳍、臀鳍、尾鳍及性腺等组织器官的变化进行观察;同时对幼鱼在实验室养殖条件下的性别分化进行统计。结果 17α-甲基睾酮对产后雌鱼有明显的影响,受诱导后出现性逆转,逐渐发育形成雄性第二性征:体形变纤细;腹鳍第1鳍条变短、第2和第3鳍条延长,臀鳍第3、4、5鳍条末端钩状化且第3鳍条变粗壮,尾鳍上下缘出现增生;体内与臀鳍相连的骨骼合并生长;受诱导的雌鱼性腺呈现退化趋势并伴有卵细胞坏死现象,生殖能力受到负面影响。结论剑尾鱼臀鳍和尾鳍变化可作为水环境雄激素物质污染监测的有效生物学标记。

IBX选择性脱氢功能在制备△~1-17α-甲基睾酮中的应用

利用。o-碘酰苯甲酸(IBX)的选择性脱氢功能,在17α-甲基睾酮的1,2-位选择性脱氢,制备△1-17α-甲基睾酮,产率可达70%。

17α-甲基睾酮对棘胸蛙生长发育及性别分化的影响

为研究17α-甲基睾酮(MT)对棘胸蛙生长发育及性别分化的影响,采用乙醇喷雾法处理的含0,10,30,50 mg/kg MT饵料投喂棘胸蛙蝌蚪至60 d,测定体重、体长并记录生长发育情况,继续投喂并记录蝌蚪变态、畸形、死亡数,之后通过组织切片鉴定棘胸蛙性别和性腺发育状况.结果显示:MT对棘胸蛙蝌蚪的生长与正常发育有一定的抑制作用,并可通过影响性腺发育提高棘胸蛙雄性率,对棘胸蛙蝌蚪具有雄性化效应.以上研究对棘胸蛙的高效养殖及单性养殖具有重要意义.

17α-甲基睾酮对赤点石斑鱼性逆转的影响:卵细胞退化过程的观察

在非繁殖季节,将17α-甲基睾酮拌入饲料中,喂低龄和高龄组赤点石斑鱼,持续58d,可诱发其卵细胞的退化。本文较详细地观察了卵细胞的退化过程:即17αMT抑制卵细胞发育,而后出现核变形,在胞质中开始出现小的空泡,随着激素效应时间的延长,而出现核膨胀、扩张和核仁空泡化,胞质中空泡扩大、固缩而最后崩解。与此同时,17αMT 激发精子发生。这些观察有助于分析17αMT 引起性逆转的作用机制。

17α-甲基睾酮对麦穗鱼性腺组织学的影响

环境雄激素17α-甲基睾酮(MT)在养殖业和医药等行业的广泛使用,导致环境中存在一定浓度的MT。本文研究其对常见鲤科鱼类麦穗鱼性腺组织学及性腺指数的影响。结果表明,25 ng·L^(-1)、50 ng·L^(-1)和100 ng·L^(-1)的MT暴露麦穗鱼雌鱼7 d、14 d和21 d后,均对雌鱼的卵巢产生了不同程度的抑制作用,并且随着MT浓度的增加抑制作用逐渐加强。25 ng·L^(-1)、50 ng·L^(-1)和100 ng·L^(-1)的MT分别暴露麦穗鱼雄鱼7 d、14 d和21 d后,组织学结果显示50 ng·L^(-1)MT处理组中雄鱼性腺出现精卵巢(testis-ova)现象。50 ng·L^(-1)MT暴露7 d的时候对雌鱼的性腺指数造成显著影响,延长暴露时间至14 d的时候雄鱼性腺指数才显著升高。综上所述,中浓度的MT(50 ng·L^(-1))对麦穗鱼的性腺指数和性腺组织学影响最为显著。

17α-甲基睾酮对稀有鮈鲫肝脏脂质代谢的影响

环境内分泌干扰物对环境影响十分严重,绝大部分进入水环境,危害水生生物健康,进而影响人类健康。17α-甲基睾酮(17α-methyltestosterone,MT)是一种常见的环境雄激素,但在鱼体内的作用机制尚不明确。为了探究MT对鱼类肝脏脂质代谢的影响,采用不同浓度的MT(0、25、50和100 ng·L^(-1))处理864尾稀有鮈鲫(Gobiocypris rarus),分别在7、14和21 d取肝脏样品。用石蜡组织切片(H-E染色)研究MT对稀有鮈鲫肝脏组织的影响;用RT-qPCR检测4个内参基因的稳定性及5个脂质代谢相关基因(acaca、acacb、fasn、gpat1和cpt1α)的mRNA表达;用ELISA法测定肝脏中甘油三酯的含量。结果表明,MT会对稀有鮈鲫肝脏造成一定程度的影响,50 ng·L^(-1)MT处理14 d,肝脏组织损伤最明显。25 ng·L^(-1)和50 ng·L^(-1)MT处理14 d,相关基因的表达均显著变化(P<0.05)。mRNA表达与组织学结果均表明50 ng·L^(-1)MT对稀有鮈鲫肝脏影响最为显著。100 ng·L^(-1)MT处理21 d,acaca、cpt1α和gpat1基因表达量显著下降(P<0.05)。MT对雌鱼肝脏甘油三酯影响较雄鱼大。综上,MT通过影响肝脏脂质代谢相关基因mRNA的表达,干扰了稀有鮈鲫肝脏脂质代谢过程,进而对肝脏产生不同程度的损伤。由于MT在不同性别鱼体内的代谢途径不同,推测MT在稀有鮈鲫体内可能被芳香化为雌激素(ME),从而发挥部分雌激素作用。

17α-甲基睾酮对稀有鮈鲫体内激素水平的影响

环境内分泌干扰物(EDCs)对动物和人的健康有一定的危害作用,很大一部分环境内分泌干扰物最终都进入到了水环境中,对水生生物的生殖、内分泌等系统造成损伤。以稀有鮈鲫作为毒性试验材料,选择具有代表性的雄激素17α-甲基睾酮(MT)作为研究对象,采用酶联免疫法(ELISA)研究MT处理7 d对稀有鮈鲫体内雌二醇(E2)、睾酮(T)和11-酮基睾酮(11-KT)含量的影响。结果显示,经MT处理7 d后,雌鱼体内的E2、T和11-KT含量均极显著高于对照组(P<0.01),而雄鱼体内的E2、T和11-KT含量均极显著低于对照组(P<0.01)。

17α-甲基睾酮对斑马鱼肝脏vtg基因mRNA表达的影响

为评价17α-甲基睾酮(17α-methyltestosterone,MT)对斑马鱼肝脏vtg基因m RNA表达的影响,利用MT处理斑马鱼雌、雄鱼7 d,采用实时定量PCR(q RT-PCR)检测雌、雄鱼肝脏中vtg基因m RNA的表达量。结果显示,MT处理雌鱼7 d,25 ng/L处理组肝脏vtg基因的表达量显著降低(P<0.05),50 ng/L和100 ng/L的MT处理组肝脏vtg基因m RNA表达量极显著降低(P<0.01);MT处理雄鱼7 d,25 ng/L处理组肝脏vtg基因m RNA表达量与对照组相比差异不显著(P>0.05),50 ng/L的MT处理组肝脏vtg基因m RNA表达量显著升高(P<0.05),100 ng/L的MT处理组肝脏vtg基因m RNA表达量极显著升高(P<0.01)。斑马鱼肝脏vtg基因对MT比较敏感,可以作为监测环境中MT的生物标志物。

17α-甲基睾酮对麦穗鱼雌鱼肝脏组织学的影响

为评价外源性雄激素17α-甲基睾酮(MT)对水生动物肝脏组织学结构的影响,对麦穗鱼雌鱼进行半静水MT暴露试验,探讨MT对麦穗鱼雌鱼的体重、肝脏重量、肝体指数以及肝脏组织学的影响。结果显示,MT暴露前期和中期,麦穗鱼体重变化不明显,但暴露后期体重显著降低(P<0.05);暴露于不同浓度的MT时,麦穗鱼雌鱼的肝脏重量与对照组相比均呈现不同程度的下降趋势;肝体指数的变化情况与肝脏重量一致,在暴露的中期和后期,麦穗鱼的肝体指数显著低于对照组(P<0.05)。不同浓度的MT暴露后,麦穗鱼肝脏均受到不同程度的损伤,出现肝脏空泡化、肝细胞核固缩等现象,且空泡化和核固缩现象随着MT浓度的升高和暴露时间的延长而加剧。

17α-甲基睾酮对草鱼性腺发育及性类固醇激素水平的影响

利用养殖草鱼雌性个体所表现出的生长优势,探讨通过性逆转培育全雌草鱼品种的方法,具有较好的应用前景。实验采用拌料投喂诱导方式,在饲料中设置0、50、100和200 mg/kg 4个浓度梯度的17α-甲基睾酮(MT),连续投喂150 d,观测不同处理水平草鱼性腺结构和血液中类固醇激素雌二醇(E2)、睾酮(T)和11-酮基睾酮(11-KT)含量的变化规律,探讨草鱼性逆转过程中的特征变化。性腺的组织切片结果显示,从投喂30 d开始,各处理组卵巢中开始出现精原细胞。30～150 d,50 mg/kg MT处理组草鱼卵母细胞的生成及成熟受到抑制,发育迟缓;100 mg/kg MT处理组的生殖细胞受抑制程度要高于50 mg/kg MT处理组,实验结束时性腺已被大量精原细胞占据,有向精巢发育的趋势;200 mg/kg MT处理组精卵兼性状态较50 mg/kg MT处理组明显,但精原细胞的数量少于100 mg/kg MT处理组,对照组卵巢未出现精原细胞。血清类固醇激素测定结果显示,投喂不同剂量的MT,E_2浓度均显著升高,于45 d时达到最高值,之后趋于平稳下降,但仍显著高于对照组,未经处理的雄性草鱼,随着早期精巢的发育,其E_2水平也逐渐升高。随着MT投喂时间的延长,各处理组T浓度分别有不同程度的降低,45 d时各处理组降幅最大,且与MT浓度呈正相关,11-KT则有不同程度升高。研究表明,100 mg/kg MT为其性逆转较适宜的浓度,MT可使早期雌性草鱼血清E_2升高,发挥雄激素效应,从而促进卵巢卵细胞退化,精原细胞增殖。

17α-甲基睾酮对日本沼虾生精细胞体外生长分化的影响

取发育早期日本沼虾(Macrobrachium nipponense)的精巢,剪碎,分散成细胞悬液,用离体细胞培养法进行体外培养,培养基中不含17α-甲基睾酮(17α-MT)的为对照组,设定3种不同质量浓度水平组,分别为300ng/mL、1500ng/mL和3000ng/mL,测定生精细胞的体外存活率并观察生精细胞体外培养的生长行为和分化情况。结果表明,3种浓度梯度下生精细胞的存活率没有显著差异,17α-MT的质量浓度为1500ng/mL组分化为精子细胞四分体的数量和长出棘突的精细胞数量均比对照组和其他实验组多,差异极显著(P<0.01)。初步确定生精细胞体外培养过程中添加不同质量浓度的17α-MT不影响细胞的存活率,但影响生精细胞的体外分化,17α-MT的适宜质量浓度为1500ng/mL。

17α-甲基睾酮对稀有鮈鲫精巢DNA甲基转移酶基因表达的影响

[目的]以稀有鮈鲫雄鱼为研究对象,探讨17α-甲基睾酮(17α-methyltestosterone,MT)对稀有鮈鲫精巢甲基转移酶(DNMT)基因相对表达量的影响。[方法]采用不同浓度MT(25、50和100 ng/L)处理稀有鮈鲫雄鱼7、14和21 d,处理结束时,每组随机解剖10条鱼,取精巢组织,Trizol一步法提取总RNA,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测DNA甲基转移酶基因(dnmts)相对表达量。[结果]MT处理稀有鮈鲫雄鱼7 d,25 ng/L MT处理组(P<0.05)、50 ng/L MT处理组(P<0.01)和100 ng/L MT处理组(P<0.05)精巢dnmt3基因相对表达量显著(或极显著)降低;25 ng/L MT处理组和50 ng/L MT处理组精巢dnmt5基因相对表达量显著(P<0.05)降低;50 ng/L MT处理组精巢dnmt7基因相对表达量显著(P<0.05)降低。MT处理稀有鮈鲫雄鱼14 d,100 ng/L的MT处理组dnmt3、dnmt5、dnmt6、dnmt7基因相对表达量显著(P<0.05)升高;50 ng/L的MT处理组dnmt1基因相对表达量极显著(P<0.01)升高。MT处理稀有鮈鲫雄鱼21 d,50 ng/L MT处理组和100 ng/L MT处理组dnmt1基因相对表达量显著(P<0.05)升高;100 ng/L MT处理组dnmt8基因相对表达量极显著(P<0.01)升高。[结论]MT可以干扰稀有鮈鲫精巢DNA甲基转移酶基因dmmts的mRNA表达。MT对DNMTs酶活性的影响以及是否可以通过改变DNA甲基化水平对稀有鮈鲫精子的发生产生影响有待研究。

17α-甲基睾酮在猪毛发中蓄积规律的研究

为建立猪毛发中17α-甲基睾酮残留的液相色谱-串联质谱检测方法,研究多剂量内服、单剂量肌肉注射两种给药方式下,17α-甲基睾酮在猪毛发的蓄积规律及差异,选用体重为（20.0±3.5）kg的杜长大三元杂交猪6头,随机分为2组,一组按体重4 mg/kg内服17α-甲基睾酮、连续给药30 d,另一组按体重4mg/kg单剂量肌肉注射17α-甲基睾酮,毛发样品均采集到给药后第61天。样品处理后经液相色谱-串联质谱仪分析检测。以时间为横坐标、质量分数为纵坐标,分析17α-甲基睾酮在猪毛发中的残留规律。结果显示,17α-甲基睾酮在0.75-1 000 ng/g范围内线性关系良好（r2=0.999 1）;检测限为0.30 ng/g,定量限为0.75 ng/g。多剂量内服给药组,第一次给药后第10天,毛发中药物质量分数达到峰值,而后出现下降,到约16 d后趋于稳定,停药后逐渐下降;单剂量肌肉注射给药组,药物质量分数在给药后第10天达到峰值,而后迅速下降;两种给药途径,在给药后第61天均仍能检测到17α-甲基睾酮。结果表明,建立的检测方法灵敏度较高;多剂量内服给药组在给药30 d及停药后31 d内、单剂量肌肉注射给药组在给药后61 d内均可在猪毛发中检测到17α-甲基睾酮,但不同给药方式之间蓄积差异较大。

17α─甲基睾酮对珍珠玛丽鱼及红剑尾鱼体色影响的初步研究

将5月龄的珍珠玛丽鱼（MolliensiaVeliferia）和3月龄的红剑尾鱼（Xiphophoroushelleri）各100尾，平均分成二级，设对照组和处理组，在处理组的基础饵料中添加10μg/g的甲基率酮（Meth－yltestosterone），在50多天的养殖实验期间，观察各组试验鱼的性逆转现象，并对试验鱼的体包及肌肉中所沉积的［β─胡萝卜素进行比较研究。结果表明：饵料中添加10μ/g的甲基睾酮不能使该规格的珍珠玛丽鱼发生性逆转，体色无明显的变化，但能使红剑尾鱼全雄化，且红剑尾鱼的群体色调加深。

类胡萝卜素甲基睾酮对观赏鱼体色的影响

在５月龄珍珠玛丽鱼（Ｍｏｌｉｅｎｅｓｉａｖｅｌｉｆｅｒａ）和３月龄红剑尾鱼（Ｘｉｐｈｏｐｈｏｒｕｓｈｅｌｅｒｉ）的基础饲料中分别添加０．５％的类胡萝卜素或１７α－甲基睾酮１０μｇ／ｇ，在近５０天的养殖试验表明，饲料中添加０．５％的类胡萝卜素能使鱼的体表增色；添加１０μｇ／ｇ的１７α－ＭＴ不能使５月龄的珍珠玛丽鱼发生性逆转，体色亦无明显变化，但能使红剑尾鱼全部雄化和体色调加深。

甲基睾酮对中华鳑鲏体色的影响

为探索甲基睾酮对中华鳑鲏体色的影响,分别将50日龄和80日龄中华鳑鲏各分6组,每组重复,随机分别养在24个相同规格、容积为0.5 m3的循环水养殖缸内,每缸放养80尾。对照组(Control)投喂不添加甲基睾酮(17α-MT)的基础饲料,处理组(TG1、TG2、TG3、TG4、TG5)分别投喂17α-MT含量为10、20、30、40、50 mg/kg的试验饲料。试验时间56 d,期间对试验鱼的体色及肌肉中所沉积的类胡萝卜素进行比较研究。结果表明,17α-MT添加量40、50 mg/kg的饲料组对50日龄中华鳑鲏色素沉积明显(P<0.05),80日龄的中华鳑鲏各处理组与对照组差异不显著(P<0.05)。17α-MT添加量在30 mg/kg以上,50日龄的中华鳑鲏体色明显开始起效,效应时间需28 d,80日龄中华鳑鲏各处理组与对照组差异不显著。

性类固醇激素对胡子鲇性分化的影响

研究采用组织学和荧光实时定量PCR方法,检测17α-甲基睾酮(17α-MT)和17β-雌二醇(17β-E2)对胡子鲇(Clarias fuscus)性腺组织学、性别比率以及性分化前后脑型芳香化酶基因(Cyp19a1b)和翼状螺旋/叉头转录因子2(Foxl2)基因表达的影响。结果表明:在出膜后2—30日龄,17α-MT(50、100和200μg/L)浸浴、17β-E2(100、200和300μg/g)投喂处理对成活率无显著影响,但中、高剂量(100和200μg/L)17α-MT显著抑制卵巢发育,促进精巢发育,卵巢腔出现时间分别推迟4d和6d,初级卵母细胞出现时间分别推迟8d和9d,而初级精母细胞出现时间则分别提前3d和5d,且雄性率分别达70%和76%,显著高于50μg/L组和对照组(P<0.05)。相反,中、高剂量17β-E2(200和300μg/g)处理使卵巢腔出现时间分别提前2d和3d,初级卵母细胞出现时间分别提前1d和3d,初级精母细胞出现时间分别推迟3d和7d,而雌性率分别达74%和78%,显著高于100μg/g组和对照组(P<0.05)。此外,在性腺分化期,17α-MT促进Cyp19a1b但抑制Foxl2的表达,而17β-E2促进Cyp19a1b和Foxl2的表达。结果显示Cyp19a1b不是引起胡子鲇性分化的直接因素,但可能通过"下丘脑垂体性腺轴"对胡子鲇性分化过程产生间接影响;而Foxl2直接参与胡子鲇的性分化,即17α-MT和17β-E2分别通过抑制和促进Foxl2的表达来影响雌激素的生物合成,从而调控胡子鲇性分化的方向。