17β-羟类固醇脱氢酶3型缺乏症1例并文献复习

目的探讨17β-羟类固醇脱氢酶3型缺乏症的临床特征与诊疗方法。方法通过分析2021年6月在山西医科大学第一医院就诊的1例17β-羟类固醇脱氢酶3型缺乏症患者的诊疗过程,并复习相关文献,探讨其发病机制及临床应对方法。结果该患者社会性别为女性,12岁逐渐发育出现男性特征,影像学显示双侧腹股沟隐睾且无子宫及卵巢。激素测定显示睾酮较低而雄烯二酮较高,且两者比值<0.8。染色体核型为46,XY。基因检测证实HSD17B3基因存在2号外显子c.179T>C纯合突变。结论17β-羟类固醇脱氢酶3型缺乏症非常罕见且误诊率较高,当怀疑该症时,首先应行内分泌评估(人绒膜促性腺激素激发实验尤为重要)与相应影像学检查,基因检测可进一步帮助明确诊断。

17β-羟类固醇脱氢酶3型缺陷症概况与研究进展

性发育障碍(disorders sexdevelopment,DSD)是一类染色体性别、性腺性别、外生殖器性别不一致和性发育异常的先天性疾病。正常的性发育过程需要一系列基因、相关酶、因子的相互作用[1]。17β-羟类固醇脱氢酶3型(17β-hydroxysteroid dehydrogenase type 3,17β-HSD3)缺陷症是罕见的常染色体隐性遗传病,因17β-HSD3生成障碍或活性减低,致使睾酮合成障碍而致假两性畸形。本文就17β-HSD3缺陷症的临床特点及诊疗过程进行综述,旨在提高对该病的认识,及时对患者采取最佳治疗方案。

男性假两性畸形——17β-羟类固醇脱氢酶3型缺陷症研究

目的本研究通过对一例17β-羟类固醇脱氢酶（17β-HSD）3型缺陷症的临床诊断及基因检测，探讨其病理生理及发病机制。方法总结分析该家系临床资料，通过激素测定和hCG兴奋试验确认其临床诊断；收集该家系先证者及其父母的外周血，通过PCR扩增产物直接测序和亚克隆方法检测其基因突变，确认其基因诊断。结果该患者社会性别为女性，以“原发性闭经”就诊；染色体核型为46，XY，双侧腹股沟隐睾，呈男性假两性畸形。激素测定显示睾酮合成前体物质如硫酸脱氢表雄酮、雄烯二酮明显升高，而睾酮却低于正常。hCG兴奋试验提示雄烯二酮转化为睾酮过程受阻，即17β-HSD3活性缺陷。基因诊断证实HSD1783基因第一外显子存在4个碱基缺失（172—175del）。结论青春期出现男性化表现伴乳腺发育时应考虑该症可能，hCG试验可提供临床依据，基因诊断可进一步确诊。

一个17β-羟类固醇脱氢酶3型缺乏症家系的HSD17B3基因变异分析

目的对1个家系中两同胞17β-羟类固醇脱氢酶3型缺乏症患儿的HSD17B3基因进行变异分析,明确其可能的致病原因,为临床诊断提供依据。方法提取2例患儿(先证者和其妹妹)及父母外周血DNA,对性发育相关基因进行panel检测,对可疑变异进行Sanger测序验证及生物信息学分析。结果测序结果显示2例患儿(先证者和妹妹)的HSD17B3基因均存在c.839T>C(p.Leu280Pro)和c.239G>T(p.Arg80Leu)复合杂合变异,两个变异位点均为未报道过的错义变异,Sanger测序验证结果显示其父亲携带c.239G>T杂合变异,母亲携带c.839T>C杂合变异,因此患儿的变异分别来自父母。经PolyPhen2、MutationTaster等在线软件预测均显示c.239G>T和c.839T>C变异均为有害变异。根据美国医学遗传学与基因组学学会遗传变异标准与指南,c.839T>C(p.Leu280Pro)和c.239G>T(p.Arg80Leu)变异均判定为可能致病(PM2+PP1+PP2+PP3+PP4,PM2+PM5+PP1+PP2+PP3+PP4)。结论HSD17B3基因c.239G>T和c.839T>C复合杂合变异可能为该家系患儿的致病原因,17β-HSD3缺乏症临床表现及实验室检查缺乏特异性,基因检测结果可以为临床诊断提供依据。

一例17β-羟类固醇脱氢酶3型缺陷症病例家系的基因研究

分析1例17β-羟类固醇脱氢酶3型缺陷症病例家系的HSD17B3基因序列变化。先证者社会性别女性,15岁,因“原发性闭经”就诊,双侧腹股沟区可扪及睾丸,激素检查高雄烯二酮、低睾酮,妇科超声未探及子宫卵巢,染色体核型46,XY。其妹8岁,因“家族史”就诊,查染色体核型46,XY。 HSD17B3基因测序显示姐妹二人为c.852G〉A（p. W284X）纯合突变,父母为相应的杂合突变。

17β-羟类固醇脱氢酶3型缺陷症一例

分析1例17β-羟类固醇脱氢酶3型缺陷症患者的临床资料及HSD17B3基因序列变化。患儿2岁11个月,抚养性别女性,因"双侧腹股沟包块"就诊,幼女外阴,阴蒂肥大,睾酮与雄烯二酮比值经绒毛膜促性腺激素(hCG)兴奋后逐渐降低,染色体核型46 XY,彩色超声检查未探及子宫、卵巢。父母及弟弟表型正常。HSD17B3基因测序显示患者携带2号外显子c.201A>G(p.Glu67Asp)及9号外显子c.625T>C(p.Ser209Pro)的复合杂合突变,父亲携带9号外显子c.625T>C杂合突变,母亲携带2号外显子c.201A>G杂合突变,弟弟无突变。

17β-羟类固醇脱氢酶3型缺乏症2例并文献复习

目的 分析17β-羟类固醇脱氢酶3型（17β-HSD3）缺乏症患儿的临床特点和基因检测结果.方法 对2014年2月至2015年9月在首都医科大学附属北京儿童医院内分泌遗传代谢科门诊就诊的2例17β-HSD3缺乏症患儿的临床表现、激素水平检测结果及基因突变检测结果进行分析总结,并对相关文献进行复习.结果 2例学龄前患儿均以双侧腹股沟肿物就诊,表现为外生殖器模糊,B超显示为双侧的睾丸组织,未见子宫及卵巢;染色体核型为46,XY.例1基础睾酮（T） ＜50 ng/L,促皮质素（ACTH）、皮质醇（Cor）及电解质正常;人绒毛膜促性腺激素（HCG）激发试验后T为2 000 ng/L.例2基础T＜200 ng/L,ACTH、Cor、电解质正常;HCG激发试验后T为743 ng/L,雄烯二酮（△4）1.27 μg/L,HCG激发试验后T/△4为0.58.例1最初诊断为雄激素不敏感综合征.2例患儿HSD17B3基因均为复合杂合突变;例1为c.242C＞T,Thr81 Met和c.172G＞T,Asp58Tyr,这2个位点致病性尚未见文献报道;例2为c.645A＞C,Glu215 Asp和c.239G＞A,Arg80Gln,这2个位点均有致病性.结论 17β-HSD3缺乏症学龄前患儿无特异临床表现,鉴别诊断困难,HCG激发试验后T/△4 ＜0.8可以帮助诊断,基因检测可迸一步确诊.

17β-羟基类固醇脱氢酶3基因插入/缺失与公猪睾丸表型性状关联研究

17β-羟基类固醇脱氢酶3(Hsd17b3)基因主要表达于哺乳动物睾丸间质细胞(LCs)中,是合成睾酮和维持雄性生殖功能的关键基因之一。为进一步推进猪产业的分子标记辅助育种,该研究探究Hsd17b3基因遗传变异位点与公猪睾丸表型性状的相关性,以期丰富该基因多态位点与公猪繁殖的遗传关联。利用PCR技术在大白猪(n=257)和长白猪(n=62)中检测到Hsd17b3基因第2内含子和第4内含子的两个indel位点,通过琼脂糖凝胶电泳及测序技术验证了该基因L3-10-bp和L11-11-bp的indel突变。关联分析结果表明:L3-10-bp的indel位点与40日龄长白猪的睾丸长轴长、睾丸短轴长和睾丸重均呈显著相关(P<0.01)。该结果与雄性睾丸的早期发育阶段和初始快速发育阶段睾丸发育过程相吻合,提示该indel位点可作为猪标记辅助选择的潜在DNA标记,为Hsd17b3基因在猪遗传育种中的研究和应用提供指导。

分枝杆菌HGMS2中类固醇C20-羟基脱氢酶的鉴定

分枝杆菌常被用作甾体药物中间体生产菌种,然而当前人们对其具体的甾醇降解机制仍然不是很清楚。为了获得C20-羟基甾药中间体,文章直接以RS为底物进行了转化,并通过对转化产物进行TLC、HPLC、LS-MS和核磁分析,初步确定分枝杆菌中存在类固醇C20-羟基脱氢酶(1DHC)参与的代谢途径。同时,基于生物信息学和结构生物学,通过序列和结构比对分析,最终从分枝杆菌中鉴定出了一个与类固醇C20-羟基脱氢酶同源性很高的基因。将该基因在大肠杆菌中异源表达,并对其功能活性进行分析,证明该基因所编码的酶和类固醇C20-羟基脱氢酶具有相同的功能活性。文章首次从分枝杆菌中鉴定出一种类固醇C20-羟基脱氢酶,使研究者对分枝杆菌甾醇代谢机制有了更深入的理解,同时也为新型甾药中间体的制备以及分枝杆菌的改造奠定了理论基础。

促性腺激素释放激素类似物对大鼠睾丸间质细胞膜联蛋白5和3β-羟类固醇脱氢酶mRNA表达的影响

目的:观察促性腺激素释放激素(GnRH)类似物对大鼠睾丸间质细胞annexin 5和3β-HSD mRNA表达的影响。方法:原代培养大鼠睾丸间质细胞48 h后,分别用不同终浓度的GnRH激动剂(GnRH-agonist,GnRHa)(10-5mol/L、10-6mol/L、10-7mol/L)和GnRH拮抗剂(GnRH-antagonists,GnRHant)(10-6mol/L、10-7mol/L、10-8mol/L)处理细胞,提取细胞总RNA,反转录,设计特异性引物和Tagman探针,荧光定量PCR检测膜联蛋白5(annexin 5)和3β-羟类固醇脱氢酶(3β-HSD)mRNA表达的改变。结果:荧光定量PCR结果显示,与未加GnRH类似物的对照组相比,当GnRHa的终浓度为10-5mol/L、10-6mol/L时,实验组大鼠睾丸间质细胞annexin 5 mRNA分别升高了38.89%和35.29%,均具有统计学意义(P<0.05);当GnRHa的浓度为10-5mol/L时,3β-HSD mRNA也显著升高了46.43%(P<0.01)。同样,与对照组相比,当GnRHant的浓度为10-6mol/L时,实验组大鼠睾丸间质细胞annexin 5 mRNA下降了45.45%(p<0.05),当GnRHant的浓度为10-6mol/L,10-7mol/L时,实验组大鼠睾丸间质细胞3β-HSD mRNA也分别显著地降低了63.64%(P<0.01)和50%(P<0.05),其余各组与对照组相比,差异无统计学意义。结论:GnRH类似物能够调控大鼠睾丸间质细胞annexin5和3β-HSD mRNA表达,GnRH类似物可能与睾丸间质细胞上GnRH受体结合后,通过特定的生理机制,进而影响annexin5和3β-HSDmRNA表达,为揭示GnRH类似物调控间质细胞分泌睾酮的作用机制提供了一定的依据,其内在的机制还有待进一步研究。

17β-羟类固醇脱氢酶2在子宫内膜息肉中的表达及意义

目的：分析子宫内膜息肉（EP）组织中17β-羟类固醇脱氢酶2（1713HSD2）的表达及意义。方法：收集郑州大学第一附属医院生殖医学中心及妇科就诊的育龄期妇女息肉组织（40例，A组）以及正常内膜组织（40例，B组），免疫组化法测定17βHSD2的表达；同时收集研究对象年龄、体质量指数信息以及月经第2—4天血清，采用电化学发光免疫分析法测定5项性激素水平。结果：（1）两组患者的年龄、体质量指数以及血清5项性激素水平无显著差异（P〉0．05）。（2）1713HSD2在各期EP组织中的表达均明显下降（P〈0．05）。结论：子宫内膜局部17βHSD2表达减少可能是EP发生的重要因素。

睾酮假单胞菌3α-羟类固醇脱氢酶基因的质粒载体构建及表达

从土壤中分离睾酮假单胞菌 ,提取其基因组DNA ,PCR扩增 3α 羟类固醇脱氢酶 (3α hsd)基因 ,将扩增产物用NdeⅠ /BamHⅠ消化 ,切下目的基因片段克隆到质粒 pET 15b中构建重组pET 15b .将重组 pET 15b转化入E .coliDH5α中 ,经酶谱分析和测序 ,鉴定出正确的重组质粒 pET 15b .将重组pET 15b转化入宿主菌E .coliBL2 1(DE3) pLysS中 ,用硫代半乳糖苷 (IPTG)进行诱导表达 .提取细菌总蛋白质进行SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)分析并测定酶活性 .粗提物中酶活性高达 2 4 5× 10 5U/L .利用重组蛋白中的 6个组氨酸(His)组成的“标签”进行亲和层析 ,经一步金属螯合亲和层析纯化后 ,重组蛋白在SDS PAGE上呈现出均一的单一条带 ,回收率达 6 8% .活性和纯度均较高的目的蛋白 3α HSD的获得 。

3α-羟类固醇脱氢酶的表达、纯化和酶学性质研究

从土壤中分离睾酮丛毛单胞菌 ,提取其基因组DNA ,PCR扩增 3α 羟类固醇脱氢酶 (3α HSD)基因。以质粒pET 1 5b为载体 ,构建 3α HSD的原核表达系统。经IPTG诱导后 ,得到了具有酶活性的融合蛋白 ,细菌总蛋白的表达量为 0 73g L ,其中融合酶蛋白占 1 6 4 % ,活性达 1 38× 1 0 5U L。利用融合蛋白N末端的His tag,经金属螯合亲和层析纯化后 ,得到了纯度较高的融合酶蛋白 ,酶蛋白的得率为 6 8% ,比活性为 1 94 7U mg。凝血酶切除His tag后 ,经质谱鉴定 ,重组蛋白的分子量为 2 6 5kD ,与理论推测值基本相同。 2 5℃以雄酮为底物 ,以NAD+ 和thio NAD+ 为辅因子时 ,融合蛋白参与酶促反应的最适pH分别为 1 0 5和 9 4。 37℃条件下酶促反应较快 ,2 5℃时的反应速度只有 37℃时的 5 2 % ,Q1 0 ( 2 5℃～ 35℃ ) 为 1 7。 2 5℃、pH1 0 5、以雄酮和各级胆汁酸为底物、NAD+ 为辅因子时 ,融合酶蛋白的动力学常数Km位于 4 2～ 5 1 1 μmol L范围内。融合酶蛋白发挥催化作用并不需要金属离子的参与 ,而Fe3+ 、Fe2 + 、Zn2 + 则抑制酶活性 ,反应体系中加入EDTA也并不影响酶的活性。活性和纯度均较高的融合蛋白 3α HSD的获得及其生物学性质的研究 。

葡萄糖上调胰岛β细胞系NIT-1 11β-羟类固醇脱氢酶1型的表达

目的探讨葡萄糖对胰岛β细胞系NIT-1上11β-羟类固醇脱氢酶1型(11β-HSD1)的表达及其功能的影响。方法用细胞免疫化学染色、RT-PCR和Western blot法检测NIT-1细胞11β-HSD1mRNA及蛋白表达。分别用含10、15、20和25 mmol/L葡萄糖的Ham s F12培养液培养NIT-1细胞72 h,检测11β-HSD1mRNA和蛋白表达水平,用葡萄糖刺激释放(GSIS)实验评价胰岛β细胞功能。结果(1)胰岛NIT-1细胞胞质里有棕黄色阳性染色颗粒,并有11β-HSD1mRNA和蛋白表达,(2)15、20和25 mmol/L葡萄糖组11β-HSD1表达增加(P<0.05,P<0.01),葡萄糖刺激胰岛素分泌减少(P<0.05,P<0.01)。结论11β-HSD1在胰岛NIT-1细胞上有表达,糖皮质激素可能参与胰岛β细胞胰岛素分泌功能。

11β-羟类固醇脱氢酶1型基因沉默对胰岛β细胞系NIT-1葡萄糖刺激胰岛素分泌的影响

目的观察RNA干扰阻断胰岛β细胞系NIT-1中11β-羟类固醇脱氢酶1型(11β-HSD1)表达对细胞葡萄糖刺激胰岛素分泌(GSIS)的影响。方法pSuper质粒为载体,构建针对11β-HSD1基因的质粒oligo886、oligo866和乱序对照质粒oligoScr886,转染NIT-1细胞,RT-PCR和蛋白印迹法检测11β-HSD1mRNA和蛋白表达。oligo886重组质粒转染25 mmol/L葡萄糖培养基中的NIT-1细胞,测GSIS。结果转染oligo886和oligo866质粒的NIT-1细胞11β-HSD1mRNA分别下降78.1%±2.9%和51.7%±2.7%,11β-HSD1蛋白的水平分别下降82.2%±2.1%和56.5%±2.0%。oligo866转染25 mmol/L葡萄糖培养基中的NIT-1细胞后,GSIS较对照组明显升高(P<0.01)。结论11β-HSD1基因沉默能改善NIT-1细胞的葡萄糖刺激胰岛素分泌能力,提示胰岛β细胞NIT-1通过11β-HSD1调节糖皮质代谢,参与葡萄糖刺激胰岛素分泌。

睾丸酮丛毛单胞菌的分离和鉴定及3α-羟类固醇脱氢酶在大肠杆菌中的克隆表达

目的:从自然界中分离鉴定产 3α 羟类固醇脱氢酶(3α hydroxysteroiddehydrogenase, 3α HSD)的睾丸酮丛毛单胞菌,并在大肠杆菌(E.coli.)中克隆表达 3α HSD。方法:将池塘泥浆样品接种到以雄酮为唯一碳源的培养基中,对分离到的菌株根据形态学和生理生化特征进行初步鉴定。为进一步鉴定该菌株,根据睾丸酮丛毛单胞菌中的 3α HSD的基因设计引物,PCR扩增细菌基因组DNA,将扩增片段插入到载体pET15b中,构建重组质粒pET15b,并在E.coli. BL21 (DE3 )pLysS中进行诱导表达,对表达得到的蛋白进行鉴定并测定其酶活力。结果:一系列生化反应和培养特征证实,该菌与睾丸酮丛毛单胞菌的符合率为 85%,最适生长pH值为 7. 0,最佳生长温度为 30℃。在E.coli. BL21 (DE3 )pLysS中经诱导表达得到了相对分子质量约为 29×103具有酶活性的融合蛋白,可催化雄酮(3α 羟类固醇)脱氢。结论:从池塘泥浆中分离到一株产 3α HSD的睾丸酮丛毛单胞菌,并在E.coli.中表达得到了具有酶活性的融合 3α HSD。这为利用金属螯和亲和层析纯化融合 3α HSD,并进一步建立以其为工具酶的血清总胆汁酸酶循环测定方法奠定了基础。

11β-羟类固醇脱氢酶1型在小鼠胰腺组织和胰岛β细胞系NIT-1中的表达

目的探讨11β-羟类固醇脱氢酶1型(11β-HSD1)在C57BL/6J小鼠胰腺组织和胰岛β细胞系NIT-1中的表达及其生物学意义。方法以11β-HSD1在肝脏组织中的表达为阳性参照,RT-PCR法和Western blot法检测小鼠胰腺组织中11β-HSD1 mRNA和蛋白表达。细胞免疫化学法检测NIT-1细胞中11β-HSD1的分布与表达,RT-PCR法和Wester nblot法检测NIT-1细胞中11β-HSD1 mRNA和蛋白表达。结果①在正常C57BL/6J小鼠胰腺组织中有11β-HSD1 mRNA和蛋白表达,其表达量均低于肝脏组织(均P<0.01)。②细胞免疫化学染色示NIT-1细胞胞质见棕黄色染色阳性颗粒,同时NIT-1细胞中有11β-HSD1 mRNA和蛋白表达。结论小鼠胰腺组织和胰岛β细胞系NIT-1中有11β-HSD1基因表达,为研究糖皮质激素代谢对胰岛细胞功能的影响以及其它潜在的生理功能,提供了一条研究途径。

喉癌组织中5α-还原酶和17β-羟类固醇脱氢酶的活性

目的：了解性激素对喉癌的影响。方法：测定２０例喉癌和非喉癌组织的５α－还原酶（５αＲ）和１７β－羟类固醇脱氢酶（１７β－（ＯＨ）ＳＤＨ）的活性，此两酶分别涉及睾酮转化为二氢睾酮和雌二醇转化为雌酮。结果：５αＲ的活性在两种组织中没有差别。相反，１７β－（ＯＨ）ＳＤＨ活性在喉癌组织中明显降低，仅为非喉癌组织的５０％。

雌激素受体和17β-羟类固醇脱氢酶1在子宫内膜息肉中的表达及其意义

目的研究雌激素受体(estrogen receptor,ER)和17β-羟类固醇脱氢酶1(17β-HSD1)在子宫内膜息肉(endometrial polyps,EPs)中的表达情况,进一步从分子水平阐明EPs的发病机制。方法选择EPs患者47例,其中,息肉组织作为病例组,同一患者宫腔内远离息肉组织的正常内膜作为对照1组,同时选择50例行宫腔镜检查的妇女的正常子宫内膜组织作为对照2组。采用免疫组织化学法检测ER和17β-HSD1在各组的表达情况并进行比较。结果 ER在EPs中表达的阳性率是80.9%,17β-HSD1在EPs中表达的阳性率是76.6%,二者在EPs中表达均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。ER和17β-HSD1在EPs中的表达呈正相关(r=0.619,P<0.01)。结论 ER和17β-HSD1在EPs中的过度表达可能是EPs发生、发展的原因。

17β-羟类固醇脱氢酶与子宫内膜异位症的关系

目的探讨17β-羟类固醇脱氢酶2(17βHSD2)在子宫内膜异位症(内异症)在位与异位内膜的表达与发病的关系。方法采集因内异症和宫颈上皮内瘤样病变行子宫切除的分泌晚期子宫内膜,分别为内异症组和对照组研究标本。RT-PCR检测两组在位子宫内膜与卵巢巧克力囊肿17βHSD2 mRNA表达。结果内异症组28例,对照组15例在位内膜17βHSD2 mRNA呈阳性表达,两组在位内膜17βHSD2 mRNA表达情况间差异无显著性意义(P>0.05);28例卵巢巧克力囊肿17βHSD2 mRNA全部呈阴性表达,与配对在位内膜比较差异有显著性意义(P<0.05)。结论内异症患者异位内膜缺乏17βHSD2与内异症发病有关。