骨形态生成蛋白-4与17β-雌二醇诱导MBA-1细胞分化的研究

目的探讨BMP-4与17β-雌二醇诱导MBA-1细胞分化的作用。方法用骨形态生成蛋白-4(BMP-4)诱导MBA-1细胞15～22d后进行HE染色观察细胞形态,用1型胶原染色、矿化结节染色鉴定成骨细胞功能;用BMP-4及17β-雌二醇干预MBA-1细胞后,用RT-PCR检测骨钙素的变化。结果①MBA-1细胞可向成骨细胞或脂肪细胞分化;②在无BMP-4或17β-雌二醇干预的情况下,MBA-1细胞在自身分化成熟过程中伴有骨钙素的表达增加;③经BMP-4与17β-雌二醇干预后,MBA-1细胞骨钙素的表达明显增加。结论MBA-1细胞可能具有多系分化潜能,BMP-4与17β-雌二醇可上调其骨钙素表达,诱导MBA-1细胞向成骨细胞方向分化。

17β-雌二醇对大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的诱导调控

背景:研究发现骨髓间充质干细胞上存在雌激素受体,雌激素通过调节骨髓间充质干细胞的增殖、分化特性发挥促成骨作用。目的:观察17β-雌二醇对骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的诱导作用,并探讨其作用机制。方法:在基础成骨诱导培养基培养的第3代大鼠骨髓间充质干细胞中分别加入0(对照组),0.001,0.01,0.1nmol/L17β-雌二醇干预。Elisa法检测培养的骨髓间充质干细胞分泌Ⅰ型胶原的水平,RT-PCR及Western blotting法分别检测Runx2因子mRNA及蛋白水平。结果与结论:与对照组比较,在给予0.001,0.01,0.1nmol/L17β-雌二醇干预后第5天,骨髓间充质干细胞Ⅰ型胶原表达显著升高(P<0.05),第7天仍旧呈高表达(P<0.05)。同时,在17β-雌二醇干预的第5,7天,Runx2因子mRNA及蛋白表达水平随17β-雌二醇浓度的增加而升高(P<0.05),并呈剂量依赖性。表明17β-雌二醇可诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞转化,其可能通过上调Runx2因子表达发挥促成骨作用。

17β-雌二醇通过激活核心结合蛋白因子2诱导牙髓干细胞成牙本质分化

目的:探讨17β-雌二醇(E2)调节牙髓干细胞(DPSCs)成牙本质分化的分子机制。方法:对体外培养的人DPSCs施加1μmol/L E2刺激,通过qRT-PCR、Western blot和免疫荧光技术检测成牙本质分化标志性基因及下游相关因子表达变化,阐明E2调节DPSCs成牙本质分化的机制。结果:E2上调DPSCs中DSPP和DMP1mRNA表达和ALP活性,增强DSPP在细胞中的染色强度,促进DPSCs的成牙本质分化。在E2诱导的DPSCs成牙本质分化过程中,E2激活Runx2活性,RNA干扰Runx2明显减弱DSPP和DMP1 mRNA表达以及DSPP染色强度。结论:雌激素E2部分通过激活Runx2活性促进DPSCs的成牙本质分化。

17β-雌二醇及补骨脂素对骨髓间充质细胞向成骨细胞分化的诱导作用

目的:观察17β-雌二醇对骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的诱导作用。方法:将大鼠的骨髓间充质干细胞(BMSCs)暴露于不同浓度的17β-雌二醇、补骨脂素增殖和成骨分化培养基。通过茜素红(Alizarin Red)染色法观察细胞增殖;通过酶联免疫吸附试验法(ELISA)和实时聚合酶链反应(PCR)评估成骨标志物Ⅰ型胶原的分泌水平以及关键因子RUNX2的表达情况。结果:与对照组比较,17β-雌二醇补充剂促进BMSCs增殖。BMSCs增殖添加的17β-雌二醇的不同剂量(0、0.001、0.01、0.1 nmol/L),有效地改善了骨髓间充质干细胞分泌Ⅰ型胶原的水平,RUNX2的mRNA也被上调。17β-雌二醇干预后第5天,Ⅰ型胶原表达显著升高(P<0.05),在17β-雌二醇干预的第7天,RUNX2 mRNA及蛋白表达随17β-雌二醇水平的增加而升高(P<0.05)。结论:17β-雌二醇联合补骨脂素可以作为一种有效的调节剂,以提高骨髓再生中MSC的能力。

比较鳗鱼降钙素与17β-雌二醇对体外培养成骨细胞增殖与分化的影响

目的比较鳗鱼降钙素(CT)与17β-雌二醇对大鼠体外培养成骨细胞增殖和分化的影响。方法用酶消化法分离培养新生SD大鼠成骨细胞(OB),取第2继代,在培养液中分别加入不同浓度的CT和17β-雌二醇(E2);用MTT法观察OB的增殖能力(A值)及分化功能(ALP)。结果CT组较对照组从1×10-12mol·L-1起A值增加,且呈剂量依赖关系,当浓度≥1×10-9mol·L-1时,差异才有显著意义(P<0.05);E2组较对照组在1×10-9～1×10-7mol·L-1,A值均增加(P<0.001),以1×10-8mol·L-1作用最明显。CT组较对照组从1×10-12mol·L-1起ALP活性均增加,也呈剂量依赖关系,当浓度≥1×10-10mol·L-1差异有显著性意义(P<0.05);E2组较对照组在1×10-9～1×10-7mol·L-1,ALP活性均增加(P<0.05),以1×10-8mol·L-1作用最强。结论鳗鱼降钙素与17-β雌二醇均可促进大鼠体外培养OB增殖和分化。

17β-雌二醇对骨髓基质细胞成骨、成脂分化和成骨细胞成脂横向分化的影响

目的研究17β-雌二醇对小鼠原代骨髓基质细胞成骨、成脂分化以及小鼠原代成骨细胞成脂横向分化的影响。方法四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测17β-雌二醇对骨髓基质细胞和成骨细胞增殖的影响,碱性磷酸酶(ALP)活性测定法检测17β-雌二醇对骨髓基质细胞成骨分化的影响,油红O染色形态学及定量测定法检测17β-雌二醇对骨髓基质细胞成脂分化和成骨细胞成脂横向分化的影响。结果1×10-8,1×10-7,5×10-7,1×10-6,5×10-6和1×10-5mol·L-1的17β-雌二醇可以促进小鼠原代骨髓基质细胞和成骨细胞增殖(P<0.05);5×10-7,1×10-6,5×10-6和1×10-5mol·L-1的17β-雌二醇促进骨髓基质细胞的成骨分化、抑制成脂分化,但是浓度为1×10-7mol·L-1的17β-雌二醇抑制骨髓基质细胞的成骨分化、促进成脂分化(P<0.05);浓度为1×10-8,5×10-7,1×10-6,和1×10-5mol·L-1的17β-雌二醇抑制成骨细胞的成脂分化(P<0.05)。结论17β-雌二醇可以调节骨髓基质细胞向成骨细胞分化而减少其向脂肪细胞分化,并且可以抑制成骨细胞向脂肪细胞的横向分化。

17-β雌二醇诱导鲻雌性化的机制

用原位杂交和免疫细胞化学技术,对服用17 β雌二醇实验组和对照组幼年鲻脑各部和性腺进行芳香化酶的定位。结果发现,芳香化酶转录物和特异性蛋白在幼年鲻端脑(嗅球和大脑)、间脑、中脑和小脑是丰富的。在性别未分化时,芳香化酶免疫活性细胞在幼鲻脑各部的分布密度有显著的差异。在嗅球,对照组芳香化酶免疫阳性细胞的分布密度高于实验组,而在间脑、中脑和小脑实验组免疫阳性细胞数量比对照组多1～3倍,特别是下丘脑视前区芳香化酶的免疫阳性细胞数量尤占优势,提示芳香化酶在幼年鲻性分化中可能起关键的作用。另外,在性分化后,芳香化酶免疫活性还定位在卵巢颗粒细胞和精巢间质细胞与足细胞。同时,免疫阳性物质也定位在卵巢和精巢的生殖细胞。这些结果揭示了17 β雌二醇诱发幼鲻雌性化的机制可能是通过芳香化酶的介导,本研究首次提供形态学新的证据。最后,文中还讨论了芳香化酶在鲻性腺发育中可能的生理作用。

17β-雌二醇对人成骨样细胞OS-732增殖和分化的影响

采用绘制生长曲线３Ｈ－ＴＤＲ掺入、ＡＬＰ、ＢＧＰ的定量测定、免疫组化、原位杂交等和光镜等方法，探讨了１７β－雌二醇对ＯＳ－７３２细胞增殖和分化的影响及对骨粘连蛋白（ＯＮ）ｍＲＮＡ表达的影响。结果显示：１７β－雌二醇以剂量依赖性促进ＯＳ－７３２细胞的增殖，其中以１０－８ｍｏｌ／Ｌ浓度作用最强；１７β－雌二醇可以轻度降低ＡＬＰ的活性和ＢＧＰ的分泌，对ＯＳ－７３２细胞分化有轻微抑制作用。免疫组化实验结果表明ＯＳ－７３２细胞上存在ＥＲ受体，且给药后核内ＥＲ增多，为雌激素直接作用于成骨样细胞提供了一个例证。原位杂交结果表明ＯＳ－７３２上存在（ＯＮ）ｍＲＮＡ的表达，而给药后无明显变化。

17β-雌二醇对大鳞副泥鳅生长和性腺分化的影响

采用短期连续投喂的方式,研究了不同浓度17β-雌二醇(0.25、0.50、0.75和1.00 mg/kg)对大鳞副泥鳅(Paramisgurnus dabryanus)生长和性腺分化的影响。结果显示:药物处理对大鳞副泥鳅成活率无显著影响;短期内(60 d)17β-雌二醇能显著促进大鳞副泥鳅的生长,其中低浓度(0.25 mg/kg)作用效果最明显;投喂60 d后,各浓度组的雌性比例(66.11%、71.67%、72.78%和71.11%)均明显高于对照组(56.67%),其中以0.75mg/kg组雌性比例最高。结果表明17β-雌二醇能促进大鳞副泥鳅未分化性腺向卵巢发育。

17β-雌二醇对斑马鱼性别分化的影响

有报道表明,经17β-雌二醇(17β-estradiol,E2)处理后,斑马鱼种群中雌性比例上升。为了研究E2雌性化作用的机制,选取一系列斑马鱼体内与性别分化有关的基因(brca2,sox9a,sox9b,dmrt1和cyp19a1a),采用q RT-PCR分析它们在不同的处理条件下表达水平的变化。结果表明,E2能上调雌性相关基因(brca2、sox9b)的表达,下调部分雄性相关基因(sox9a)的表达,对不同发育阶段的斑马鱼体内的性激素转化通路(cyp19a1a)的影响不同。

17β-雌二醇对新生牛血清诱导的血管平滑肌细胞增殖反应的影响及其机制

目的:探讨雌甾-1,3,5(10)-三烯-3,17β-二醇(17β-雌二醇)对新生牛血清诱导血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖反应的影响及其机制。方法:用新生牛血清刺激培养的VSMCs增殖,MTT法检测17β-雌二醇对新生牛血清诱导的VSMCs增殖的影响,并用Western blot检测caveolin-1蛋白,诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及NO在此过程中的变化。结果:与对照组比,新生牛血清可促进VSMCs增殖(P<0.05),17β-雌二醇作用24 h后能明显抑制上述作用(P<0.05);17β-雌二醇预处理可抑制新生牛血清诱导的VSMCs中caveolin-1,iNOS蛋白表达下降及NO释放(P<0.05);17β-雌二醇受体阻断剂1-{4-[2-(n,n-二甲氨基)乙氧基]苯}-1,2-二苯-1-丁烯(他莫昔芬)预处理可部分逆转17β-雌二醇的抑制作用(P<0.05)。结论:17β-雌二醇通过其受体可抑制新生牛血清诱导的VSMCs增殖,此过程与上调caveolin-1蛋白表达,激活iNOS,增加NO释放有关。

17β-雌二醇对神经干细胞分裂分化作用的观察

目的 探讨雌激素对神经干细胞分裂分化的作用。方法 大鼠神经干细胞培养模型加入剂量为 10mg/L 17β 雌二醇和 10mmol/LBrdU ,分别在培养 4、12h取出细胞 ,进行免疫细胞化学标记。结果 培养 4h ,雌二醇组单位面积细胞总数和BrdU标记细胞与对照组比较差别无显著性 (P=0 2 5 9,P =0 0 6 7) ,培养 12h ,雌二醇组细胞BrdU胞核着色变浅 ,胞浆有着色 ,有 4 0 %的细胞可见明显突起 ,单位面积的细胞总数较对照组无显著性改变 (P =0 0 6 ) ,BrdU标记细胞数目减少 (P =0 0 0 3) ,提示分裂细胞减少。另一方面 ,培养 12h时的雌二醇处理组BrdU免疫荧光阳性细胞的光密度 (OD)显著高于对照组 (P <0 0 1)。结论 17β 雌二醇可以抑制大鼠神经干细胞分裂 ,促进神经干细胞分化。

17β-雌二醇联合淫羊藿苷促进SD大鼠骨髓间充质干细胞的成骨分化

背景:以往研究表明,17β-雌二醇、淫羊藿苷均能够促进大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化,二者联合应用的报道较少。目的:观察17β-雌二醇联合淫羊藿苷对骨髓间充质干细胞向骨细胞分化的影响。方法:运用全骨髓贴壁分离法分离培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,流式细胞仪进行骨髓间充质干细胞表面标志物(CD29,CD45,CD90)的鉴定。将培养细胞分为对照组、17β-雌二醇组、淫羊藿苷组、联合诱导组,进行相应成骨诱导。各组细胞经成骨诱导7,14,21 d后分别进行碱性磷酸酶活性、Ⅰ型胶原、骨钙素浓度检测及茜素红染色观察钙结节形成量。结果与结论:(1)17β-雌二醇联合淫羊藿苷作用下细胞成骨能力均增强;(2)成骨诱导7 d后,各组碱性磷酸酶活性均表达,联合诱导组>17β-雌二醇组>淫羊藿苷组>对照组;(3)成骨诱导14 d后,各组Ⅰ型胶原活性均表达,联合诱导组>17β-雌二醇组=淫羊藿苷组>对照组;(4)诱导21 d后,各组骨钙素均表达,联合诱导组>17β-雌二醇组>淫羊藿苷组>对照组;(5)茜素红染色镜下钙结节数量:联合诱导组>17β-雌二醇组=淫羊藿苷组>对照组;(6)结果表明,17β-雌二醇联合淫羊藿苷能够诱导大鼠骨髓间充质干细胞向骨细胞方向分化,且具有协同作用。

17-β-雌二醇对凝血酶诱导血管平滑肌细胞增生和c-fos、bcl-2蛋白表达影响

目的通过建立凝血酶(T)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增生模型,观察17-β-雌二醇(E_2)对 T 诱导的VSMC 增生的影响,并进一步观察其对 c-fos 蛋白和 bcl-2蛋白的表达有何作用,旨在认识 E_2作用的分子机制。方法以细胞计数法和流式细胞仪 DNA 含量测定,细胞周期分析的方法观察 T 及 E_2对 VSMC 增生和 DNA 合成的影响。免疫印迹法(Western blot)观察 T 及 E_2等各处理因素作用1小时及3天后,c-fos 蛋白和 bcl-2蛋白的变化情况。结果 10^(-9)～10^(-7)M 的E_2呈浓度依赖性地抑制2u/ml T 诱导的细胞增生和 DNA 合成作用(P<0.01)。各处理因素作用1小时后,T 能显著促进 c-fos蛋白的增加。各浓度的 E_2能显著抑制 T 的促 c-fos 蛋白增加作用,作用3天后,c-fos 蛋白含量各组差异无显著性。各处理因素作用1小时后,bcl-2蛋白无显著变化,作用3天后,T 能显著促进 bcl-2蛋白的增加。各浓度的 E_2能显著抑制这种增加。上述各项指标中,雌激素受体(ER)拮抗剂 tamoxifen(TAM)(10^(-6)M)能部分阻断10^(-7)M E_2的作用,差异有显著性。结论 E_2能抑制 T 诱导的 VSMC 增生,这可能与其抑制 c-fos 蛋白和 bcl-2蛋白表达有关,且该作用至少部分通过 ER 介导。

17β-雌二醇和维生素K2对人脐带间充质干细胞成骨分化的影响

目的探讨17β-雌二醇和维生素K_(2)对人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)成骨分化的影响。方法选取2019年11月内蒙古妇幼保健院的1份脐带标本,分离培养出hUC-MSCs。选择10-10 mol/L17β-雌二醇(17β-estradiol,E_(2))、10^(-7)mol/L维生素K_(2)(vitamin K_(2),VK_(2)),将细胞分为4组,分别为E_(2)组、VK_(2)组、E_(2)+VK_(2)组、对照组。实时荧光定量聚合酶链式反应检测目的基因骨基因Runt相关转录因子2(recombinant runt related transcription factor 2,RUNX2)、Ⅰ型胶原(type I collagen,COL1)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)的表达。结果成功提取出hUC-MSCs,通过茜素红、油红O、甲苯胺蓝染色证实hUC-MSCs具有多向分化的能力。结果显示与对照组相比,E_(2)或VK_(2)促进COL1(0.853、0.847)、RUNX2(0.830、0.757)、ALP(0.127、0.137)的表达,且联合组(COL1:1.003、RUNX2:1.170、ALP:0.163)作用更明显,差异有统计学意义(t=24.022、56.541、18.500;15.119、48.833、34.617;25.000、38.000、41.000,P<0.05)。结论E_(2)和VK_(2)能够促进hUC-MSCs成骨分化,且联合作用效果更好。本研究为治疗骨损伤性疾病提供新的思路,同时为临床应用提供理论基础。

iNOS及ERK1/2信号转导通路在17β-雌二醇抑制血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的:观察诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)及细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)信号转导通路在17β-雌二醇(17β-estradiol,E2)抑制血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖中的作用。方法:采用MTT比色法和Western blot技术,检测E2预处理前后胎牛血清(fetal calf serum,FCS)对VSMCs中DNA合成、iNOS表达及磷酸化的ERK1/2蛋白表达的影响。结果:E2作用24 h,可明显抑制FCS诱导的VSMCs增殖。Western blot的结果显示,FCS孵育VSMCs后,iNOS蛋白的表达下降,磷酸化的ERK1/2蛋白表达增加。E2预处理后,可增加iNOS蛋白的表达,抑制磷酸化ERK1/2蛋白表达。若提前应用iNOS阻断剂L-精氨酸甲酯(L-NAME)孵育VSMCs,可部分逆转E2诱导的磷酸化的ERK1/2蛋白表达下降的效应。结论:E2可抑制FCS诱导的VSMCs增殖,其作用可能与增加iNOS蛋白的表达,抑制磷酸化的ERK1/2表达有关。

17β-雌二醇对脂肪细胞内脂滴增殖的抑制作用及其机制研究

目的探讨雌激素对h ASCs成脂分化过程中脂滴相关特异基因DNA断裂因子相似蛋白C(The cell death-inducing DNA fragmentation 45-like effector,CIDEc)、脂滴包被蛋白(Perilipin1,Plin1)m RNA表达的影响。方法对3例患者行脂肪抽吸术,并进行h ASCs培养及传代,鉴定表面标志物;经典鸡尾酒法诱导其成脂,不同浓度(10-8、10-7、10-6mol/L)17β-雌二醇(17β-E2)作用于细胞,分别于24 h、4、7、11d收获细胞,用RT-PCR检测CIDEc、Plin1 m RNA表达情况。结果各组细胞经药物作用后,脂肪细胞中CIDEc及Plin1 m RNA的表达水平随着17β-E2浓度的升高而下降;而随着作用时间的延长,CIDEc及Plin1 m RNA表达水平分别于7 d和4 d达到高峰期,其后逐渐下降。当17β-E2浓度为10-6mol/L时,细胞中CIDEc及Plin1 m RNA的表达水平最低,差异有统计学意义(P<0.01);而加入雌激素受体阻滞剂ICI182780的一组细胞,雌激素对CIDEc及Plin1 m RNA表达的抑制作用明显减弱。结论 17β-E2能够显著降低脂肪细胞分化过程中CIDEc及Plin1的m RNA表达,并可能通过这一途径抑制脂肪细胞内脂滴的增殖。

17β-雌二醇浸浴对小黄鱼早期生长及性腺发育的影响

17β-雌二醇(E2)是一种天然保守的性类固醇激素,被认为是一种性别决定与分化的关键因子。然而,E2对鱼类身体生长及性腺生长影响的研究较少。本研究采用浸浴的方法,探究小黄鱼早期在不同浓度E2(1、10和50μg/L)浸浴的条件下,对生长、性腺发育及性别分化的影响。结果表明,在处理后20~60 d时,E2浸浴实验组在体长和体重上均显著低于对照组,60 d时,GSI(Gonadosomatic index)水平E2浸浴实验组和雌性对照组C(0)相比无显著性差异。解剖学及组织观察学表明,E2浸浴实验组1μg/L与10μg/L性腺头端粗短,出现二时相至三时相卵母细胞,且有明显卵巢腔,50μg/L组部分性腺发育畸形。当E2浓度达到10μg/L以上时,未发现雄性及未分化性腺,且随着浓度的上升,出现畸形的比率上升。E2浸浴组雌性率分别82%,88%,63%,对照组性比近似1:1。综上所述,E2浸浴可以抑制小黄鱼的生长,且能使小黄鱼群体雌性化。

软鳍新光唇鱼在孤立环境下17β-雌二醇的分泌行为

17-β雌二醇在鱼类性发育过程中具有控制鱼类性别分化和生殖活动的重要作用。该试验通过检测养殖水体,发现当软鳍新光唇鱼(Neolissochilus benasi)进入孤立环境中时,水体中会出现较多的17β-雌二醇,而群居状态下无法检测到足够多的雌二醇。同时这种现象在不同时期也存在差异,繁殖期个体在孤立环境下的雌二醇环境浓度为(3.66±1.08)ng/L,远少于性发育期孤立环境下的个体的雌二醇分泌量(43.52±4.79)ng/L,但两个时期孤立状态下生活7d后的水体中17β-雌二醇含量均有显著下降(P<0.05)。