福建牡蛎17β-HSD基因的克隆及其生殖周期表达

17β-羟基类固醇脱氢酶(17β-Hydroxysteroid dehydrogenase,17β-HSD)能够还原17-酮类固醇或者氧化17β-羟基类固醇,可以催化雄烯二醇和睾酮、雌酮和雌二醇、雄烯二酮和二氢睾酮之间的相互转化。本实验基于分子克隆的方法获得了福建牡蛎(Crassostrea angulata)类固醇激素合成相关酶基因17β-HSD的全长序列(全长1149bp),可编码307个氨基酸。通过实时定量PCR(qRT-PCR)技术研究了该基因在福建牡蛎中的时空表达特征,该基因在牡蛎大多数组织中(性腺、闭壳肌、外套膜、鳃和内脏团)均有表达,其中在性腺中表达量最高(p<0.05),且在生殖周期的排放期出现较高的表达量。原位杂交结果显示该基因在卵巢滤泡细胞中表达。讨论了其在牡蛎性类固醇激素合成过程中的作用,为阐明牡蛎具有内源性类固醇激素的合成能力奠定基础,为进一步研究牡蛎生殖内分泌机理提供参考。

栉孔扇贝17β-hsd4基因的克隆和表达分析

为了研究17β-hsd4基因在无脊椎动物生殖过程中的作用,实验从栉孔扇贝转录组数据库中获得一个表达序列标签,采用cDNA末端快速扩增技术克隆得到1条全长为2 417 bp的cDNA序列,其开放阅读框为2 223 bp,编码740个氨基酸,推测的氨基酸序列含有17β-HSDs特有的4个保守区和17β-HSD4的3个酶结构域,且与人等脊椎动物的序列相似性均在58%以上。半定量RT-PCR显示,该基因在栉孔扇贝精巢、卵巢、肌肉、外套膜、鳃、肝胰腺和肾脏等各组织中均有表达,其中在肝胰腺和肾脏中表达量明显高于其他组织。对不同发育时期性腺中该基因表达的qRT-PCR检测发现,其在精卵巢发育周期的表达模式不同,且在生长期和成熟期的精巢中表达量显著性高于同时期的卵巢。由此推测,栉孔扇贝多种组织中均可以合成17β-HSD4,在精巢的发育和成熟的作用明显高于卵巢。

多囊卵巢综合征与17β-HSD5基因多态性关系

目的研究多囊卵巢综合征(PCOS)表型与17β-类固醇脱氢酶基因(17β-HSD5)的单核苷酸多态性(71A→G)关系。方法收集119例多囊卵巢综合征患者和102例非多囊卵巢综合征女性血液标本,并记录多囊卵巢综合征患者临床资料、身高、体重;分离血清测定生殖激素;分离外周血淋巴细胞提取总DNA;特异引物扩增后限制性酶切(PCR-RFLP),电泳分离,溴化乙锭(EB)染色分型。结果与高加索人的17β-HSD5-71(A/A∶G/A∶G/G=39∶47.5∶13.6)不同,中国人G等位基因为稀有等位基因。在119份多囊卵巢综合征标本中只发现1次G等位基因杂合体,在102份非多囊卵巢综合征标本中未发现G等位基因。含有等位基因G的患者血清总睾酮(T)为3.9 nmol/L,孕酮(P)为6.2 nmol/L,雌激素(E2)为529.8 nmol/L,体质指数(BMI)为24.2 kg/m2,黄体生成素/卵胞刺激素(LH/FSH)为3.6,均显著高于多囊卵巢综合征患者的平均值。结论17β-HSD5-71G(野生型为A)在国外为常见等位基因,而在中国为稀有等位基因,<0.5%。该基因与多囊卵巢综合征发病相关性有待进一步研究。

狮头鹅17β-HSD2基因SNPs位点的筛查及生物信息学分析

为筛选狮头鹅17β-羟基类固醇脱氢酶Ⅱ基因(17β-HSD2)的SNPs位点并进行生物信息学分析,采用直接测序法检测17β-HSD2基因外显子5区域的SNPs位点,并利用生物信息学软件分析突变前后mRNA二级结构的变化。结果表明,在狮头鹅群体中共发现6个SNPs,仅Exon5-351 G>A为错义突变。17β-HSD2基因突变前后mRNA最小自由能(MFE)、质心二级、含有假结的mRNA二级与折叠结构,均发生变化,且MFE自由能上升,结构稳定性变弱。结果可为后续探究17β-HSD2基因对狮头鹅繁殖性状的影响机制提供基础数据。