栉孔扇贝17β-hsd4基因的克隆和表达分析

为了研究17β-hsd4基因在无脊椎动物生殖过程中的作用,实验从栉孔扇贝转录组数据库中获得一个表达序列标签,采用cDNA末端快速扩增技术克隆得到1条全长为2 417 bp的cDNA序列,其开放阅读框为2 223 bp,编码740个氨基酸,推测的氨基酸序列含有17β-HSDs特有的4个保守区和17β-HSD4的3个酶结构域,且与人等脊椎动物的序列相似性均在58%以上。半定量RT-PCR显示,该基因在栉孔扇贝精巢、卵巢、肌肉、外套膜、鳃、肝胰腺和肾脏等各组织中均有表达,其中在肝胰腺和肾脏中表达量明显高于其他组织。对不同发育时期性腺中该基因表达的qRT-PCR检测发现,其在精卵巢发育周期的表达模式不同,且在生长期和成熟期的精巢中表达量显著性高于同时期的卵巢。由此推测,栉孔扇贝多种组织中均可以合成17β-HSD4,在精巢的发育和成熟的作用明显高于卵巢。

缢蛏17β-HSDs基因家族鉴定及其在性腺发育过程中的表达分析

17β-羟类固醇脱氢酶(17β-HSDs)是性类固醇激素合成过程中最后步骤的氧化还原酶,在动物性腺发育、生殖调控中发挥重要作用。本研究基于全基因组数据,利用RACE技术和多种生物信息学软件对缢蛏17β-HSDs基因家族成员进行了鉴定、染色体定位和系统进化分析,并利用qRT-PCR技术研究了其在不同组织、性腺不同发育时期的表达特征。结果表明,缢蛏17β-HSD6、17β-HSD10、17β-HSD12、17β-HSD14基因分别定位在4条不同染色体上,所编码的蛋白均具有SDR超家族的保守结构域;系统进化结果表明,缢蛏17β-HSDs基因家族成员分化明显,各自聚为独立分支。qRT-PCR分析显示,缢蛏17β-HSDs基因在8个组织中均有表达,且在性腺和肝胰腺中的表达量较高;在缢蛏性腺发育过程中,17β-HSD6基因在精巢和卵巢排放期的表达量较高,17β-HSD10、17β-HSD12、17β-HSD14基因在两性性腺中的表达均呈现先升高再降低的变化趋势,均在成熟期的表达量较高;在成熟期,17β-HSD10基因在精巢的表达量显著高于卵巢(p<0.05),而17β-HSD12、17β-HSD14基因在卵巢中的表达量显著高于精巢(p<0.05)。综上结果表明,17β-HSD6基因可能不参与调控缢蛏性腺发育过程,而17β-HSD10、17β-HSD12、17β-HSD14基因的表达与性腺发育过程密切相关,推测其可能通过介导性类固醇激素的合成与代谢调控缢蛏性腺发育过程。研究结果将为深入研究贝类17β-HSDs调控性腺发育、生殖内分泌机制奠定理论基础。

17β-HSDs基因在乳腺癌组织中的表达及与其临床病理特征的关系

目的探讨17β-HSDs基因在乳腺癌组织中的表达及与其临床病理特征的关系。方法选取82例乳腺癌患者,获取术中癌组织标本以及距离病灶组织约5 cm以外的癌旁组织标本作为研究对象。观察1型和2型17β-HSDs基因在乳腺癌组织及癌旁组织内的表达、1型和2型17β-HSDs基因相关性、1型和2型17β-HSDs基因与乳腺癌临床病理特征的关系。结果癌组织1型和2型17β-HSDs基因阳性表达率(62.20%、65.85%)均高于癌旁组织,差异存在统计学意义(χ^(2)=23.869,14.057,P均=0.000)。Spearman相关性结果显示,1型和2型17β-HSDs基因阳性表达呈负相关性(γ=-0.322,P=0.003)。不同肿瘤分期、肿瘤直径、ER、PR、HER2状态1型17β-HSDs基因阳性表达率比较,差异存在统计学意义(P<0.05);不同年龄、病理类型、淋巴结转移数目1型17β-HSDs基因阳性表达率比较,差异不存在统计学意义(P>0.05)。不同肿瘤分期、肿瘤直径、淋巴结转移数目、ER、PR、HER2状态的2型17β-HSDs基因阳性表达率比较,差异存在统计学意义(P<0.05);不同年龄、病理类型、Ki67比较,差异不存在统计学意义(P>0.05)。结论1型和2型17β-HSDs基因在乳腺癌组织内存在高表达,且在疾病发展中存在关键作用,可作为预测患者预后重要指标。

CYP17和CYP3A4基因多态性与成都地区妊娠期肝内胆汁淤积症关系的研究

目的探讨参与雌激素合成和代谢的细胞色素P 450酶系的CYP 17和CYP 3A 4基因多态性与成都地区妊娠期肝内胆汁淤积症(in trahepatic cho lestas is of pregnancy,ICP)的关系。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术,对成都地区100例ICP患者(ICP组)和100例正常孕妇(对照组)的CYP 17基因启动子区-1931T/C多态和CYP 3A 4基因转录启动子区-290A/G多态进行分析。结果ICP组和对照组均存在CYP 17基因T/C多态,但两组CYP 17基因型TT、TC、CC频率和等位基因T、C频率的比较差异均无统计学意义(P>0.05)。两组孕妇均未检测到CYP 3A 4-V(即CYP 3A 4*1B)等位基因,所有孕妇的CYP 3A 4基因型均为w t/w t型。结论CYP 17基因启动子区T/C多态与成都地区ICP发病风险无相关性;成都地区妊娠妇女不存在CYP 3A 4基因-290A/G多态。

IL-4和IL-17用于异基因造血干细胞移植后植入综合征诊断及疗效评价研究

目的研究血浆白细胞介素-4(IL-4)和IL-17的水平变化与异基因造血干细胞移植(HSCT)后植入综合征(ES)的关联性,确定ES诊断及预测标志物。方法采用酶联免疫吸附试验检测2017-2020年在该科住院38例行异基因HSCT患者(研究组)移植前、移植后10d及发生ES时、发生急性移植物抗宿主病(a GVHD)时血浆中12种细胞因子浓度,同时与选取的健康者20例(对照组)进行对比分析。利用受试者工作特征曲线及曲线下面积分析移植后第10天IL-4、IL-17水平作为ES早期诊断标志物的特异度和敏感度。结果研究组38例患者HSCT后有9例发生ES,13例发生a GVHD,16例未发生ES及a GVHD。与a GVHD组、无ES及a GVHD组比较,发生ES组患者血浆IL-4、IL-17水平显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05);HSCT后,ES患者血浆IL-4、IL-17水平较移植前显著上调,且在治疗好转后表达水平较发生ES时下调,差异均有统计学意义(P<0.05),但与HSCT前水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。HSCT后第10天,ES患者IL-4、IL-17水平明显高于无ES患者,差异有统计学意义(P<0.05),且表达水平增高先于临床诊断。该检测时间点,IL-4诊断ES曲线下面积为(0.947±0.024),特异度为0.93%,敏感度为0.72%;IL-17诊断ES曲线下面积为(0.853±0.056),特异度为0.83%,敏感度为0.75%。IL-4+IL-17诊断ES曲线下面积为(0.896±0.031),特异度和敏感度分别为0.90%、0.73%。结论IL-4和IL-17可作为异基因HSCT后ES早期诊断及疗效评价的特异性标志物。

多囊卵巢综合征与17β-HSD5基因多态性关系

目的研究多囊卵巢综合征(PCOS)表型与17β-类固醇脱氢酶基因(17β-HSD5)的单核苷酸多态性(71A→G)关系。方法收集119例多囊卵巢综合征患者和102例非多囊卵巢综合征女性血液标本,并记录多囊卵巢综合征患者临床资料、身高、体重;分离血清测定生殖激素;分离外周血淋巴细胞提取总DNA;特异引物扩增后限制性酶切(PCR-RFLP),电泳分离,溴化乙锭(EB)染色分型。结果与高加索人的17β-HSD5-71(A/A∶G/A∶G/G=39∶47.5∶13.6)不同,中国人G等位基因为稀有等位基因。在119份多囊卵巢综合征标本中只发现1次G等位基因杂合体,在102份非多囊卵巢综合征标本中未发现G等位基因。含有等位基因G的患者血清总睾酮(T)为3.9 nmol/L,孕酮(P)为6.2 nmol/L,雌激素(E2)为529.8 nmol/L,体质指数(BMI)为24.2 kg/m2,黄体生成素/卵胞刺激素(LH/FSH)为3.6,均显著高于多囊卵巢综合征患者的平均值。结论17β-HSD5-71G(野生型为A)在国外为常见等位基因,而在中国为稀有等位基因,<0.5%。该基因与多囊卵巢综合征发病相关性有待进一步研究。

IL-17与IL-4基因遗传多态性与儿童哮喘易感性及外周血IL-17、IL-4和IgE的关系

目的探讨白细胞介素-17(L-17)与白细胞介素-4(IL-4)基因遗传多态性与儿童哮喘易感性及外周血IL-17、IL-4和Ig E的关系。方法通过采用PCR-RFLP技术检测分析60例哮喘儿童(哮喘组)和72例体检正常儿童(对照组)的IL-17以及IL-4基因的多态性,以及采用免疫组化ELISA方法检测血清中IL-17、IL-4以及总Ig E的含量,对两组患儿的检测数据进行统计比较。结果在单个基因位点多态性分析时,发现两组儿童的IL-17基因rs763780(TT,TC,cc)位点以及IL-4基因-33C/T位点的基因型和等位基因频率分布,差异有统计学意义(P<0.05);哮喘组患儿血清中IL-17含量为(3576.00±271.38)ng/L,IL-4含量为(4923.00±328.70)ng/L,总Ig E含量为(159.32±19.49)μg/m L,对照组IL-17含量为(1045.31±73.35)ng/L;IL-4含量为(897.62±51.39)ng/L;总Ig E含量为(42.16±7.45)μg/m L,哮喘组3组数据均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 IL-4基因-33C/T基因型可能是儿童容易发生哮喘的基因型,而且IL-17F基因的突变可能在哮喘的发生发展中也起着重要的作用,-33位点多态性与IL-4表达水平相关。

狮头鹅17β-HSD2基因SNPs位点的筛查及生物信息学分析

为筛选狮头鹅17β-羟基类固醇脱氢酶Ⅱ基因(17β-HSD2)的SNPs位点并进行生物信息学分析,采用直接测序法检测17β-HSD2基因外显子5区域的SNPs位点,并利用生物信息学软件分析突变前后mRNA二级结构的变化。结果表明,在狮头鹅群体中共发现6个SNPs,仅Exon5-351 G>A为错义突变。17β-HSD2基因突变前后mRNA最小自由能(MFE)、质心二级、含有假结的mRNA二级与折叠结构,均发生变化,且MFE自由能上升,结构稳定性变弱。结果可为后续探究17β-HSD2基因对狮头鹅繁殖性状的影响机制提供基础数据。

福建牡蛎17β-HSD基因的克隆及其生殖周期表达

17β-羟基类固醇脱氢酶(17β-Hydroxysteroid dehydrogenase,17β-HSD)能够还原17-酮类固醇或者氧化17β-羟基类固醇,可以催化雄烯二醇和睾酮、雌酮和雌二醇、雄烯二酮和二氢睾酮之间的相互转化。本实验基于分子克隆的方法获得了福建牡蛎(Crassostrea angulata)类固醇激素合成相关酶基因17β-HSD的全长序列(全长1149bp),可编码307个氨基酸。通过实时定量PCR(qRT-PCR)技术研究了该基因在福建牡蛎中的时空表达特征,该基因在牡蛎大多数组织中(性腺、闭壳肌、外套膜、鳃和内脏团)均有表达,其中在性腺中表达量最高(p<0.05),且在生殖周期的排放期出现较高的表达量。原位杂交结果显示该基因在卵巢滤泡细胞中表达。讨论了其在牡蛎性类固醇激素合成过程中的作用,为阐明牡蛎具有内源性类固醇激素的合成能力奠定基础,为进一步研究牡蛎生殖内分泌机理提供参考。

栉江珧wnt4基因cDNA的克隆表达及调控

本研究运用同源克隆技术和RACE技术克隆了栉江珧(Atrina pectinata)wnt4基因cDNA全长序列。该基因序列全长为1493 bp,其中开放阅读框1074 bp,编码由357个氨基酸组成的蛋白。氨基酸序列分析表明,栉江珧wnt4基因具有wnt家族保守结构域,与栉孔扇贝(Chlamys farreri)、海胆(Paracentrotus lividus)等物种具有高度的同源性。荧光定量PCR分析表明,wnt4基因表达具有广泛性和组织差异性,且与性别和性腺繁殖周期相关。wnt4基因表达量与性腺成熟度相关,并且整个繁殖周期卵巢表达量均显著高于精巢,说明wnt4基因参与了栉江珧两性性腺的发育,并在卵巢中发挥更重要的作用。不同发育阶段胚胎荧光定量分析表明,wnt4基因主要参与了栉江珧的早期胚胎发育。在胚胎发育早期(囊胚期和原肠期)wnt4基因的表达水平最高,是成体表达量的500倍;在担轮幼虫和D形幼虫期迅速下降,暗示wnt4基因可能在栉江珧早期发育阶段参与了某些器官的形成。17β-雌二醇诱导实验显示,17β-雌二醇可能通过反馈调节抑制卵巢wnt4基因表达(P<0.05);短时间处理,17β-雌二醇能诱导精巢wnt4基因显著表达(P<0.05)。

mTOR信号通路在17-DMAG克服EML4-ALK阳性肺癌细胞株H3122对alectinib耐药中的作用机制研究

目的观察m TOR信号通路在17-DMAG克服旁路信号通路激活诱导棘皮动物微管相关蛋白样4与间变性淋巴瘤激酶(echinoderm microtubule-associated protein like 4-anaplastic lymphoma kinase,EML4-ALK)融合基因阳性肺癌细胞株H3122(以下简称"H3122细胞")对alectinib耐药中的变化,并探讨其内在的调控机制。方法加入100 ng/m L转化生长因子α(transforming growth factor-α,TGF-α)和100 ng/m L表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)诱导H3122细胞对alectinib耐药,观察加入17-DMAG后上述耐药能否被克服。采用CCK-8法检测不同处理方式下H3122细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质免疫印迹(Western blot)技术检测不同处理方式下细胞中ALK、EGFR及其磷酸化蛋白的表达,观察其下游m TOR信号通路关键蛋白及活化水平的表达情况。结果 alectinib作用72 h后H3122细胞增殖率随药物浓度升高而下降,IC50为0.042μmol/L;联合TGF-α或EGF后H3122细胞对alectinib耐药,IC50远大于10μmol/L;单药17-DMAG处理后H3122细胞增殖率随药物浓度升高而下降,IC50为0.245μmol/L;联合TGF-α或EGF后H3122细胞增殖率亦被17-DMAG抑制,且呈剂量依赖性,IC50分别为0.251μmol/L和0.301μmol/L。经0.05μmol/L alectinib作用72 h后H3122细胞凋亡率为(30.01±0.92)%,alectinib联合TGF-α或EGF后细胞凋亡率分别为(6.36±0.14)%和(6.13±0.21)%,显著低于alectinib单药处理(P<0.001);经0.3μmol/L 17-DMAG单药或联合TGF-α、EGF作用72 h后H3122细胞凋亡率分别为(28.37±1.75)%、(26.69±1.2)%和(26.62±0.72)%,差异无统计学意义(P>0.05)。alectinib可抑制H3122细胞中p-ALK、p-m TOR的表达,也可抑制m TOR上、下游关键蛋白的活化状态;EGF可明显增加细胞中p-EGFR、p-m TOR及m TOR上、下游关键蛋白的活化水平表达;alectinib可抑制p-ALK表达,但联合EGF后不能抑制m TOR及m TOR上、下游关键蛋白活化水平的表达;即使联合EGF后,17-DMAG亦能抑制H3122细胞中ALK、EGFR、m TOR信号通路蛋白及其活化状态蛋白的表达。结论旁路信号通路激活介导EML4-ALK融合基因阳性肺癌细胞株H3122对alectinib耐药的方式具有可行性,m TOR信号通路在17-DMAG克服旁路信号通路激活引起alectinib的获得性耐药过程中有一定作用。

IL-17体内外抗肿瘤作用及其机制研究

目的研究IL-17体内外抗肿瘤作用及其机制,为IL-17基因疫苗进入临床提供实验依据。方法建立稳定转染小鼠IL-17全长基因的小鼠乳腺癌细胞(4T1/IL-17)及相应的对照细胞(4T1/pcDNA3.1、4T1),MTS法检测3种细胞的体外增殖情况;流式法检测3种细胞表面MHCI、MHCⅡ、LFA-1分子表达的变化及3种细胞的凋亡情况。建立荷瘤动物模型,观察3种细胞移植瘤在小鼠体内成瘤性、生长情况及小鼠生存期的变化。接种肿瘤细胞6周后分别检测3组小鼠脾细胞CTL杀伤活性、脾细胞增殖情况。用ELISA法检测小鼠脾细胞经刺激后产生IFN-γ、IL-12的情况;流式细胞技术检测4T1/IL-17细胞接种于小鼠体内的细胞凋亡情况及肿瘤组织细胞表面MHCI、MHCⅡ、LFA-1等分子表达的变化。结果转染IL-17基因后在体外对4T1/IL-17、4T1/pcDNA3.1和4T1细胞的增殖;MHCI、MHCⅡ、LFA-1分子表达;细胞凋亡无影响。将4T1/IL-17细胞接种小鼠体内后,荷瘤小鼠的肿瘤生长速度、体积均明显小于4T1/pcDNA3.1细胞组及4T1细胞组,生存时间也明显延长(P<0.05);肿瘤细胞凋亡率明显增高(P<0.05);细胞表面MHCI、MHCⅡ、LFA-1分子表达水平显著性增高(P<0.01);CTL杀伤活性及对ConA刺激的细胞增殖反应性均明显升高(P<0.01);可产生高水平的IFN-γ、IL-12,有显著性差异(P<0.01)。结论 IL-17在体外未显示抗肿瘤作用,IL-17在小鼠体内具有明显的抗肿瘤作用,其抗肿瘤作用与促进肿瘤细胞细胞凋亡及增强机体免疫应答有关。

APP17肽对β-淀粉样肽及有关蛋白质表达的影响

本研究选用人类野生型SY5Y及SY5YA4CT基因转染细胞,应用免疫沉淀Western Blot等分析方法研究APP17肽对β-淀粉样肽及有关蛋白质如IDE、NT-3、JF表达的影响,探讨其影响神经元存活和退变的可能机理。结果发现,APP17肽能抑制转染细胞Aβ胞外分泌,并能促进野生型SY5Y细胞中IDE的表达,同时对内源性NT-3和NF的表达也有促进作用。提示:APP17肽抑制Aβ分泌和促进内源性神经营养因子的表达可能是其支持神经元存活、改善神经退变的机理之一。

系统性红斑狼疮患者CD4^+CD25^+CD45RA^-T细胞中转录因子Bach2的表达及其影响

目的·研究系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者CD4^+CD25^+CD45RA^-T细胞中转录因子BTB与CNC同源基因2(BTB and CNC homology 2,Bach2)的表达及其对细胞功能的影响。方法·采用流式细胞仪分选获得活动期SLE患者(SLE组)和健康对照者(对照组)外周血CD4^+CD25^+CD45RA^-T细胞,荧光定量PCR和Western blotting检测该类细胞中Bach2的表达;分析SLE患者该类细胞中Bach2的平均荧光强度(median fluorescence intensity,MFI)与SLE疾病活动指数(systemic lupus erythematosus disease activity index,SLEDAI)的相关性。采用流式细胞术比较SLE患者IL-17+CD4^+CD25^+CD45RA^-T细胞和IL-17-CD4^+CD25^+CD45RA^-T细胞中Bach2的MFI。在Bach2过表达体系中,采用流式细胞术检测CD4^+CD25^+CD45RA^-T细胞表达IL-17的细胞比例,采用ELISA方法检测细胞培养上清液中IL-17的含量。结果·与对照组相比,SLE组CD4^+CD25^+CD45RA^-T细胞Bach2的m RNA和蛋白表达水平均显著降低(均P<0.01);SLE组Bach2的MFI与SLEDAI呈显著负相关(R2=0.433,P=0.001)。SLE患者IL-17+CD4^+CD25^+CD45RA^-T细胞Bach2的MFI显著低于IL-17-CD4^+CD25^+CD45RA^-T细胞(P=0.013)。当Bach2过表达时,SLE患者CD4^+CD25^+CD45RA^-T细胞表达炎症因子IL-17的细胞比例明显下降(P=0.032),细胞培养上清液中IL-17含量显著降低(P=0.008)。结论·SLE患者CD4^+CD25^+CD45RA^-T细胞Bach2表达下降,在该类细胞中过表达Bach2可使IL-17表达下降。

IL-17、TLR4、P2X7基因多态与慢性阻塞性肺疾病的关联研究

目的探讨炎症相关基因白细胞介素17(interleukin-17,IL-17)、Toll样受体4(toll-like receptors 4,TLR4)、嘌呤受体(purinergic receptor P2X 7,P2X7)遗传多态与慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)易感性的关系。方法采用病例对照研究设计,病例组为2015年6月~2016年5月南通市第三人民医院收集的COPD确诊患者,共152例。对照组来自参加健康体检的居民,按年龄和性别与病例进行频数匹配,共201例。基因分型采用TaqMan分型技术,关联强度采用OR值及95%CI值表示。结果采用Bonferroni校正后,IL-17基因rs2275913、rs763780;TLR4基因rs10759932、rs2737190;P2X7基因rs1718119遗传多态与COPD的易感性关联均有统计学意义(均有P<0.05)。rs2275913A等位基因(OR=0.62,95%CI:0.46~0.86,P=0.003);rs763780C等位基因(OR=1.96,95%CI:1.29~2.98,P=0.001);rs10759932C等位基因(OR=0.49,95%CI:0.34~0.73,P<0.001);rs2737190G等位基因(OR=0.51,95%CI:0.37~0.71,P<0.001)。结论 IL-17、TLR4、P2X7基因多态影响COPD遗传易感性。

中华按蚊CYP4G17基因的鉴定及生物信息学分析

基于中华按蚊（Anopheles sinensis）转录组,通过同源性搜索鉴定出一条中华按蚊CYP4家族序列,生物信息学分析将该基因命名为AsCYP4G17（GenBank登录号：KP004246）,该序列全长1 962bp,其中编码区1 671bp,编码556个氨基酸。同源性分析表明该基因与冈比亚按蚊（Anopheles gambiae）CYP4G17氨基酸序列相似性最高：一致率为89%,相似率为94%。该基因编码的蛋白质相对分子质量为63.48kD,等电点为7.70。该蛋白第20~39位氨基酸为疏水区,蛋白质亚细胞定位显示该蛋白质位于细胞质中。基因结构分析显示,该基因含有两个相位2型内含子。研究结果为进一步揭示中华按蚊CYP4G17基因的功能奠定了基础,对阐明昆虫杀虫剂抗性机理具有一定的科学意义。

知母山楂饮对大鼠非酒精性脂肪肝的治疗作用及可能机制的研究

目的研究知母山楂饮对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠的治疗作用。方法2021年6—12月,在沧州医学高等专科学校实验中心将55只雄性SD大鼠(其中5只大鼠用于判断是否造模成功)经过适应性喂养后,按照随机数字表法分为正常组(基础饲料喂养)、模型组(高脂饲料喂养进行NAFLD模型造模)、阳性对照组(造模成功后给予普罗布考500 mg/kg)、低剂量给药组(造模成功后给予知母山楂饮2.5 g/kg)、高剂量给药组(造模成功后给予知母山楂饮5 g/kg),每组10只。造模后培养8周,对各组大鼠称体质量,同时进行胰岛素耐量试验,以及测定各组大鼠血清中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)。之后,各组的大鼠被处死,剖取各组大鼠肝脏组织。计算肝脏指数后,经HE染色、油红O染色后观察组织病理形态学变化。并测定肝脏组织的SOD、MDA、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)。对肝脏组织11β-羟基类固醇脱氢酶1(11β-HSD1)、髓样分化因子初次应答基因88(myd88)、Toll样受体4(TLR4)和核因子κB(NF-κB)mRNA表达及蛋白表达检测。结果低剂量给药组大鼠体质量(515.72±20.55)g明显低于模型组(595.26±27.88)g(P<0.01),其中低剂量给药组肝脏指数变化(2.65±0.05)%明显低于模型组(3.05±0.09)%(P<0.01);累积糖耐量低剂量给药组(14.63±1.05)mmol·L^(-1)·h^(-1)明显低于模型组(17.95±1.09)mmol·L^(-1)·h^(-1)(P<0.05),可改善胰岛素抵抗;很好改善大鼠血清中TC、TG、LDL-C、AST、ALT、MDA水平,升高HDL-C、SOD水平(P<0.05);降低肝脏组织组织中11β-HSDl、MyD88、TLR4B和NF-κB表达水平(P<0.05);并且高剂量给药组效果明显。结论知母山楂饮可以很好地改善高脂饲料引发的大鼠非酒精性肝损伤。

奶水牛HSD17B4基因的克隆及序列分析

17β-雌二醇脱氢酶Ⅳ（17β-Hydroxysteroid dehydrogenaseⅣ,HSD17B4）是一种在类固醇代谢过程中发挥重要作用的酶蛋白。为了阐明HSD17B4基因对水牛繁殖性能的影响,试验以奶牛HSD17B4基因序列（登录号：NM_001007809.2）为探针设计引物,利用PT-PCR克隆水牛HSD17B4基因,并对基因的核苷酸序列和蛋白质序列特征进行生物信息学分析。结果显示,水牛HSD17B4基因mRNA序列全长2 680 bp,其中5＇端长145 bp,3＇端长324 bp,CDS序列长2 211 bp,编码736个氨基酸。同源序列分析显示,水牛HSD17B4基因编码序列与其他物种具有较高的同源性,证明成功克隆水牛HSD17B4,为进一步阐明该基因在水牛上的作用机制奠定基础。

过敏性鼻炎患者外周血及鼻腔分泌物长链非编码RNA SNHG4基因表达及其临床意义

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)小核仁RNA宿主基因4(SNHG4)在过敏性鼻炎(AR)患者外周血及鼻腔分泌物中表达水平,并分析其临床意义。方法选取2019-06-01-2022-06-12南通大学第四附属医院耳鼻喉科收治的90例AR患者作为研究对象(AR组),另选取同院同期体检的90名健康志愿者为对照组。qRT-PCR法检测外周血及鼻腔分泌物中LncRNA SNHG4、维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)mRNA、信号转导和转录活化因子6(STAT6)mRNA表达;流式荧光法检测并计算Th17/Treg细胞比例;所有AR患者行过敏性鼻炎评分量表(SFAR)评分。将AR患者分为轻度AR组(36例)、中-重度AR组(54例),ELISA法检测血清中白介素-17(IL-17)、免疫球蛋白(IgE)表达;Pearson法分析LncRNA SNHG4与SFAR、IL-17、IgE、ROR-γtmRNA、STAT6 mRNA、Th17/Treg细胞比例的相关性;ROC曲线分析LncRNA SNHG4对AR的诊断价值。结果GEO数据库发现,季节性AR患者鼻部上皮细胞下调的3个基因中包含LncRNA SNHG4。AR患者外周血单核细胞中LncRNA SNHG4表达为0.80±0.17,与对照组的1.00±0.10相比降低,t=9.620,P<0.001。AR患者鼻腔分泌物中LncRNA SNHG4表达为0.93±0.29,与对照组的1.01±0.30相比差异无统计学意义,t=1.819,P=0.071。对照组、轻度AR组、中-重度AR组患者的SFAR评分分别为(0.00±0.00)、(3.15±0.38)、(5.20±1.30)分,F=892.325,P<0.001;血清IL-17表达水平分别为(3.00±0.30)、(5.28±0.85)、(9.96±1.26)ng/L,F=1234.385,P<0.001;IgE表达水平分别为(200.00±65.00)、(253.63±50.85)、(406.96±80.52)kU/L,F=159.725,P<0.001;外周血单核细胞ROR-γt mRNA表达水平分别为1.00±0.36、1.40±0.30、2.00±0.55,F=166.055,P<0.001;Th17/Treg细胞比例分别为1.07±0.19、1.35±0.26、1.90±0.50,F=109.414,P<0.001;表达水平均依次升高,且差异有统计学意义。而LncRNA SNHG4表达水平分别为1.00±0.10、0.85±0.08、0.50±0.10,F=456.389,P<0.001;STAT6 mRNA表达水平分别为1.00±0.22、0.79±0.20、0.46±0.16,F=123.311,P<0.001;表达水平均依次降低,且差异亦有统计学意义。相关性分析结果显示,与LncRNA SNHG4表达呈负相关的为SFAR评分(r=-0.524,P<0.001)、IL-17(r=-0.601,P<0.001)、IgE(r=-0.654,P<0.001)、ROR-γt mRNA(r=-0.648,P<0.001)、Th17/Treg细胞比例(r=-0.706,P<0.001),呈正相关的为STAT6 mRNA(r=0.973,P<0.001)。LncRNA SNHG4诊断AR的ROC曲线下面积为0.773,灵敏度为84.44%;IgE诊断AR的ROC曲线下面积为0.849,灵敏度为85.6%;联合诊断AR的ROC曲线下面积为0.949,灵敏度为90.2%。结论LncRNA SNHG4在AR患者外周血单核细胞中表达降低,其表达变化与SFAR、IL-17、IgE表达及Th17/Treg细胞比例平衡存在相关性,且在AR的诊断及病情严重程度鉴别方面具有一定临床价值。

PDCD4基因对T淋巴细胞亚群分化的影响

目的探讨PDCD4基因对小鼠T淋巴细胞亚群分化的影响。方法采用流式细胞术检测PDCD4基因缺失小鼠脾细胞和淋巴结细胞中的CD8+T和CD4+T,及其亚群Th1、Th2、Th17和调节性T细胞(Treg)的特异性标记分子,并分析各细胞亚群的比例变化。结果 pdcd4-/-小鼠脾脏和淋巴结中CD8+T细胞数量较野生型C57BL/6小鼠有所下降(P<0.05),CD4+T细胞及Th1细胞也呈下降趋势,差异无统计学意义(P>0.05);而PDCD4基因缺失后Th2和Th17的分化比例无显著变化(P>0.05);进一步分析CD4+T细胞群体中CD25+Foxp3+Treg的表达,发现pdcd4-/-小鼠CD25+Foxp3+Treg比例明显上调(P<0.05)。结论 PDCD4基因能够影响部分T淋巴细胞亚群的分化,PDCD4基因敲除小鼠中CD8+T细胞数量下降和CD25+Foxp3+Treg比例升高,提示PDCD4基因有可能在免疫调节方面起到一定作用。而PDCD4基因对于CD4+T以及Th1、Th2和Th17的分化并无明显作用。