AutoLumo A2000检测系统检测17-α-羟孕酮的性能验证及评价

目的对AutoLumo A2000检测系统检测17-α-羟孕酮(17-α-OHP)的分析性能进行评价。方法参考美国临床实验室标准化协会(CLSI)系列文件,制订方法学评价方案,对AutoLumo A2000检测系统的精密度、灵敏度、线性范围、干扰试验和参考区间进行评价和验证。结果分析室内质控品QC1批内精密度为2.85%,批间精密度为1.25%,室内质控品QC2批内精密度为3.25%,批间精密度为2.65%;分析灵敏度为0.005 ng/mL;线性相关系数R 2为0.9998,在试剂参考范围内线性良好;高胆红素和高三酰甘油水平对检测结果无显著干扰,高血红蛋白水平对结果影响明显;参考区间偏倚为-4.34%。结论AutoLumo A2000检测系统检测17-α-OHP的分析性能良好,能够满足临床检测的需求。

21-羟化酶缺乏症的诊治探讨(附2例报告并文献复习)

目的探讨21-羟化酶缺乏症(21-OHD)的临床特征、诊断依据及治疗方法,减少误诊率。方法对2例21-OHD病人的临床资料进行分析,并复习相关文献。结果 2例均为女性,均有肤色黑和不同程度男性化表现,促肾上腺皮质激素(ACTH)、睾酮水平偏高。1例为非经典型,1例为单纯男性化型。结论根据实验室检查结果结合临床表现可明确诊断,长期应用激素替代治疗可取得较好的治疗效果。

16种17-羟孕酮制备物基于两种评价方案的互通性研究

目的应用两种互通性评价方案评价16种17-羟孕酮制备物的互通性。方法互通性研究,收集2018年2月至2019年6月之间北京医院检验科的新鲜人血清共52份。根据美国临床和实验室间标准化研究所文件(CLSI)EP14-A3和国际临床化学和检验医学联合会(IFCC)互通性评价工作组报告,以血清17-羟孕酮同位素稀释液相色谱串联质谱法(ID-LC/MS/MS)为比对方法,3种临床常规分析系统(1种放射免疫法,2种LC/MS分析法)为待评方法,一同测定52个人血清样本和16种制备物的17-羟孕酮浓度,评价制备物质的互通性。结果综合两种互通性评价结果,所有正确度验证材料和国家甾体激素标准物质在LC/MS分析系统中都显示出良好的互通性,6/9的EQA材料在三种常规分析系统中都显示出互通性。其中所有材料在偏倚差值法中所有材料的LC/MS分析系统中都显示出良好的互通性。结论两种互通性评价结果有所差异,使用新鲜冰冻人血清作为血清17-羟孕酮的质评材料均能满足互通性要求。

同位素稀释液相色谱串联质谱法测定血清17α-羟孕酮候选参考测量程序的研究

目的研究1种基于液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)技术的血清17α-羟孕酮(17α-OHP)候选参考测量程序并对其进行评价。方法2019年12月,取上海市临床检验中心员工体检留存的血清标本,采用正己烷乙酸乙酯混合液(体积比3∶2)提取加入同位素内标的血清样本,C18反向色谱柱分离,正离子电喷雾质谱仪检测,参照美国临床实验室标准化协会(CLSI)C62-A文件对建立的候选参考方法进行校准曲线、检测限与定量限、基质效应、不精密度、正确度、特异性、携带污染、线性范围等基本分析性能验证。结果17α-OHP的线性范围为0.21~119.67μg/L。检测限和定量限分别为5.218 ng/L、0.116μg/L。3种不同比例(50∶50、80∶20、20∶80)的血清与溶液混合物的相对基质效应分别为-0.02%、-0.40%、-0.90%。批内变异系数(CV)在0.164、14.81、81.63μg/L浓度处分别为1.73%~2.11%、0.98%~1.71%、0.47%~0.87%,批间CV在上述3个浓度点处分别为1.82%、1.03%、0.80%。加标样本平均回收率在0.5、20、100μg/L处分别为100.4%、101.7%、102.8%;检测中国计量科学研究院标准参考物质GBW09829,结果均在规定的不确定度范围内。无携带污染和特异性干扰。结论成功建立了基于同位素稀释LC-MS/MS技术的血清17α-OHP候选参考测量程序。该候选参考测量程序有着良好的精密度和准确度,能用于常规临床检验方法的量值溯源。

液相色谱串联质谱法分析血清中多囊卵巢综合征相关甾体激素的性能评价

目的建立液相色谱串联质谱法定量检测血清中17-α-羟孕酮、雄烯二酮、双氢睾酮、脱氢表雄酮、脱氢表雄酮硫酸酯的方法,并对其进行性能分析评价。方法采用液相色谱串联质谱法定量检测血清中17-α-羟孕酮、雄烯二酮、双氢睾酮、脱氢表雄酮、脱氢表雄酮硫酸酯的含量。根据《中国药典》(2015年版)通则中9012“生物样品定量分析方法验证指导原则”和《液相色谱串联质谱临床检测方法的开发与验证》对所建方法的线性范围、检出限、精密度、样本稳定性、回收率和携带污染率等基本性能进行确认。结果液相色谱串联质谱法定量检测血清中17-α-羟孕酮、雄烯二酮、双氢睾酮、脱氢表雄酮、脱氢表雄酮硫酸酯的线性范围分别为0.16~40 ng/mL、0.16~40 ng/mL、32~8000 pg/mL、0.16~40 ng/mL、2~500μg/dL,检出限分别为0.008 ng/mL、0.008 ng/mL、0.0032 ng/mL、0.008 ng/mL、1 ng/mL,定量下限分别为0.032 ng/mL、0.016 ng/mL、0.0064 ng/mL、0.016 ng/mL、4 ng/mL,批内变异系数(CV)和批间CV均小于15%,回收率分别为89.79%~101.23%、87.23%~98.33%、91.39%~101.10%、86.99%~94.30%、86.35%~108.35%。同时,血清中各激素在-20℃保存条件下7 d内是稳定的。结论建立的液相色谱串联质谱法基本性能符合评价标准,能够灵敏且准确地检测血清中17-α-羟孕酮、雄烯二酮、双氢睾酮、脱氢表雄酮和脱氢表雄酮硫酸酯的含量。

人工诱导日本鳗鲡(Anguilla japonica)成熟与受精

对池塘养殖的日本鳗鲡多次注射鲑鱼脑垂体(20mg/条·周),可使其卵黄积累。经过11～12次注射,卵母细胞达到核偏移阶段。在此阶段注射17-α-20-β双羟孕酮(DHP),可使卵母细胞离巢。对处在核偏移阶段的雌性日本鳗鲡,在注射鲑鱼脑垂体(20mg/条)24小时后,注射DHP,可成功地诱导其成熟和产卵。大多数雌鱼在注射DHP15～18小时内开始产卵。注射DHP15小时后产出的卵的受精率和孵化率都比较高,可18～21小时后产出卵的受精率和孵化率则低的多。产卵后的6～9小时内,卵的受精率与孵化率下降很很快,这表明在产卵后,必须马上进行人工受精。对池塘养殖的雄鱼多次注射绒毛膜促性腺激素(hCG)(1IU/克·周),可以诱导精子形成、排精以及获得成熟精子。大多数雄鱼在注射5～6针后开始排精,并且排精量逐渐上升,在11～31针时保持1～2克。精子活力在注射hCG24小时后达到顶峰,注射3天后开始下降。钾离子对维持鳗鲡精子的活力很重要。用含有15·2mMKCl的人工精浆来稀释精子很合适。用上述方法处理人工养殖的雌鱼和雄鱼,我们成功地得到了许多受精卵。

临床诊断为21羟化酶缺陷症患者的CYP21A2基因突变检出情况及不同突变患者的激素水平比较

目的:分析临床诊断为21羟化酶缺陷症(21-OHD)患者的CYP21A2基因突变检出情况,以明确临床诊断的准确率。方法:纳入2015年1月至2018年1月于北京协和医院就诊的514例21-OHD患者,年龄(15.6±11.8)岁,其中男164例,女350例,收集其临床和生化资料。提取外周血白细胞DNA,利用PCR扩增加Sanger测序方法和多重连接探针扩增技术(MLPA)检测CYP21A2基因的突变情况。根据基因检测结果将患者进行分组,两个CYP21A2等位基因均检出突变为A组,仅1个等位基因检出突变为B组,未检出CYP21A2基因突变的为C组,比较各组患者激素水平的差异。结果:514例患者中,401例(78.0%)患者的两个CYP21A2等位基因均检出致病突变,90例(17.5%)仅1个等位基因检出致病突变,23例(4.5%)未检出致病突变。不同临床表型的患者CYP21A2基因突变检出率差异无统计学意义。男性患者中,临床表现为单纯男性化型的A和B组患者血总皮质醇水平分别为0.04(0.02,0.20)nmol/L和0.24(0.17,0.28)nmol/L,A组低于B组,差异有统计学意义(P=0.014)。女性患者中,临床表现为失盐型的A、B和C组患者17-羟孕酮(17-OHP)分别为153.7(90.1,204.5)nmol/L、38.2(31.0,183.3)nmol/L和42.6(27.8,48.1)nmol/L,A组高于B组和C组,差异均有统计学意义(均P<0.05);临床表现为单纯男性化型的A、B和C组的孕酮水平分别为57.8(34.4,110.2)nmol/L、63.6(31.4,110.8)nmol/L和23.0(8.6,33.2)nmol/L,C组低于A组和B组,差异均有统计学意义(均P<0.05);临床表现为非经典型的A、B和C组患者17-OHP水平分别为158.7(59.1,187.6)nmol/L、147.8(131.9,179.3)nmol/L和24.5(20.4,54.2)nmol/L,C组低于A组和B组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:部分临床诊断为21-OHD的患者并未能检出两个CYP21A2等位基因的突变,表明其他引起17-OHP水平升高的先天性肾上腺皮质增生症(CAH)类型有被误诊为21-OHD的可能,基因检测对于CAH不同类型的鉴别诊断起到重要作用。

湖南省先天性肾上腺皮质增生症筛查的初步研究

目的 了解本省新生儿先天性肾上腺皮质增生症（CAH）的发生率,为减少新生儿发育缺陷提供科学参数.方法 采用时间分辨荧光免疫法检测新生儿疾病筛查干血斑中17-羟孕酮（17-OHP）浓度.对筛出阳性者（17-OHP≥30 nmol/L）根据实际情况,分别进行优化复查流程：（1）初筛结果17-OHP≥100 nmol/L直接进入CAH确诊程序;（2）初筛新生儿17-OHP在30 ～ 80 nmol/L范围内,应结合新生儿出生情况,1周后采血复查：若降至30 nmol/L以下进入常规新生儿保健程序;若测定值较前次结果有下降但未降至30 nmol/L以下者追踪采血监测,直至17-OHP降至30 nmol/L以下;若重测17-OHP水平较前次≥2倍,排除影响17-OHP测定因素外,应进行CAH的确诊程序.结果 筛查40 988例新生儿中筛出17-OHP≥30 nmol/L者1 192例,其阳性率2.91％,确诊CAH 4例,发病率为1/10 247.98.98％的新生儿17-OHP ＜40 nmol/L.结论 建立了湖南省新生儿17-OHP的阳性基础数据,为新生儿17-OHP切值的确定提供了依据.优化的复查-确诊流程有效可行.