17α-乙炔雌二醇胁迫下零价铁对硝化污泥中抗性基因的影响

采用硝化污泥序批式反应器去除17α-乙炔雌二醇(EE2),基于宏基因组测序技术考察了零价铁(ZVI)对硝化污泥去除17α-乙炔雌二醇(EE2)过程中抗生素抗性基因(ARGs)的影响,结合菌群结构分析了其潜在影响机制.结果表明,硝化污泥处理EE2过程中ARGs丰度提高了724.42TPM(每百万转录本中来自于某基因的转录本数目),但ZVI削减了此过程中的ARGs丰度增长趋势,EE2及ZVI改变了ARGs亚型的分布,但对ARGs类型及亚型种类无明显影响.EE2使得硝化污泥中属于高风险等级(Q1及Q2)的ARGs丰度增加了555.75TPM及151.08TPM,ZVI降低了硝化污泥中的抗性风险.多重耐药是硝化污泥中丰度占比最大的高风险(Q1和Q2等级)ARGs类型,占比高达49.23%.微生物群落是硝化污泥中ARGs的重要驱动因子,鞘脂单胞菌属(Sphingopyxis)等菌属与多种ARGs显著正相关,可能是多种ARGs的共同潜在宿主.

17β-雌二醇对子宫内膜异位症患者在位子宫内膜间质细胞ERK1/2信号转导通路活化的影响

目的研究17β-雌二醇（17β-E2）对子宫内膜异位症（内异症）患者在位子宫内膜间质细胞胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）信号转导通路活化的影响,探讨ERK1/2信号转导通路在介导雌激素促进内异症发生发展中的作用。方法体外分离培养内异症患者在位子宫内膜间质细胞。用1×10^-6mol/L 17β-E2处理子宫内膜间质细胞不同时间（0~120 min）,然后用MTT法和免疫印迹法（Western blot）检测子宫内膜间质细胞的活性和ERK1/2的活化情况,检测出子宫内膜间质细胞活性最强的时间点。用Western blot和MTT法分别检测不同浓度ERK1/2抑制剂PD98059对1×10^-6mol/L 17β-E2作用20 min后子宫内膜间质细胞活性及ERK1/2活性的变化。结果 1×10^-6mol/L的17β-E2作用20 min时,子宫内膜间质细胞的活性最强,ERK1/2活化在17-βE2作用10 min后出现,在20 min时达高峰;随着PD98059作用浓度的增加,ERK1/2活化水平逐渐下降,浓度为50μmol/L时已被完全阻断;随着PD98059作用浓度的增加,子宫内膜间质细胞活性逐渐下降,在50μmol/L和100μmol/L时,活性最低,但此时仍高于空白对照组。结论 17β-E2增强子宫内膜间质细胞的活性可能与17β-E2通过非转录机制,迅速激活子宫内膜间质细胞的ERK1/2信号转导通路有关。

iNOS及ERK1/2信号转导通路在17β-雌二醇抑制血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的:观察诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)及细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)信号转导通路在17β-雌二醇(17β-estradiol,E2)抑制血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖中的作用。方法:采用MTT比色法和Western blot技术,检测E2预处理前后胎牛血清(fetal calf serum,FCS)对VSMCs中DNA合成、iNOS表达及磷酸化的ERK1/2蛋白表达的影响。结果:E2作用24 h,可明显抑制FCS诱导的VSMCs增殖。Western blot的结果显示,FCS孵育VSMCs后,iNOS蛋白的表达下降,磷酸化的ERK1/2蛋白表达增加。E2预处理后,可增加iNOS蛋白的表达,抑制磷酸化ERK1/2蛋白表达。若提前应用iNOS阻断剂L-精氨酸甲酯(L-NAME)孵育VSMCs,可部分逆转E2诱导的磷酸化的ERK1/2蛋白表达下降的效应。结论:E2可抑制FCS诱导的VSMCs增殖,其作用可能与增加iNOS蛋白的表达,抑制磷酸化的ERK1/2表达有关。

17-β雌二醇对宫颈癌Hela细胞环氧合酶-2和增殖细胞核抗原表达的影响

目的:探讨17-β雌二醇(E2)对宫颈癌Hela细胞环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)和增殖细胞核抗原(proliferatingcell nuclear antigen,PCNA)表达的影响。方法:Hela细胞分别用0.1%乙醇(对照组)、E2(E2组)、E2+依托昔布(E2+依托昔布组)作用24 h后,采用免疫细胞化学、Western blot及RT-PCR方法检测COX-2和PCNA的表达。结果:E2组COX-2和PCNA蛋白及mRNA水平较对照组明显升高(P<0.01);而E2+依托昔布组PCNA水平较E2组显著降低(P<0.01),但依然高于对照组。结论:E2可促进Hela细胞COX-2表达,并进一步上调PCNA水平。

17β-雌二醇和维生素K2对人脐带间充质干细胞成骨分化的影响

目的探讨17β-雌二醇和维生素K_(2)对人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)成骨分化的影响。方法选取2019年11月内蒙古妇幼保健院的1份脐带标本,分离培养出hUC-MSCs。选择10-10 mol/L17β-雌二醇(17β-estradiol,E_(2))、10^(-7)mol/L维生素K_(2)(vitamin K_(2),VK_(2)),将细胞分为4组,分别为E_(2)组、VK_(2)组、E_(2)+VK_(2)组、对照组。实时荧光定量聚合酶链式反应检测目的基因骨基因Runt相关转录因子2(recombinant runt related transcription factor 2,RUNX2)、Ⅰ型胶原(type I collagen,COL1)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)的表达。结果成功提取出hUC-MSCs,通过茜素红、油红O、甲苯胺蓝染色证实hUC-MSCs具有多向分化的能力。结果显示与对照组相比,E_(2)或VK_(2)促进COL1(0.853、0.847)、RUNX2(0.830、0.757)、ALP(0.127、0.137)的表达,且联合组(COL1:1.003、RUNX2:1.170、ALP:0.163)作用更明显,差异有统计学意义(t=24.022、56.541、18.500;15.119、48.833、34.617;25.000、38.000、41.000,P<0.05)。结论E_(2)和VK_(2)能够促进hUC-MSCs成骨分化,且联合作用效果更好。本研究为治疗骨损伤性疾病提供新的思路,同时为临床应用提供理论基础。

OX-LDL及17β-雌二醇对体外人脐静脉内皮细胞ACE2 mRNA表达的影响

目的探讨氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)及17β-雌二醇(E2)对体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)血管紧张素转化酶II(ACE2)表达的影响。方法以不同浓度的ox-LDL(20,40,80mg/L)及E2(2,10,50nmol/L)分别单独刺激HUVECs 24h并以40mg/L的ox-LDL与不同浓度的E2(2,10,50nmol/L)共同刺激HUVECs 24h。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测ACE2 mRNA的表达情况。结果与对照组比较,ox-LDL单独刺激组ACE2 mRNA表达分别降低为0.74±0.08,0.52±0.07和0.31±0.06(均P<0.01),E2单独刺激组ACE2 mRNA表达分别增加为1.54±0.19,2.43±0.28和2.89±0.26(均P<0.01);40mg/L的ox-LDL与2,10,50nmol/LE2共同刺激组,ACE2 mRNA表达分别为40mg/Lox-LDL单独刺激组的1.95±0.38,2.56±0.32和3.22±0.37(3组间均P<0.05)。结论ox-LDL呈浓度依赖性下调ACE2 mRNA表达;E2呈浓度依赖性上调ACE2 mRNA表达,且E2呈正向量效关系抑制ox-LDL引起的ACE2表达下调。

ERK1/2蛋白在17β-雌二醇抑制睾酮诱导的心肌细胞肥大反应中的作用

目的观察17β-雌二醇对睾酮诱导的心肌肥大反应的影响,探讨细胞外信号调节激酶(ERK1/2蛋白)在性激素对心肌肥大影响中的作用。方法采用差速贴壁法分离、纯化培养新生SD大鼠心肌细胞,以Bradford法测定心肌细胞蛋白质含量,同位素法分析3H-亮氨酸(3H-Leu)掺入,以免疫印迹法检测心肌细胞ERK1/2蛋白表达水平的变化。结果 10-10～10-6mol/L 17β-雌二醇可明显对抗睾酮诱导的心肌细胞蛋白质含量和3H-Leu掺入的增加,其中以10-8mol/L 17β-雌二醇作用最为明显;预先给予10-6mol/L雌激素受体拮抗剂他莫昔芬作用2 h,可部分取消17β-雌二醇对睾酮诱导的心肌细胞蛋白质含量增加的抑制效应。用50μmol/L ERK1/2上游激酶MEK1/2的特异性抑制剂PD98059预处理2 h不能增强17β-雌二醇对睾酮诱导的心肌细胞3H-Leu掺入的抑制作用;10-8mol/L 17β-雌二醇可以对抗睾酮诱导的心肌细胞ERK1/2蛋白表达增加;10-6mol/L他莫昔芬预处理2 h可部分取消17β-雌二醇对睾酮诱导的心肌细胞ERK1/2蛋白表达增加的抑制作用。结论 17β-雌二醇经雌激素受体介导下调睾酮诱导的心肌细胞ERK1/2蛋白表达,从而抑制由睾酮诱导的心肌细胞肥大反应。

TiO_2光催化降解水中内分泌干扰物17β-雌二醇

以低压汞灯为光源,采用间歇式光氧化反应器,研究了17β-雌二醇(E2)在纳米TiO2(Degussa P-25)悬浆体系中的光催化降解.考察了溶液pH、E2初始浓度、TiO2光催化剂投加量、UV光强、H2O2、O2对E2光催化降解的影响.结果表明,TiO2光催化工艺可以有效地去除水中的E2,E2的光降解过程符合一级反应动力学模型;TiO2投加量为200 mg/L时,在14 W低压汞灯照射下,初始浓度为400μg/L的E2在自来水中的光降解一级反应速率常数为0.018 min-1,E2的光催化降解速率常数与其初始浓度、TiO2光催化剂的用量、溶液的pH值、UV光强等因素有关;外加H2O2、O2可以影响催化剂的光降解效率.

UV/H_2O_2工艺降解水中17α-乙炔基雌二醇

采用UV/H2O2间歇式光氧化反应器去除饮用水中低浓度17α-乙炔基雌二醇(EE2).结果表明,在原水中EE2浓度约为650μg/L、UV光强154μW/cm2、H2O2投加量5mg/L、反应时间30min条件下,EE2的去除效率可达到90%;光降解过程符合拟一级反应动力学模型;EE2的光降解速率常数随着H2O2投加量和光强的增加而增加.较低的反应液pH值有助于EE2的光降解.UV/H2O2联用工艺对EE2的去除具有协同作用.阴离子HCO3-、NO3-、Cl-、SO42-对EE2光降解反应有抑制作用.

17β-雌二醇和2-甲氧基雌二醇对慢性低氧性肺动脉高压大鼠体内内皮素-1/一氧化氮体系的影响

目的:探讨17β-雌二醇(E2)及2-甲氧基雌二醇(2ME)对慢性低氧性肺动脉高压大鼠体内内皮素-1(ET-1)/一氧化氮(NO)体系的影响。方法:雌性SD大鼠48只,按随机数字表法平均分为6组(各组n=8):假手术组、去势组、低氧组、去势+低氧组、去势+低氧+E2组、去势+低氧+2ME组。去势组行卵巢切除术;非去势组打开腹腔找到卵巢后不做处理直接还纳缝合。术后去势+低氧+E2组皮下注射E2[20μg/(kg·d)],去势+低氧+2ME组皮下注射2ME[240μg/(kg·d)],其他组皮下注射生理盐水(0.1 ml/d)。低氧组大鼠置于低氧箱内饲养,非低氧组大鼠呼吸正常空气。连续饲养8周以建立低氧性肺动脉高压模型。分别测定血清ET-1、NO水平、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)活性及肺组织内皮素A受体(ET_AR)、内皮素B受体(ET_BR)、eNOS表达变化。结果:低氧组、去势+低氧组大鼠肺小动脉管壁增厚,管腔变窄明显,平均肺动脉压(mPAP)显著高于假手术组(P均<0.01);E2和2ME干预组大鼠上述形态学及mPAP改变相对较轻。与假手术组相比,去势组和低氧组血清ET-1和肺组织ET_AR mRNA及蛋白水平均明显升高,ET_BR mRNA及蛋白水平明显下降(P均<0.01);去势+低氧组以上指标变化更显著;E2和2ME干预后血清ET-1和肺组织ET_AR表达明显下降,但仍高于假手术组,同时ET_BR表达明显上升,但仍低于假手术组(P均<0.01);且去势+低氧+2ME组血清ET-1水平低于去势+低氧+E2组(P<0.05)。与假手术组相比,去势组肺组织eNOS蛋白水平明显下降(P<0.01);低氧组血清NO水平及肺组织eNOS蛋白水平明显下降(P<0.05或P<0.01);去势+低氧组血清NO水平、eNOS活性及肺组织eNOS mRNA和蛋白水平均明显下降(P均<0.01);去势+低氧+E2组和去势+低氧+2ME组上述指标较去势+低氧组均明显上升(P<0.05或P<0.01),但仍低于假手术组(P均<0.05)。结论:E2及2ME均能显著降低血清ET-1水平,减少肺组织ET_AR表达,增加ET_BR的表达,升高血清NO水平、eNOS活性及肺组织eNOS表达,通过改善ET-1/NO体系平衡部分逆转肺动脉高压。

类-Fenton体系对水中17β-雌二醇的光降解

以250W照明金属卤化物灯为光源研究了水中17β雌二醇(E2)在类Fenton体系中的光降解。结果表明,Fe(Ⅲ)/H2O2体系能有效地光降解E2。pH3～6范围内,E2光降解率及反应初始速率随酸度的增大而增大;H2O2初始浓度越大,E2降解率及反应初始速率越大;E2初始浓度越低,E2降解率越高,反应初始速率越低。

应用流式细胞术检测17β-雌二醇对H_2O_2诱导的视网膜神经细胞凋亡的保护作用

目的用流式细胞技术(FACS)检测H2O2诱导的视网膜神经细胞凋亡以及17β-雌二醇(βE2)对细胞的保护作用。方法取新生24 h内的SD大鼠进行视网膜神经细胞的原代培养,待细胞培养4-5 d,经不同因素处理后,用MTT法检测细胞存活率,用FACS法检测细胞凋亡率。结果200μmol/L的H2O2能有效诱导视网膜神经细胞凋亡;低浓度的H2O2不能诱导细胞凋亡,但高浓度的H2O2诱导细胞凋亡的同时也导致了正常细胞比率的锐减;10μmol/L的βE2能有效对抗H2O2诱导的视网膜神经细胞凋亡;低浓度的βE2对细胞未表现出保护作用,高浓度的βE2对细胞反而表现出毒性作用。结论一定浓度的βE2在一定范围内能对抗H2O2诱导的视网膜神经细胞凋亡,表现对神经细胞保护的作用。

17-β雌二醇对去卵巢大鼠垂体中Bcl-2和Bax表达的影响

为了探讨雌激素对垂体细胞发育和凋亡的影响,利用免疫组化SP法检测摘除卵巢及补充外源性17-β雌二醇后的不同时间大鼠垂体中Bcl-2和Bax表达的变化。结果显示:假去卵巢组(SHAM)Bcl-2和Bax的表达在不同给药时间无显著变化(P>0.05);同时间去卵巢(OVX)组与SHAM、去卵巢并注射17-β雌二醇组(OVX+E2)相比,差异均显著(P<0.05);去卵巢给药后6周,OVX组垂体内Bcl-2的表达与之前相比有所增加,而Bax则减少,给药后8周,各组与6周后相比无显著差异(P>0.05);同组Bcl-2的表达随时间逐渐减少,4周后最少,Bax的表达则逐渐增加,4周后达到该组的峰值。结果表明,雌激素在垂体的结构维持和功能发挥中起一定的调节作用。

NF270截留17α-乙炔基雌二醇过程

研究了操作压力、电解质及pH等因素对聚酰胺复合纳滤膜组件NF270截留水溶液中100μg/L 17α-乙炔基雌二醇(EE2)过程的影响,同时考察了NF270对葡萄糖配水中100μg/L EE2的截留情况.结果表明:NF270能实现对微量甾体雌激素EE2的有效截留;截留初始阶段,EE2在膜面的吸附作用增强了NF270的截留效能,组件运行6 h后膜截留性能稳定.出水ρ(EE2)随着操作压力的增大略有增大,当操作压力为0.5 MPa时,出水ρ(EE2)为31.09μg/L.加入MgSO4和CaCl2等电解质,截留率略有提高,出水ρ(EE2)为27.10μg/L.酸性条件对NF270截留EE2影响较小,当pH为11时EE2稳定截留率为88.81%,比中性条件高19.91%.0.5 MPa条件下NF270对葡萄糖配水中EE2截留效果明显提高,出水ρ(EE2)仅为11.96μg/L.

膀胱移行细胞癌E2F3、miR-17-5p、miR-20a的表达及相关性分析

目的检测E2F3、miR-17-5p、miR-20a在膀胱癌中的表达情况,分析E2F3与miR-17-5p、miR-20a之间是否存在关联性。方法荧光定量RT-PCR法检测不同病理分级膀胱移行细胞癌组织和细胞系5637、T24中miR-17-5p、miR-20a和E2F3基因的表达,Western blot检测E2F3蛋白的表达。结果与正常膀胱黏膜比较,膀胱移行细胞癌组织及5637、T24细胞系中E2F3、miR-17-5p和miR-20a均高表达(P<0.05)。E2F3表达随着病理分级的升高逐步增多,miR-20a表达随病理分级的升高有降低趋势。5637细胞系相对T24细胞系高表达E2F3(P<0.05)。结论膀胱移行细胞癌中miR-17-5p、miR-20a和E2F3均高表达,miR-20a和miR-17-5p的表达与E2F3的增高密切相关。

Neuropilin-1在子宫内膜癌细胞系中的表达及17β雌二醇对其表达的调控及意义

目的:探讨神经纤毛蛋白(NRP-1)在子宫内膜癌细胞系中的表达及17β雌二醇(17β-E2)对其表达的调控。方法:采用RT-PCR法及Western blot法检测NRP-1在子宫内膜癌HEC-1A及Ishikawa细胞系中的表达;荧光定量PCR法检测17β-E2对HEC-1A及Ishikawa细胞系中NRP-1 mRNA表达的调控;Western blot法检测Ishikawa细胞中NRP-1表达的变化。结果:HEC-1A及Ishikawa细胞中NRP-1 mRNA及蛋白水平均为阳性表达。17β-E2对Ishikawa细胞系中NRP-1 mRNA表达的影响显著强于HEC-1A,且17β-E2浓度为2×10-7mol/L,作用时间48h时对NRP-1 mRNA表达的促进作用最明显。17β-E2对Ishikawa细胞中NRP-1蛋白表达呈时间依赖性。结论:NRP-1表达于高表达雌激素受体(ER)细胞系Ishikawa及低表达ER细胞系HEC-1A中,且2×10-7mol/l E2作用48h能明显促进Ishikawa细胞系中NRP-1的表达,提示NRP-1可能与子宫内膜癌的发生发展密切相关。

17β-雌二醇对体外培养牛输卵上皮细胞中环氧合酶-2的表达影响

目的:阐明17β--雌二醇(17β—estradiol,E2)对体外培养的奶牛输卵管上皮细胞(bovine oviduct epithelialcells,BOECs)中环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)基因表达的影响。方法:分离培养BOECs,建立BOECs培养体系作为体外试验模型,分别在培养液中添加10 pg/mL的E2分别培养2h、4h、6h,提取细胞总RNA及细胞总蛋白,利用实时荧光定量PCR,Western blot等实验技术检测COX-2 mRNA和蛋白的表达量。结果:输卵管上皮细胞的COX-2基因表达随添加E2培养液增加2h、4h明显高于对照组。结论:试验数据显示在体外培养的BOECs中E2影响牛输卵上皮细胞中COX-2的表达。

17β-雌二醇对H_2O_2诱导视网膜神经细胞死亡的作用

目的 研究 17β 雌二醇 (βE2 )对培养的视网膜神经细胞的保护作用。方法 应用视网膜神经细胞培养的方法 ,观察H2 O2 、βE2以及雌激素受体阻断剂它莫西芬对视网膜神经细胞的作用。 结果 H2 O2 能显著降低培养的视网膜神经细胞的存活率 ,表现为剂量、时间依赖型。用 βE2预培养细胞 30min后 ,再加H2 O2 继续培养 2 4h细胞存活率明显上升 (P <0 .0 5 )。用它莫西芬预培养细胞后 ,重复上述实验 ,发现它莫西芬不能阻断 βE2的作用。免疫细胞化学鉴定原代细胞中 99%以上的细胞为雌激素受体阴性。结论 H2 O2 能导致培养的视网膜神经细胞的死亡。βE2能降低H2 O2 的毒性作用。它莫西芬不能阻断βE2的保护作用 ,培养的光受体细胞为雌激素受体阴性。提示

FSH和17β-雌二醇联合作用对CyclinD1mRNA和CyclinE1mRNA表达的影响

为了确定FSH和雌激素联合作用对培养条件下未成熟仔猪睾丸支持细胞中Cyclin D1mRNA和Cyclin E1mRNA表达的影响。以培养的仔猪睾丸支持细胞为研究材料,通过添加各种信号通路的抑制剂,应用实时荧光定量PCR检测Cyclin D1mRNA和Cyclin E1mRNA的相对表达量。FSH(50ng·mL-1)和17β-雌二醇(10-9 mol.L-1)联合作用时对Cyclin D1mRNA和Cyclin E1mRNA表达的影响与FSH或17β-雌二醇(10-9 mol.L-1)单独作用相比无显著影响(P>0.05);环磷酸腺苷抑制剂(Rp-cAMP)、L-Ca2+离子通道抑制剂(Verapamil)和ERK1/2抑制剂(U0126)单独作用时对Cyclin D1mRNA和Cyclin E1mRNA表达与空白对照组相比无显著影响(P>0.05),但以剂量依赖的方式抑制了FSH(50ng·mL-1)与17β-雌二醇(10-9 mol.L-1)联合作用对Cyclin D1mRNA和Cyc-lin E1mRNA的表达(P<0.05)。FSH和17β-雌二醇联合作用时通过cAMP、Ca2+内流和ERK1/2途径参与了FSH和17β-雌二醇对Cyclin D1mRNA和Cyclin E1mRNA在细胞中的表达。

17β-雌二醇对大鼠局灶性脑缺血bcl-2、bax表达及细胞凋亡的影响

目的 观察雌激素对大鼠局灶性脑缺血皮层bcl 2、bax表达及凋亡的影响。方法 36只SD雌性大鼠分成 3组 :2h组、2 4h组、48h组 ,每组再分成假手术组 ,卵巢切除组 (OVX组 ) ,17β 雌二醇治疗的卵巢切除组 (OVX +E2 组 )。利用免疫组化、原位末端标记方法观察三组大鼠永久局灶性脑缺血皮层bcl 2、bax的表达和细胞凋亡情况。结果 缺血 2h ,很少出现明显的凋亡细胞 ,但随缺血时间延长逐渐增多 ,缺血 2 4h、48h ,OVX +E2 组凋亡细胞较OVX组明显减少 ;bcl 2在各时间点皆有表达 ,随缺血时间延长表达逐渐降低 ,OVX +E2 组bcl 2表达较同时间点OVX组、假手术组高 ;随缺血时间延长 ,bax蛋白表达逐渐增多 ,OVX +E2 组bax表达较同时间点OVX组、假手术组降低。结论 脑缺血后雌激素促进bcl 2表达 ,抑制bax表达 ,减少细胞凋亡。可能是其脑保护作用的机制之一。