应用流式细胞术检测17β-雌二醇对H_2O_2诱导的视网膜神经细胞凋亡的保护作用

目的用流式细胞技术(FACS)检测H2O2诱导的视网膜神经细胞凋亡以及17β-雌二醇(βE2)对细胞的保护作用。方法取新生24 h内的SD大鼠进行视网膜神经细胞的原代培养,待细胞培养4-5 d,经不同因素处理后,用MTT法检测细胞存活率,用FACS法检测细胞凋亡率。结果200μmol/L的H2O2能有效诱导视网膜神经细胞凋亡;低浓度的H2O2不能诱导细胞凋亡,但高浓度的H2O2诱导细胞凋亡的同时也导致了正常细胞比率的锐减;10μmol/L的βE2能有效对抗H2O2诱导的视网膜神经细胞凋亡;低浓度的βE2对细胞未表现出保护作用,高浓度的βE2对细胞反而表现出毒性作用。结论一定浓度的βE2在一定范围内能对抗H2O2诱导的视网膜神经细胞凋亡,表现对神经细胞保护的作用。

βE2上调Nrf2通路抵抗光诱导的大鼠视网膜功能损伤

目的探讨17β-雌二醇(17β-estradiol,βE2)是否可以激活NF-E2相关因子2(NF-E2-related factor 2, Nrf2)通路抵抗光损诱导的视网膜功能下调。方法雌性SD大鼠去势2周,分为对照组(Control)、光损组(LD)、生理盐水组、生理盐水光损组(Saline-LD)、βE2组及βE2光损组(βE2-LD)。光损伤干预为,将大鼠暗适应18 h后暴露于8 000-lux强度的荧光下12 h,暗恢复1 d,各组进行相应处理后,行视网膜电图(electroretinogram, ERG)、免疫荧光、Real-time PCR及免疫组化检测。结果 ERG结果显示,LD组ERG均较Control组降低(P<0.05)。光损伤后活性氧(ROS)升高,抗氧化基因Sod1、Sod2、Cat、Glrx1、Glrx2、Txn1、Txn2 mRNA降低(P<0.05)。βE2-LD组较Saline-LD的ROS降低,Nrf2蛋白及抗氧化基因水平升高,ERG得到一定程度的恢复(P<0.05)。结论βE2可恢复大鼠视网膜的功能,其机制可能与上调Nrf2及抗氧化基因有关。