^(131)Ⅰ-17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素对人乳腺癌细胞生长的抑制作用

目的探讨^(131)I-17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-AAG)对人乳腺癌细胞生长的影响及其相关机制。方法采用过氧化氢标记法制备^(131)I-17-AAG。细胞杀伤实验分为5组:二甲基亚砜(DMSO)对照(A)组,Na^(131)I 370 kBq(B)组,17-AAG 2.5 mg/L(C)组,^(131)I-17-AAG 370 kBq(D)组,^(131)I-17-AAG 370 kBq+17-AAG 2.5 mg/L(E)组。用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各种药物对人乳腺癌细胞 MCF-7的生长抑制作用,流式细胞术分析细胞凋亡及细胞周期变化,RT-PCR 检测药物处理前后 MCF-7细胞中 Akt2基因的 mRNA 表达情况。结果 ^(131)I-17-AAG 的标记率为83%,放化纯为96.6%,比活度为1.48×10~5MBq/μmol。各组药物对细胞的杀伤呈时间效应,随着时间的延长,细胞的抑制率都呈明显上升趋势,尤以 E 组趋势明显。A～E组药物作用48 h 后,通过亚 G1峰检测 MCF-7细胞凋亡率分别为(1.54±0.13)%,(5.72±1.05)%,(12.97±1.44)%,(20.65±1.36)%,(35.39±4.15)%,各组细胞凋亡率差异有统计学意义(P 均<0.05)。C 组,D 组及 E 组Akt2基因的 mRNA 表达均比 A 组降低,其中 E 组降低尤为明显。结论 ^(131)I-17AAG 能够抑制 MCF-7细胞的生长并促进其凋亡,且能有效抑制 Akt2基因的 mRNA 表达,和17-AAG 联合应用能够增强肿瘤细胞对放疗的敏感性。

17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素诱导鼻咽癌细胞凋亡的实验研究

目的:研究17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-allylamino-17-demethoxygeldanamycin,17-AAG)对人鼻咽癌细胞株(Human nasopharyngeal carcinoma cell line,HNE1)增殖抑制和诱导凋亡的作用,探讨17-AAG在鼻咽癌临床治疗中的意义。方法:采用噻唑蓝(Thiazolyl blue,MTT)检测17-AAG对HNE1细胞的增殖抑制作用,流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化,Hoechst33528染色观察细胞的凋亡形态学变化并进行核碎片计数。结果:17-AAG抑制HNE1的增殖,诱导了细胞的凋亡,抑制作用具有浓度和时间依赖性。结论:17-AAG可诱导HNE1的凋亡,研究结果对药物治疗鼻咽癌有一定的临床指导意义。

17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素对乳腺癌细胞的杀伤作用

目的:对一种热休克蛋白90抑制剂即17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-AAG)对人乳腺癌细胞生长的影响及相关机制进行初步探讨。方法:MTT法检测药物对人乳腺癌细胞SKB r3的生长抑制作用;流式细胞术分析细胞凋亡及细胞周期变化;免疫组化法检测药物处理前后SKB r3细胞中HER2的表达变化情况。结果:17-AAG对人乳腺癌细胞株SKB r3生长有抑制作用,随着用药浓度的增加,抑制作用明显增强,呈明显的剂量依赖性,其IC50浓度为3.09μg/m l。SKB r3细胞经17-AAG处理48 h后,流式细胞仪分析可见在0、0.625、1.250、2.500、5.000和10.000μg/m l浓度下,SKB r3细胞的凋亡率分别为(1.03±0.08)%、(3.68±0.67)%、(7.06±1.12)%、(11.23±1.36)%、(20.32±1.98)%和(31.65±2.96)%;G0/Gl期细胞分别为58.61%、54.34%、49.55%、43.73%、35.52%和27.46%;S期细胞分别为:29.57%、25.21%、19.65%、22.98%、19.71%和15.46%;G2/M期细胞分别为11.82%、20.45%、30.18%、33.29%、44.77%和57.08%;同时17-AAG处理后的SKB r3细胞人类表皮生长因子受体2(HER2)表达明显减少。结论:17-AAG能够抑制人乳腺癌细胞SKB r3的生长并促进其凋亡,提示17-AAG是一种很有前景的抗肿瘤药物。

^(131)Ⅰ标记热休克蛋白90抑制剂17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素的方法学研究

目的:建立131I标记热休克蛋白90抑制剂17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-AAG)的方法,探讨其标记条件。方法:采用放射性碘标记氯胺-T法标记17-AAG,并研究其在ICR正常小鼠体内的生物分布。结果:131I氯胺-T法标记17-AAG的最佳条件为:17-AAG乙醇溶液40μl(含17-AAG 5μg),0.5 mol.L-1磷酸盐缓冲液50μl(pH7.5),Na131I溶液20μl,氯胺-T30μg.(15μl)-1(用pH7.5的0.05 mo.lL-1PB溶解),25℃反应50 s,偏重亚硫酸钠40μg.(20μl)-1(用pH7.5的0.05 mo.lL-1PB溶解)中止反应。标记率约为53.1%,经乙酸乙酯纯化后所得标记物的放射化学纯度>90%;其生理盐水溶液4℃放置5 d,放射化学纯度大于90%。小鼠尾静脉注射131I-17-AAG后0.5 h131I-17-AAG在胆囊达到高峰(369.44±147.81)%ID.g-1,肝脏中仅有(2.23±0.50)%ID.g-1,说明对肝脏毒性小。结论:热休克蛋白90抑制剂17-AAG的标记方法操作简便,反应时间短。

17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素对鼻咽癌细胞VEGF和Survivin表达的影响

目的探讨17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-AAG)对人鼻咽癌细胞(HNE1)的影响。方法采用流式细胞技术检测不同浓度(17-AAG)、不同时间处理后HNE1细胞凋亡情况,组织免疫细胞技术检测药物处理后对VEGF、Survivin蛋白表达的影响。结果 17-AAG可以诱导人鼻咽癌细胞的凋亡,且这种作用具有时间和计量依赖性,且可抑制细胞中VEGF、Survivin蛋白的表达。结论热休克蛋白抑制剂17-AAG具有诱导鼻咽癌细胞凋亡的作用,对鼻咽癌的临床治疗具有一定的指导意义。

^(131)I-17-丙烯胺基-17-脱甲基格尔德霉素毒副作用的初步观察

目的观察131I-17-丙烯胺基-17-脱甲基格尔德霉素(131I-17-AAG)治疗VX2肝癌移植瘤模型的骨髓及肝脏毒副作用。方法16只新西兰白兔,制成VX2荷肝癌模型后,按完全随机原则分为2组,1组(治疗组)8只,10mCi131I-17-AAG耳缘静脉注射;2组(对照组)8只,为未经治疗的荷瘤兔,1、2组荷瘤兔均分别于第1、2周耳缘静脉采血,进行血常规(白细胞、红细胞、血红蛋白、血小板)及酶学(谷草转氨酶、谷丙转氨酶、碱性磷酸酶、谷氨酰转酞酶)检查。结果2周时白细胞、红细胞和血红蛋白无显著差异(P>0.05),血小板、ALT、AST均有显著差异(P<0.05),碱性磷酸酶、谷氨酰转移酶无显著差异(P>0.05)。结论131I-17-丙烯胺基17脱甲基格尔德霉素(131I-17-AAG)对骨髓造血干细胞及肝功能各项指标有不同程度的影响,且随时间逐步得到恢复。

17-丙烯胺-17去甲氧格尔德霉素对大鼠嗜铬细胞瘤细胞凋亡及血管内皮生长因子表达的影响

目的探讨热休克蛋白90(HSP90)抑制剂17-丙烯胺-17去甲氧格尔德霉素(17-AAG)对大鼠嗜铬细胞瘤细胞系PC12细胞生长及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法将实验组PC12细胞分成两组:实验一组分别加入不同终浓度(0.005、0.025、0.05、0.1、0.25、0.5、1.0、2.0μmol/L)17-AAG培养液;实验二组分别加入150μg/L VEGF(VEGF组)、0.1μmol/L17-AAG(17-AAG组)、0.1μmol/L17-AAG+150μg/L VEGF(17-AAG+VEGF组)培养液。另设DMSO组(阴性对照组)和空白对照组。采用MTT法检测细胞存活率;Wrights-Giemsa染色观察细胞形态变化;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blotting检测细胞中VEGF-165蛋白的表达。结果 17-AAG呈时间、剂量依赖性抑制PC12细胞增殖(P<0.05);24 h半数抑制浓度(IC50)为0.1μmol/L。0.1μmol/L 17-AAG作用于PC12细胞6、12、24、48 h的细胞凋亡率均明显高于空白对照组(P<0.01)。0.1μmol/L 17-AAG作用于PC12细胞6、12、24、48 h,VEGF-165蛋白表达逐渐降低;各时点VEGF-165蛋白表达量与阴性对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 HSP90抑制剂17-AAG能抑制PC12细胞增殖,诱导细胞凋亡,抑制VEGF蛋白表达。

17-烯丙胺基-17-去甲氧基格尔德霉素对人绒毛膜癌JAR细胞系细胞周期和凋亡的影响及其相关机制

目的探讨热休克蛋白90(HSP90)抑制剂17-烯丙胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-AAG)对人绒毛膜癌JAR细胞系细胞周期和凋亡的影响及其相关机制。方法体外培养人绒毛膜癌JAR细胞系,经不同浓度的17-AAG作用24 h后,采用TUNEL细胞凋亡法及Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡;流式细胞术检测细胞周期;Real-time PCR法和Western blotting法检测血管内皮生长因子(VEGF)、cyclinD1、cyclin A1和Caspase-3在mRNA和蛋白水平的表达情况。结果 17-AAG对JAR细胞生长具有明显的抑制作用,并存在浓度依赖性。各组细胞发生G_2期阻滞及明显凋亡;5、10、20 mg/L 17-AAG作用24 h后,各组细胞增殖相关基因cyclinD1mRNA及蛋白表达水平相对于0 mg/L 17-AAG处理组(对照组)均下调,VEGF蛋白表达水平相对于0 mg/L 17-AAG处理组(对照组)下调,且下调程度与处理浓度成正比,而凋亡相关基因Caspase-3的mRNA未出现明显上调,但其在蛋白表达水平上调。结论 17-AAG能够抑制JAR细胞增殖活力,诱导细胞凋亡,17-AAG可能通过下调VEGF的表达,产生抗肿瘤血管新生作用;可能通过下调cyclinD1使细胞周期发生G_2期阻滞;且可能通过上调Caspase-3诱导细胞凋亡。

17-烯丙氨基格尔德霉素对人乳腺癌细胞基质金属蛋白酶表达调控作用的研究

目的观察17-烯丙氨基格尔德霉素(17-AAG)对人乳腺癌MCF-7细胞基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9 mRNA及其表达的调控作用。方法体外培养人乳腺癌MCF-7细胞,分别给予不同剂量及不同作用时间的17-AAG进行作用,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测细胞增殖能力;反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和蛋白印迹(Western Blotting)法检测MCF-7细胞的MMP-2、MMP-9 mRNA和蛋白表达水平。结果 (1)10.000、5.000、2.500、1.250、0.625、0.310、0.165 mg/L 17-AAG及空白对照组培养24 h和48 h时A值比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。体外作用24 h后IC50均值为34.61,体外作用48 h的IC50均值为6.22。(2)RT-PCR法检测不同浓度17-AAG对MCF-7细胞MMP-2、MMP-9 mRNA表达的影响,结果显示,对照组及1.00 mg/L组、2.00 mg/L组、3.00 mg/L组、5.00 mg/L组MMP-2/β-actin和MMP-9/β-actin比较,差异均有统计学意义(P<0.05);其中各组间两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)Western Blotting法检测不同浓度17-AAG对MCF-7细胞MMP-2、MMP-9表达的影响,结果显示,对照组及1.00 mg/L组、2.00 mg/L组、3.00mg/L组、5.00 mg/L组MMP-2/β-actin和MMP-9/β-actin比较,差异均有统计学意义(P<0.05);其中各组间两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 17-AAG对人乳腺癌MCF-7细胞的增殖具有明显的抑制作用,并能抑制MMP-2和MMP-9的表达,具有剂量依赖性。

反相HPLC法测定大鼠血浆中17-烯丙胺基-17-脱甲基格尔德霉素及其代谢产物17-氨基-17-脱甲基格尔德霉素

目的:建立大鼠血浆中17-烯丙胺基-17-脱甲基格尔德雷素(17AAG)和17-氨基-17-脱甲基格尔德雷素(17AG)的反相高效液相色谱分析方法,用于17AAG 及其主要代谢产物17AG 的临床前药代动力学研究。方法:以α-萘酚为内标,用乙酸乙酯将17AAG 和17AG 从大鼠血浆中萃取分离吹干后,流动相复溶,HPLC 分析。色谱柱为日产迪玛 Inertsil-ODS 3色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-25 mmol·L^(-1)磷酸盐缓冲液(含三乙胺10 mmol·L^(-1))(55:45,pH=3.0),流速1 mL·min^(-1),紫外检测波长313 nm。结果:17AAG、17AG 及内标α-萘酚与内源性干扰分离良好,17AAG 和17AG 在10.0-16000.0μg·L^(-1)浓度范围内呈良好线性关系,相关系数分别为0.9992和0.9987,平均萃取回收率均大于80%,内标回收率为85%。2种组分的最低定量限为10μg·L^(-1)。17AAG 日内 RSD 为2.9%～11.3%,日间 RSD 为6.5%～18.5%;17AG 日内RSD 为3.0%～3.8%,日间 RSD 为5.9%～16.4%。大鼠舌下静脉推注17AAG 15 mg·kg^(-1)后,其主要药动学参数为:CL=21.14 mL·min^(-1)·kg^(-1),AUC=206.5μg·min·mL^(-1),t_(1/2α)=24.82 min,t_(1/2β)=116.20 min,V\-c=1046.3 mL·kg^(-1)。结论:本法可满足17AAG 临床前药代动力学研究的要求。

电喷雾离子阱质谱分析17-烯丙胺基-17-脱甲基格尔德霉素及其代谢物

目的旨在确立17-烯丙胺基-17-脱甲基格尔德霉素(17AAG)及其代谢物的质谱分析条件。方法采用电喷雾离子阱质谱,同时用液质联用方法,对17AAG及其主要活性代谢产物17-氨基-17-脱甲基格尔德霉素(17AG)进行了探讨,同时分离并考察了其在大鼠胆汁中的代谢物及其一般裂解规律。结果在电喷雾负离子模式下,所产生的准分子离子峰均为[M-H]-峰,在MS2质谱中均产生失去43u的碎片峰,在MS3质谱中均产生失去98u,18u的碎片峰。结论这些裂解特征可用于该类化合物的结构鉴定及代谢物的分析。

格尔德霉素衍生物17-AAG对缺氧宫颈癌细胞凋亡的影响

目的:观察格尔德霉素衍生物17-AAG对氯化钴化学缺氧诱导的宫颈癌细胞凋亡的影响,并简单探讨可能的机制。方法:用含200μmol/LCoCl2的无血清RPMI 1640培养基模拟宫颈癌细胞缺氧微环境,West-ern Blot法检测缺氧诱导因子HIF-1α及其下游靶分子VEGF蛋白的表达,DAPI染色检测细胞的凋亡情况。结果:缺氧可诱导HIF-1α、VEGF蛋白的表达上调;但这种上调可被17-AAG所逆转,从而使宫颈癌细胞对缺氧的耐受能力明显降低,凋亡增加。结论:17-AAG通过对HIF-1α信号的干扰而具有一定的抗瘤活性。

^131I-17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素对荷MCF-7乳腺癌模型的抑瘤作用

目的观察^131I-17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素（17-AAG）对MCF-7乳腺癌荷瘤裸鼠模型肿瘤生长的抑制作用。方法采用过氧化氢标记法制备^131I-17-AAG；将30只荷瘤裸鼠随机分成3组：^131I-17-AAG治疗组，二甲基亚砜（DMSO）对照组和单纯Na^131I治疗组。尾静脉注射相应试剂后，观察28d，比较肿瘤的体积，计算抑瘤率；Western blot检测肿瘤组织Akt2蛋白表达情况；观察肿瘤组织病理变化；TUNEL法检测肿瘤组织细胞凋亡。结果给药28d，肿瘤体积依序分别为（63．75±8．62）、（96．79±14．75）、（83．12±10．89）mm^3；^131I-17-AAG组与DMSO对照组和^131I组两组间比较，差异有统计学意义（F=23．13，20．58，P〈0．01）；DMSO对照组和^131I组比较，差异无统计学意义（F=3．43，P〉0．05）；^131I-17-AAG治疗组Akt2蛋白表达较对照组明显降低。结论^131I-17-AAG能有效抑制裸鼠MCF-7乳腺癌的生长，对治疗人MCF-7乳腺癌有较好实践意义。

17-AAG聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒的制备及抗肿瘤活性研究

目的制备一种新型17-丙烯氨基-17-去甲氧基格尔德霉素聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒(17-allylamino-17-demethoxygeldanamycin poly-butylcyanoacrylate nanoparticles,17-AAG-PBCA-NPs)。方法采用界面聚合法制备17-AAG-PBCA-NPs;采用正交实验筛选最优处方;采用纳米粒度仪、透射电镜、扫描电镜对17-AAG-PBCA-NPs进行表征和鉴定;采用动态透析法测定体外释放药物情况;采用四甲基偶氮唑盐〔3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT〕考察17-AAG-PBCA-NPs对5种人肿瘤细胞株增生的抑制作用;以荷S180小鼠为模型,考察17-AAG-PBCA-NPs的抗肿瘤活性。结果界面聚合法制备的17-AAG-PBCA-NPs包封率大于90%,粒径为(180.5±12.0)nm,Zata电位为(-28.38±0.81)m V,表面形态规则均匀;17-AAGPBCA-NPs呈时间依赖性地抑制肿瘤细胞株增生,动物实验表明,17-AAG-PBCA-NPs抗肿瘤活性比17-AAG强,毒性比17-AAG低。结论采用界面聚合法可制备得到17-AAG-PBCA-NPs,制备方法简单、重现性好、包封率高,并显示了较好的抗肿瘤活性。

17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素增强慢性粒细胞白血病细胞对伊马替尼敏感性的机制研究

目的探索伊马替尼(IM)联合使用17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-AAG)增加慢性粒细胞白血病(CML)细胞株K562和K562A02凋亡率的机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝法观察细胞增殖抑制率,Annexin V/PI双染色法检测细胞凋亡率,逆转录-聚合酶链反应法检测Bcr-abl、MDR1、Bcl-2 mRNA的表达及Western blot法检测Bcr-abl、p-gp、Bcl-2蛋白的表达。结果0.31μg·mL-1伊马替尼联合1.25μg·mL-117-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素分别作用于K562和K562A02细胞48 h,增殖抑制率分别为(70.78±1.01)%和(39.27±1.52)%,凋亡率为(48.74±2.51)%和(45.0±0.4)%。2.5μg·mL-1伊马替尼联合10μg·mL-117-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素作用于K562A02细胞48 h,增殖抑制率达(65.63±0.93)%。逆转录-多聚酶链反应和Western blot结果显示,联合用药后K562细胞的Bcr-abl和Bcl-2基因显著降低,MDR1呈弱表达,无明显变化。而K562A02细胞中,Bcr-abl、Bcl-2和MDR1基因的表达均有明显下调(P<0.05)。结论伊马替尼联合17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素可有效抑制K562和K562A02细胞增殖和诱导凋亡,两者联合应用具有克服伊马替尼耐药的作用。

17-AAG通过抑制Erk信号通路增强奥沙利铂诱导结肠癌细胞凋亡

目的研究17-AAG与奥沙利铂是否存在协同效应,并探讨PI3K/Akt、Erk信号通路在奥沙利铂联合17-AAG诱导人结肠癌细胞凋亡过程中的作用。方法四甲基偶氮唑盐比色实验(MTT法)检测17-AAG、奥沙利铂对细胞增殖的抑制作用;流式细胞术分析细胞凋亡情况;Western blot法检测相关蛋白的表达水平。结果 17-AAG能抑制RKO细胞的增殖;17-AAG联合奥沙利铂作用于RKO细胞24h后,G2/M期细胞比例及凋亡率明显增加;奥沙利铂抑制p-Akt、p-Erk的活化,上调Bax,下调Bcl-2蛋白表达,活化裂解Caspase-3,联合使用17-AAG后可进一步增强上述作用,但对PI3K/Akt信号通路影响不大。结论本实验表明17-AAG具有增强奥沙利铂诱导结肠癌RKO细胞凋亡的作用,同时也说明17-AAG与奥沙利铂存在协同效应;17-AAG上调Bax,下调Bcl-2蛋白表达及增强奥沙利铂对Erk信号通路的抑制作用可能是其促进凋亡的重要机制之一。

HSP90抑制剂17-DMAG对急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞株增殖和凋亡的影响

目的:探讨热休克蛋白90(HSP90)抑制剂17-二甲胺乙胺基-17去甲氧基格尔德霉素(17-DMAG)对急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞的增殖及凋亡的影响。方法:收集Jurkat细胞,应用HSP90抑制剂17-DMAG作用于细胞株,通过半定量PCR检测HSP90的基因表达,WST技术检测17-DMAG对细胞增殖的影响,Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡。结果:不同浓度17-DMAG作用于Jurkat细胞48 h后,HSP90 mRNA表达明显减少,且呈剂量依赖性(r=0.9530,P<0.01);17-DMAG处理Jurkat细胞48 h的IC50为3.17μmol/L,作用于Jurkat细胞后抑制Jurkat细胞增殖(r=0.9903,P<0.01),促进Jurkat细胞凋亡,且呈剂量依赖性(r=0.9876,P<0.01)。结论:HSP90抑制剂17-DMAG能够抑制急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞株的增殖并诱导其凋亡。

^(131)I-17-AAG治疗VX2兔前后IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ的变化

目的:本文通过测定131I-17-丙烯胺基-17-脱甲基格尔德霉素(131I-17-AAG)治疗VX2肝癌兔模型前后血清白细胞介素2、4、10和IFN-γ的变化探讨对其自身免疫功能的影响。方法:以10mCi131I-17-AAG耳缘静脉注射治疗后1、2周,用放射免疫分析测定8例VX2肝癌兔模型血清中IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ水平,8例未经治疗的VX2肝癌兔模型作为对照。结果:IL-2、IFN-γ在1周时有显著性差异(P<0.05),2周时无显著性差异(P>0.05),IL-4、IL-10在1、2周均无显著性差异(P>0.05)。结论:131I-17-AAG治疗VX2肝癌兔模型对细胞免疫有暂时影响,但对体液免疫无影响,总体上说对VX2肝癌兔模型的治疗是安全的。

缺氧条件下Hsp90抑制剂17-AAG对RPE细胞整联蛋白连接激酶表达的影响

目的:研究热休克蛋白(heat shock protein 90,Hsp90)抑制剂17-AAG对缺氧诱导的视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)细胞整联蛋白连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)表达的影响。方法:利用200μmol/L氯化钴(cobalt chloride,CoCl2)建立体外RPE细胞的化学缺氧模型。不同浓度的Hsp90抑制剂17-AAG预处理RPE细胞1h后给予12h缺氧处理。实验分为缺氧对照组、二甲基亚砜(DMSO)对照组和17-AAG预处理组。其中17-AAG预处理组根据浓度不同又分为6组:0.01,0.10,0.50,1.00,5.00,10.00μmol/L。应用RT-PCR和Western blot方法检测ILK表达变化情况。结果:缺氧对照组、DMSO对照组和17-AAG预处理组ILK mRNA与内参β-actin mRNA光密度比值分别为1.32±0.04,1.29±0.03,0.93±0.06,0.70±0.05,0.53±0.03,0.44±0.04,0.32±0.04,0.30±0.03;ILK蛋白与内参β-actin蛋白光密度比值分别为2.16±0.04,2.13±0.04,1.65±0.04,1.13±0.05,0.74±0.03,0.41±0.06,0.35±0.04,0.35±0.03。与缺氧对照组比较,17-AAG预处理组ILK mRNA和蛋白的表达明显降低(P<0.05),呈浓度依赖性。结论:Hsp90抑制剂17-AAG能够降低缺氧条件下RPE细胞ILK的表达。

17-烯丙胺基-17-去甲氧基格尔德霉素对NCI-N87胃癌细胞增殖侵袭与血管生成因子表达的影响

目的探讨17-烯丙胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-AAG)对NCI-N87胃癌细胞增殖和血管生成因子的影响。方法将NCI-N87胃癌细胞分为对照组和低、中、高剂量实验组。对照组加入含等量磷酸盐缓冲溶液的DMEM培养基进行培养;低、中、高剂量实验组分别给予含5,10和20 nmol·L^(-1)17-AAG的DMEM培养基进行培养。用噻唑蓝法检测细胞增殖率,用实时荧光定量聚合酶链反应检测缺氧诱导因子1α(HIF-1α)mRNA的表达水平,用蛋白质印迹法检测血管内皮生长因子A(VEGF-A)和内皮素1(ET-1)的表达水平。结果低、中、高剂量实验组和对照组在干预48 h后的增殖率分别为(75.56±0.57)%,(79.99±0.81)%,(66.12±1.54)%和(99.70±1.25)%。17-AAG对NCI-N87胃癌细胞的增殖抑制具有明显的剂量和时间依赖性,差异均有统计学意义(均P<0.05)。低、高剂量实验组和对照组的HIF-1αmRNA表达相对水平分别为0.77±0.27,0.29±0.21和1.03±0.05,Transwell穿越细胞数分别为(447.69±124.33),(197.59±107.98)和(625.25±98.37)个,VEGF-A蛋白相对表达量分别为0.63±0.21,0.22±0.10和1.01±0.12,ET-1蛋白相对表达量分别为0.71±0.27,0.16±0.09和1.03±0.09。低、高剂量实验组的上述指标与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论17-AAG通过下调HIF-1α的表达,以及抑制VEGF-A和ET-1的表达,从而达到抑制NCI-N87胃癌细胞增殖的作用。