17-丙烯胺-17-去甲氧格尔德霉素对大鼠嗜铬细胞瘤裸鼠移植瘤的抑制作用

目的通过观察热休克蛋白90(HSP90)抑制剂17-丙烯胺-17-去甲氧格尔德霉素(17-AAG)对大鼠嗜铬细胞瘤裸鼠移植瘤生长的影响,探讨17-AAG对大鼠嗜铬细胞瘤肿瘤生长和血管生成的抑制作用。方法用大鼠嗜铬细胞瘤细胞PC12接种于裸鼠皮下,建立移植瘤模型,15d后将荷瘤裸鼠随机分为2组,每组12只,分别为实验组(腹腔注射17-AAG 40mg/kg)和对照组(腹腔注射生理盐水10mL/kg),用药3周。第4周后测量裸鼠移植瘤的体积变化以及裸鼠的生存时间。采用免疫组化方法检测肿瘤组织中HSP90、血管内皮生长因子(VEGF)的表达,采用Western blotting法检测肿瘤组织中HSP90、VEGF的表达。结果第4周时,移植瘤体积的对照组和实验组分别为(5 070.13±630.42)mm3和(2 218.80±336.29)mm3,两组移植瘤体积存在显著性差异(P<0.05);平均生存时间对照组和实验组分别为(26.0±5.1)、(42.7±7.5)d,用Kaplan-Meier、Log-Rank方法分析两组的生存函数的差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组化显示HSP90在对照组中呈高表达(10/12,83.3%),在实验组中呈低表达(4/12,33.3%);VEGF在对照组中呈高表达(11/12,91.7%),在实验组中呈低表达(4/12,33.3%);实验组肿瘤组织的HSP90、VEGF表达明显低于对照组(P<0.05)。Western blotting法也显示两种蛋白在实验组上的表达明显低于对照组(P<0.01)。结论 17-AAG对大鼠嗜铬细胞瘤裸鼠移植瘤有明显抑制作用,并可降低肿瘤组织中HSP90和VEGF的表达。

^(131)Ⅰ-17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素对人乳腺癌细胞生长的抑制作用

目的探讨^(131)I-17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-AAG)对人乳腺癌细胞生长的影响及其相关机制。方法采用过氧化氢标记法制备^(131)I-17-AAG。细胞杀伤实验分为5组:二甲基亚砜(DMSO)对照(A)组,Na^(131)I 370 kBq(B)组,17-AAG 2.5 mg/L(C)组,^(131)I-17-AAG 370 kBq(D)组,^(131)I-17-AAG 370 kBq+17-AAG 2.5 mg/L(E)组。用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各种药物对人乳腺癌细胞 MCF-7的生长抑制作用,流式细胞术分析细胞凋亡及细胞周期变化,RT-PCR 检测药物处理前后 MCF-7细胞中 Akt2基因的 mRNA 表达情况。结果 ^(131)I-17-AAG 的标记率为83%,放化纯为96.6%,比活度为1.48×10~5MBq/μmol。各组药物对细胞的杀伤呈时间效应,随着时间的延长,细胞的抑制率都呈明显上升趋势,尤以 E 组趋势明显。A～E组药物作用48 h 后,通过亚 G1峰检测 MCF-7细胞凋亡率分别为(1.54±0.13)%,(5.72±1.05)%,(12.97±1.44)%,(20.65±1.36)%,(35.39±4.15)%,各组细胞凋亡率差异有统计学意义(P 均<0.05)。C 组,D 组及 E 组Akt2基因的 mRNA 表达均比 A 组降低,其中 E 组降低尤为明显。结论 ^(131)I-17AAG 能够抑制 MCF-7细胞的生长并促进其凋亡,且能有效抑制 Akt2基因的 mRNA 表达,和17-AAG 联合应用能够增强肿瘤细胞对放疗的敏感性。

17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素诱导鼻咽癌细胞凋亡的实验研究

目的:研究17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-allylamino-17-demethoxygeldanamycin,17-AAG)对人鼻咽癌细胞株(Human nasopharyngeal carcinoma cell line,HNE1)增殖抑制和诱导凋亡的作用,探讨17-AAG在鼻咽癌临床治疗中的意义。方法:采用噻唑蓝(Thiazolyl blue,MTT)检测17-AAG对HNE1细胞的增殖抑制作用,流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化,Hoechst33528染色观察细胞的凋亡形态学变化并进行核碎片计数。结果:17-AAG抑制HNE1的增殖,诱导了细胞的凋亡,抑制作用具有浓度和时间依赖性。结论:17-AAG可诱导HNE1的凋亡,研究结果对药物治疗鼻咽癌有一定的临床指导意义。

17-丙烯胺-17去甲氧格尔德霉素对大鼠嗜铬细胞瘤细胞凋亡及血管内皮生长因子表达的影响

目的探讨热休克蛋白90(HSP90)抑制剂17-丙烯胺-17去甲氧格尔德霉素(17-AAG)对大鼠嗜铬细胞瘤细胞系PC12细胞生长及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法将实验组PC12细胞分成两组:实验一组分别加入不同终浓度(0.005、0.025、0.05、0.1、0.25、0.5、1.0、2.0μmol/L)17-AAG培养液;实验二组分别加入150μg/L VEGF(VEGF组)、0.1μmol/L17-AAG(17-AAG组)、0.1μmol/L17-AAG+150μg/L VEGF(17-AAG+VEGF组)培养液。另设DMSO组(阴性对照组)和空白对照组。采用MTT法检测细胞存活率;Wrights-Giemsa染色观察细胞形态变化;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blotting检测细胞中VEGF-165蛋白的表达。结果 17-AAG呈时间、剂量依赖性抑制PC12细胞增殖(P<0.05);24 h半数抑制浓度(IC50)为0.1μmol/L。0.1μmol/L 17-AAG作用于PC12细胞6、12、24、48 h的细胞凋亡率均明显高于空白对照组(P<0.01)。0.1μmol/L 17-AAG作用于PC12细胞6、12、24、48 h,VEGF-165蛋白表达逐渐降低;各时点VEGF-165蛋白表达量与阴性对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 HSP90抑制剂17-AAG能抑制PC12细胞增殖,诱导细胞凋亡,抑制VEGF蛋白表达。

17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素对乳腺癌细胞的杀伤作用

目的:对一种热休克蛋白90抑制剂即17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-AAG)对人乳腺癌细胞生长的影响及相关机制进行初步探讨。方法:MTT法检测药物对人乳腺癌细胞SKB r3的生长抑制作用;流式细胞术分析细胞凋亡及细胞周期变化;免疫组化法检测药物处理前后SKB r3细胞中HER2的表达变化情况。结果:17-AAG对人乳腺癌细胞株SKB r3生长有抑制作用,随着用药浓度的增加,抑制作用明显增强,呈明显的剂量依赖性,其IC50浓度为3.09μg/m l。SKB r3细胞经17-AAG处理48 h后,流式细胞仪分析可见在0、0.625、1.250、2.500、5.000和10.000μg/m l浓度下,SKB r3细胞的凋亡率分别为(1.03±0.08)%、(3.68±0.67)%、(7.06±1.12)%、(11.23±1.36)%、(20.32±1.98)%和(31.65±2.96)%;G0/Gl期细胞分别为58.61%、54.34%、49.55%、43.73%、35.52%和27.46%;S期细胞分别为:29.57%、25.21%、19.65%、22.98%、19.71%和15.46%;G2/M期细胞分别为11.82%、20.45%、30.18%、33.29%、44.77%和57.08%;同时17-AAG处理后的SKB r3细胞人类表皮生长因子受体2(HER2)表达明显减少。结论:17-AAG能够抑制人乳腺癌细胞SKB r3的生长并促进其凋亡,提示17-AAG是一种很有前景的抗肿瘤药物。

^(131)Ⅰ标记热休克蛋白90抑制剂17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素的方法学研究

目的:建立131I标记热休克蛋白90抑制剂17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-AAG)的方法,探讨其标记条件。方法:采用放射性碘标记氯胺-T法标记17-AAG,并研究其在ICR正常小鼠体内的生物分布。结果:131I氯胺-T法标记17-AAG的最佳条件为:17-AAG乙醇溶液40μl(含17-AAG 5μg),0.5 mol.L-1磷酸盐缓冲液50μl(pH7.5),Na131I溶液20μl,氯胺-T30μg.(15μl)-1(用pH7.5的0.05 mo.lL-1PB溶解),25℃反应50 s,偏重亚硫酸钠40μg.(20μl)-1(用pH7.5的0.05 mo.lL-1PB溶解)中止反应。标记率约为53.1%,经乙酸乙酯纯化后所得标记物的放射化学纯度>90%;其生理盐水溶液4℃放置5 d,放射化学纯度大于90%。小鼠尾静脉注射131I-17-AAG后0.5 h131I-17-AAG在胆囊达到高峰(369.44±147.81)%ID.g-1,肝脏中仅有(2.23±0.50)%ID.g-1,说明对肝脏毒性小。结论:热休克蛋白90抑制剂17-AAG的标记方法操作简便,反应时间短。

17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素对鼻咽癌细胞VEGF和Survivin表达的影响

目的探讨17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-AAG)对人鼻咽癌细胞(HNE1)的影响。方法采用流式细胞技术检测不同浓度(17-AAG)、不同时间处理后HNE1细胞凋亡情况,组织免疫细胞技术检测药物处理后对VEGF、Survivin蛋白表达的影响。结果 17-AAG可以诱导人鼻咽癌细胞的凋亡,且这种作用具有时间和计量依赖性,且可抑制细胞中VEGF、Survivin蛋白的表达。结论热休克蛋白抑制剂17-AAG具有诱导鼻咽癌细胞凋亡的作用,对鼻咽癌的临床治疗具有一定的指导意义。

^(131)I-17-丙烯胺基-17-脱甲基格尔德霉素毒副作用的初步观察

目的观察131I-17-丙烯胺基-17-脱甲基格尔德霉素(131I-17-AAG)治疗VX2肝癌移植瘤模型的骨髓及肝脏毒副作用。方法16只新西兰白兔,制成VX2荷肝癌模型后,按完全随机原则分为2组,1组(治疗组)8只,10mCi131I-17-AAG耳缘静脉注射;2组(对照组)8只,为未经治疗的荷瘤兔,1、2组荷瘤兔均分别于第1、2周耳缘静脉采血,进行血常规(白细胞、红细胞、血红蛋白、血小板)及酶学(谷草转氨酶、谷丙转氨酶、碱性磷酸酶、谷氨酰转酞酶)检查。结果2周时白细胞、红细胞和血红蛋白无显著差异(P>0.05),血小板、ALT、AST均有显著差异(P<0.05),碱性磷酸酶、谷氨酰转移酶无显著差异(P>0.05)。结论131I-17-丙烯胺基17脱甲基格尔德霉素(131I-17-AAG)对骨髓造血干细胞及肝功能各项指标有不同程度的影响,且随时间逐步得到恢复。

17-烯丙胺-17-脱甲氧格尔德霉素对胆囊癌细胞的体外化疗增敏作用

目的:研究17-烯丙胺-17-脱甲氧格尔德霉素(17-allylamino-17-demethoxy geldanamycin,17-AAG)在体外对胆囊癌细胞的化疗增敏作用。方法:四甲基偶氮唑盐法检测不同浓度的常用化疗药物和17-AAG对胆囊癌细胞(GBC-SD)生长影响,和低浓度17-AAG对传统药物的化疗增敏作用。结果:细胞毒实验显示17-AAG在体外对胆囊癌细胞有较强的抑制作用。0.1μM和1μM的17-AAG能够增加传统化疗药物对GBC-SD生长的抑制作用,有增效作用。结论:17-AAG可能成为胆囊癌化疗的有效药物及化疗增敏剂。

格尔德霉素衍生物17-AAG对缺氧宫颈癌细胞凋亡的影响

目的:观察格尔德霉素衍生物17-AAG对氯化钴化学缺氧诱导的宫颈癌细胞凋亡的影响,并简单探讨可能的机制。方法:用含200μmol/LCoCl2的无血清RPMI 1640培养基模拟宫颈癌细胞缺氧微环境,West-ern Blot法检测缺氧诱导因子HIF-1α及其下游靶分子VEGF蛋白的表达,DAPI染色检测细胞的凋亡情况。结果:缺氧可诱导HIF-1α、VEGF蛋白的表达上调;但这种上调可被17-AAG所逆转,从而使宫颈癌细胞对缺氧的耐受能力明显降低,凋亡增加。结论:17-AAG通过对HIF-1α信号的干扰而具有一定的抗瘤活性。

缺氧条件下Hsp90抑制剂17-AAG对RPE细胞整联蛋白连接激酶表达的影响

目的:研究热休克蛋白(heat shock protein 90,Hsp90)抑制剂17-AAG对缺氧诱导的视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)细胞整联蛋白连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)表达的影响。方法:利用200μmol/L氯化钴(cobalt chloride,CoCl2)建立体外RPE细胞的化学缺氧模型。不同浓度的Hsp90抑制剂17-AAG预处理RPE细胞1h后给予12h缺氧处理。实验分为缺氧对照组、二甲基亚砜(DMSO)对照组和17-AAG预处理组。其中17-AAG预处理组根据浓度不同又分为6组:0.01,0.10,0.50,1.00,5.00,10.00μmol/L。应用RT-PCR和Western blot方法检测ILK表达变化情况。结果:缺氧对照组、DMSO对照组和17-AAG预处理组ILK mRNA与内参β-actin mRNA光密度比值分别为1.32±0.04,1.29±0.03,0.93±0.06,0.70±0.05,0.53±0.03,0.44±0.04,0.32±0.04,0.30±0.03;ILK蛋白与内参β-actin蛋白光密度比值分别为2.16±0.04,2.13±0.04,1.65±0.04,1.13±0.05,0.74±0.03,0.41±0.06,0.35±0.04,0.35±0.03。与缺氧对照组比较,17-AAG预处理组ILK mRNA和蛋白的表达明显降低(P<0.05),呈浓度依赖性。结论:Hsp90抑制剂17-AAG能够降低缺氧条件下RPE细胞ILK的表达。

17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素增强慢性粒细胞白血病细胞对伊马替尼敏感性的机制研究

目的探索伊马替尼(IM)联合使用17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-AAG)增加慢性粒细胞白血病(CML)细胞株K562和K562A02凋亡率的机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝法观察细胞增殖抑制率,Annexin V/PI双染色法检测细胞凋亡率,逆转录-聚合酶链反应法检测Bcr-abl、MDR1、Bcl-2 mRNA的表达及Western blot法检测Bcr-abl、p-gp、Bcl-2蛋白的表达。结果0.31μg·mL-1伊马替尼联合1.25μg·mL-117-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素分别作用于K562和K562A02细胞48 h,增殖抑制率分别为(70.78±1.01)%和(39.27±1.52)%,凋亡率为(48.74±2.51)%和(45.0±0.4)%。2.5μg·mL-1伊马替尼联合10μg·mL-117-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素作用于K562A02细胞48 h,增殖抑制率达(65.63±0.93)%。逆转录-多聚酶链反应和Western blot结果显示,联合用药后K562细胞的Bcr-abl和Bcl-2基因显著降低,MDR1呈弱表达,无明显变化。而K562A02细胞中,Bcr-abl、Bcl-2和MDR1基因的表达均有明显下调(P<0.05)。结论伊马替尼联合17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素可有效抑制K562和K562A02细胞增殖和诱导凋亡,两者联合应用具有克服伊马替尼耐药的作用。

^131I-17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素对荷MCF-7乳腺癌模型的抑瘤作用

目的观察^131I-17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素（17-AAG）对MCF-7乳腺癌荷瘤裸鼠模型肿瘤生长的抑制作用。方法采用过氧化氢标记法制备^131I-17-AAG；将30只荷瘤裸鼠随机分成3组：^131I-17-AAG治疗组，二甲基亚砜（DMSO）对照组和单纯Na^131I治疗组。尾静脉注射相应试剂后，观察28d，比较肿瘤的体积，计算抑瘤率；Western blot检测肿瘤组织Akt2蛋白表达情况；观察肿瘤组织病理变化；TUNEL法检测肿瘤组织细胞凋亡。结果给药28d，肿瘤体积依序分别为（63．75±8．62）、（96．79±14．75）、（83．12±10．89）mm^3；^131I-17-AAG组与DMSO对照组和^131I组两组间比较，差异有统计学意义（F=23．13，20．58，P〈0．01）；DMSO对照组和^131I组比较，差异无统计学意义（F=3．43，P〉0．05）；^131I-17-AAG治疗组Akt2蛋白表达较对照组明显降低。结论^131I-17-AAG能有效抑制裸鼠MCF-7乳腺癌的生长，对治疗人MCF-7乳腺癌有较好实践意义。

17-AAG通过抑制Erk信号通路增强奥沙利铂诱导结肠癌细胞凋亡

目的研究17-AAG与奥沙利铂是否存在协同效应,并探讨PI3K/Akt、Erk信号通路在奥沙利铂联合17-AAG诱导人结肠癌细胞凋亡过程中的作用。方法四甲基偶氮唑盐比色实验(MTT法)检测17-AAG、奥沙利铂对细胞增殖的抑制作用;流式细胞术分析细胞凋亡情况;Western blot法检测相关蛋白的表达水平。结果 17-AAG能抑制RKO细胞的增殖;17-AAG联合奥沙利铂作用于RKO细胞24h后,G2/M期细胞比例及凋亡率明显增加;奥沙利铂抑制p-Akt、p-Erk的活化,上调Bax,下调Bcl-2蛋白表达,活化裂解Caspase-3,联合使用17-AAG后可进一步增强上述作用,但对PI3K/Akt信号通路影响不大。结论本实验表明17-AAG具有增强奥沙利铂诱导结肠癌RKO细胞凋亡的作用,同时也说明17-AAG与奥沙利铂存在协同效应;17-AAG上调Bax,下调Bcl-2蛋白表达及增强奥沙利铂对Erk信号通路的抑制作用可能是其促进凋亡的重要机制之一。

17-AAG联合顺铂对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的观察热休克蛋白90抑制剂17-AAG联合顺铂(DDP)对人肝癌Hep G2细胞增殖的影响,并探讨其机制。方法将对数生长期的Hep G2细胞分为对照组和A、B、C组。对照组只加培养基。A组加入0.625μmol/L的17-AAG,B组加入1.0μg/m L的DDP,C组加入0.625μmol/L的17-AAG和1.0μg/m L的DDP。培养24、48 h后用MTT法测算A、B、C组细胞增殖抑制率,用流式细胞术测算各组细胞凋亡率,用RT-PCR法检测各组Bax、Bcl-2mRNA。结果 A、B、C组培养48 h时细胞增殖抑制率均高于培养24 h时,P均<0.05;培养时间相同时C组细胞增殖抑制率高于A、B组,P均<0.05。培养48 h后A、B、C组细胞凋亡率和Bax mRNA均高于对照组,Bcl-2 mRNA低于对照组,P均<0.05;C组细胞凋亡率和Bax mRNA均高于A、B组,Bcl-2 mRNA低于A、B组,P均<0.05。结论17-AAG对人肝癌Hep G2细胞具有生长抑制作用,其与顺铂联合有协同作用。其机制可能与上调细胞Bax mRNA、下调Bcl-2 mRNA表达有关。

^(131)I-17-AAG治疗VX2兔前后IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ的变化

目的:本文通过测定131I-17-丙烯胺基-17-脱甲基格尔德霉素(131I-17-AAG)治疗VX2肝癌兔模型前后血清白细胞介素2、4、10和IFN-γ的变化探讨对其自身免疫功能的影响。方法:以10mCi131I-17-AAG耳缘静脉注射治疗后1、2周,用放射免疫分析测定8例VX2肝癌兔模型血清中IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ水平,8例未经治疗的VX2肝癌兔模型作为对照。结果:IL-2、IFN-γ在1周时有显著性差异(P<0.05),2周时无显著性差异(P>0.05),IL-4、IL-10在1、2周均无显著性差异(P>0.05)。结论:131I-17-AAG治疗VX2肝癌兔模型对细胞免疫有暂时影响,但对体液免疫无影响,总体上说对VX2肝癌兔模型的治疗是安全的。

^(131)I-17-AAG治疗荷卵巢癌裸鼠的毒副作用的初步研究

目的:观察131I-17-丙烯胺基-17-脱甲基格尔德霉素(131I-17-AAG)治疗卵巢癌移植瘤模型的骨髓及肝脏毒副作用。方法:40只BALB/c裸鼠,制成荷卵巢癌模型后,按完全随机原则分为两组,一组(治疗组):20只,3mCi131I-17-AAG尾静脉注射。二组(对照组):20只,为未经治疗的荷瘤裸鼠。一、二组荷瘤裸鼠均于1周及二周眶静脉采血,进行血常规(白细胞、红细胞、血红蛋白、血小板)及酶学(谷草转氨酶、谷丙转氨酶、碱性磷酸酶、谷氨酰转移酶)检查。数据用SPSS14.0进行统计学分析。结果:白细胞、红细胞和血红蛋白2周时无显著差异(P>0.05),血小板2周有显著差异(P<0.05)。谷丙转氨酶、谷草转氨酶2周有显著差异(P<0.05),碱性磷酸酶、谷氨酰转移酶2周时无显著差异(P>0.05)。结论:131I-17-AAG对骨髓造血干细胞及肝功能各项指标有不同程度的影响,且随时间逐步得到恢复。

RGD脂肪醇与17-AAG脂质体的制备及抗肿瘤活性研究

目的制备一种新的精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-苯丙氨酸-脂肪醇(Arg-Gly-Asp-Phe-fatty alcohol,RGDFOC12)与17-丙烯氨基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-allylamino-17-demethoxygeldanamycin,17-AAG)的脂质体(RGDFOC12liposomes-loaded 17-AAG,RLAs)。方法采用薄膜分散-探头超声法制备;采用激光纳米粒度仪、透射电镜和扫描电镜测定粒径,Zeta电位和外观形态;采用动态透析法测定药物释放;采用四甲基偶氮唑盐〔3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT〕考察其对5种人肿瘤细胞株增生的抑制作用;通过瘤质量、存活数、体质量、脏器指数比评价其在小鼠体内抗肿瘤效果。结果制备得到的RLAs的粒径为(130.6±0.6)nm,Zeta电位为(-28.37±1.67)m V,外观形态为球形,包封率为80%以上。RLAs在p H 5.4环境的累积释放百分数大于在p H 7.4环境的累积释放百分数。RLAs在血浆中可稳定存在,12 h累积释放百分数为(15.85±0.71)%。RLAs对5种肿瘤细胞有抑制增生作用。RLAs对接种S180腹水瘤的ICR小鼠有抑制肿瘤生长作用。结论本研究制备了一种新的RLAs,制备方法简单、包封率高,具有较好的抗肿瘤活性。

HSP90α与MMP-2相互作用对甲状腺未分化癌细胞生长和转移的影响

目的探讨HSP90α对甲状腺未分化癌TAK细胞生长和转移的影响及相关信号分子的调控机制。方法通过HSP90α的非渗透特异性抑制剂17-丙烯胺-17-去甲氧格尔德霉素(17-allyl-amino-17-demethoxygeldanamycin,17-AAG)处理TAK细胞,分别给予不同浓度(0.001~10μmol/L)和不同作用时间(24 h和48 h),采用MTT实验、平板克隆形成实验和Transwell实验观察细胞生长和转移情况。Western blot法检测细胞内和细胞外HSP90α和MMP-2蛋白表达和分泌水平。明胶酶谱实验检测细胞外MMP-2蛋白的活性。结果与未处理组细胞相比,经0.001~10μmol/L的17-AAG作用24 h和48 h的TAK细胞活力降低,且呈明显的时间和剂量依赖性(P<0.05);与未处理的细胞相比,经0.1μmol/L和1.0μmol/L的17-AAG作用24 h的TAK细胞平板克隆形成[(86.43±1.01)%vs(46.13±1.25)%、(26.73±1.44)%,P<0.05]、迁移能力[(76.47±2.05)%vs(51.01±1.75)%、(25.01±1.97)%),P<0.05]和侵袭能力[(52.47±1.05)%vs(39.01±2.45)%、(17.07±1.67)%,P<0.05]均明显降低,同时细胞内HSP90α蛋白表达增加,细胞外HSP90α和MMP-2蛋白表达明显降低,细胞外MMP-2蛋白活性明显降低。结论分泌型HSP90α与细胞外MMP-2蛋白协同作用促进甲状腺未分化癌细胞的增殖、迁移和侵袭,导致细胞恶性生长。

17-AAG联合紫杉醇对人未分化甲状腺癌FRO细胞增殖和凋亡影响的研究

目的探讨热休克蛋白90(HSP90)抑制剂17-丙烯胺基-17-去甲氧格尔德霉素(17-AAG)联合紫杉醇对人未分化甲状腺癌FRO细胞增殖和凋亡的影响。方法 1采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT比色法)测定不同浓度(17-AAG:0.312 5、0.625 0、1.250 0、2.500 0及5.000 0μmol/L;紫杉醇:0.001 0、0.010 0、0.100 0及1.000 0μmol/L)、不同时间(24、48及72 h)17-AAG、紫杉醇单药和联合处理(17-AAG:0.625 0μmol/L,紫杉醇:0.001 0、0.010 0、0.100 0及1.000 0μmol/L)后FRO细胞的增殖抑制率。2采用流式细胞仪检测17-AAG、紫杉醇单药及联合处理24 h后(17-AAG:0.625 0μmol/L、紫杉醇:0.100 0μmol/L;联合用药:17-AAG的浓度为0.625 0μmol/L,紫杉醇的浓度为0.100 0μmol/L)FRO细胞的细胞周期变化及凋亡率。3采用胱天蛋白酶-3(Caspase-3)和Caspase-9检测试剂盒检测17-AAG、紫杉醇单药及联合处理24 h后(17-AAG:0.625 0μmol/L、紫杉醇:0.100 0μmol/L;联合用药:17-AAG的浓度为0.625 0μmol/L,紫杉醇的浓度为0.100 0μmol/L)后FRO细胞中的Caspase-3和Caspase-9活性。空白对照组均不加任何药物,只加培养液。结果 1同时点空白对照组、各剂量17-AAG组/紫杉醇组/17-AAG联合紫杉醇组的增殖抑制率随浓度升高而逐渐升高,任2组比较差异均有统计学意义(P<0.05);各剂量17-AAG组/紫杉醇组/17-AAG联合紫杉醇组的增殖抑制率在24、28及72 h逐渐增高,任2组比较差异均有统计学意义(P<0.05);同时点同浓度情况下,17-AAG联合紫杉醇组的增殖抑制率均高于单独用药组(P<0.05)。各时点17-AAG与紫杉醇联合的q值均大于1.15,两者之间呈协同作用。2 17-AAG组、紫杉醇组及17-AAG联合紫杉醇组FRO细胞的凋亡率均明显高于空白对照组(P<0.05),且17-AAG联合紫杉醇组FRO细胞的凋亡率高于17-AAG组和紫杉醇组(P<0.05)。3 17-AAG组、紫杉醇组及17-AAG联合紫杉醇组FRO细胞的Caspase-3和Caspase-9活性均高于空白对照组(P<0.05);且17-AAG联合紫杉醇组细胞的Caspase-3和Caspase-9活性均高于17-AAG组和紫杉醇组相应指标(P<0.05)。结论 17-AAG和紫杉醇均可明显抑制FRO细胞的增殖并诱导细胞凋亡,联合用药有一定的协同效应,呈剂量依赖关系。