17-羟-岩大戟内酯B对人三阴性乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的研究狼毒大戟活性成分17-羟-岩大戟内酯B(HJB)对人三阴性乳腺癌(TNBC)细胞MDA-MB-231、MDA-MB-468增殖及凋亡的影响。方法用0(空白对照)、5、10、20、40、80μmol/L的HJB分别处理MDA-MB-231、MDA-MB-468细胞24、48、72 h,采用MTT法检测各组细胞的增殖抑制率。以0(空白对照)、10、20、40μmol/L的HJB作用于上述2种细胞24 h后,采用激光共聚焦显微镜和流式细胞术检测细胞的凋亡情况和线粒体膜电位、活性氧水平的变化情况,并采用Western blot法检测B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞色素C(Cyt-C)、胱天蛋白酶3(caspase-3)、活化的caspase-3(cleaved caspase-3)、caspase-9、cleaved caspase-9蛋白的表达水平。结果与空白对照相比,5、10、20、40、80μmol/L的HJB均可显著升高MDA-MB-231、MDA-MB-468细胞的增殖抑制率(P<0.05),且有浓度和时间依赖趋势。10、20、40μmol/L的HJB作用24 h后,2种细胞凋亡增多,总凋亡率均显著升高(P<0.05);线粒体膜电位均显著降低(P<0.05);活性氧水平均显著升高(P<0.05);Bcl-2、caspase-3、caspase-9蛋白的表达均显著下调(P<0.05),Cyt-C、Bax、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9蛋白的表达均显著上调(P<0.05)。结论HJB对MDA-MB-231、MDA-MB-468细胞的增殖具有抑制作用,并可诱导其凋亡。

17-羟-岩大戟内酯B对肝癌BEL-7402细胞增殖和凋亡的影响及机制

目的研究17-羟-岩大戟内酯B(HJB)对人肝癌BEL-7402细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其分子机制。方法将BEL-7402细胞分为空白对照组、HJB 10μg/mL组、20μg/mL组和40μg/mL组。采用MTT实验检测各组细胞存活率。采用流式细胞术检测HJB对BEL-7402细胞周期和凋亡的影响;AO/EB双染色法检测细胞凋亡形态的变化;Western blot法检测Bcl-2、Bax、Cleaved-Caspase-9和Cleaved-Caspase-3蛋白表达的变化。结果HJB可呈浓度-时间依赖趋势抑制BEL-7402细胞增殖。不同浓度HJB作用24小时后,各HJB处理组主要表现出S期和G2/M期阻滞;早、晚期细胞凋亡率均明显增加(P<0.05或P<0.01)。随着HJB浓度的增加,晚期凋亡细胞数量逐渐增加,呈固缩或圆珠状。各HJB处理组Bcl-2的蛋白表达均明显下调,40μg/mL组细胞Bax的蛋白表达明显上调,此外,各组细胞Cleaved-Caspase-9和Cleaved-Caspase-3蛋白的表达均显著上调(P<0.05)。结论17-羟-岩大戟内酯B可以抑制肝癌BEL-7402细胞增殖,调控细胞周期并诱导其凋亡,其分子机制可能与下调Bcl-2蛋白表达、上调Bax、Cleaved-Caspase-9和Cleaved-Caspase-3蛋白表达有关。

JNK通路参与17-羟-岩大戟内酯B诱导的U251细胞凋亡

目的探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路在17-羟-岩大戟内酯B(HJB)诱导人脑胶质瘤细胞U251细胞凋亡中的作用及机制。方法体外培养U251细胞24 h,分为5组,分别用MTT法检测细胞活性、流式细胞仪检测细胞凋亡率、分光光度法检测Caspase-3和Caspase-9的相对活性、Western Blot法检测JNK和p-JNK的蛋白表达。结果与空白对照组相比,单独应用HJB可使U251细胞活性减弱,早期凋亡率明显升高,Caspase-3及Caspase-9的相对活性升高(P<0.05);与单独应用HJB组相比,应用HJB和SP600125可使U251细胞活性升高,细胞早期凋亡率明显下降,Caspase-3及Caspase-9的相对活性下降(P<0.05)。Western Blot结果显示HJB可使p-JNK蛋白表达明显增强,经SP600125预处理后,pJNK蛋白表达明显减弱(P<0.05);JNK蛋白表达没有变化(P>0.05)。结论 HJB可抑制U251细胞增殖和诱导细胞凋亡;JNK信号途径活化介导了HJB诱导的凋亡;JNK途径的活化导致了下游caspase途径的活化。

17-羟-岩大戟内酯B的半合成及晶体结构

17-羟-岩大戟内酯B均具有显著抗肿瘤活性,但分离含量较低。本研究以岩大戟内酯A(1)为原料,通过氧化、溴代、乙酰化和还原等反应探索半合成标题化合物17-羟-岩大戟内酯B(5)。其中,合成中间体化合物3时以四氯化碳/二氯甲烷=2/1体积比,n(2)︰n(NBS)为1︰5且分批间隔投料的条件下,收率达70%。另外,以单晶衍射确定了化合物5的绝对构型。

17-羟-岩大戟内酯B对U251细胞增殖及凋亡作用的影响

目的:探讨17-羟-岩大戟内酯B(HJB)对人脑胶质瘤细胞U251增殖及凋亡的影响。方法:将U251细胞分为空白对照组,5-氟尿嘧啶组(80μmol.L-1),HJB组(6.25,12.5,25,50,100,200,400,800μmol.L-1)。用不同浓度的药物作用24h及药物半数抑制浓度(IC50)浓度作用不同时间(12,24,48,72 h),四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活性,流式细胞仪Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡率,分光光度法检测半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和半胱氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)的相对活性。结果:与空白对照组相比,HJB对U251细胞的增殖有显著抑制作用,并呈浓度依赖及时间依赖性(P<0.05),作用24 h后IC50为62.236 11μmol.L-1。HJB可诱导U251细胞凋亡,浓度30,60,120μmol.L-1分别处理细胞24 h后,早期凋亡率明显升高(P<0.05),且呈浓度依赖关系;Caspase-3及Caspase-9的相对活性均升高(P<0.05),并呈浓度依赖关系。结论:HJB明显抑制体外U251细胞生长并诱导其凋亡,线粒体途径可能是诱导其凋亡的机制之一。

Fas/FasL信号途径参与17-羟-岩大戟内酯B诱导U251细胞凋亡

目的 :探讨Fas/Fas L信号转导途径在17-羟-岩大戟内酯B诱导人脑胶质瘤细胞U251细胞凋亡中的作用及机制。方法:以5-氟尿嘧啶(浓度为10μg/ml)为阳性对照。各组样品用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增值抑制率;流式细胞仪Annexin V-FITC/PI检测细胞早期凋亡率;分光光度法检测Caspase-3和Caspase-8的相对活性;Western Blot法检测Fas和Fas L的蛋白表达。结果:与空白对照组相比,10μg/ml的17-羟-岩大戟内酯B对U251细胞的增殖没有显著性改变,但20μg/ml和40μg/ml的17-羟-岩大戟内酯B对U251细胞的增殖有显著性抑制作用,但40μg/ml的17-羟-岩大戟内酯B对U251细胞的增殖的抑制作用没有进一步改变,故应用20μg/ml 17-羟-岩大戟内酯B做后续试验。与单独应用20μg/ml 17-羟-岩大戟内酯B组相比,经0.1μg/ml、0.5μg/ml或1μg/ml抗Fas单克隆抗体预处理后,再加入20μg/ml17-羟-岩大戟内酯B时,U251细胞增值抑制率明显减弱,并选用0.5μg/ml抗Fas单克隆抗体进行后续实验。单独应用20μg/ml17-羟-岩大戟内酯B,细胞早期凋亡率、Caspase-3及Caspase-8相对活性较空白组明显升高,Fas及Fas L蛋白表达水平明显增强;而经0.5μg/ml抗Fas单克隆抗体预处理后再加入20μg/ml17-羟-岩大戟内酯B,可使细胞早期凋亡率、Caspase-3及Caspase-8的相对活性较单独应用20μg/ml17-羟-岩大戟内酯B明显下降,Fas及Fas L蛋白表达明显减弱。结论:17-羟-岩大戟内酯B可抑制U251细胞增殖和诱导细胞凋亡;Fas/Fas L信号通路介导了17-羟-岩大戟内酯B诱导的凋亡;Fas/Fas L通路活化导致了下游caspase途径的活化。

17-羟-岩大戟内酯B对K562细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨17-羟-岩大戟内酯B(HJB)对人白血病K562细胞增殖及凋亡的影响。方法:将K562细胞分为3组,分别为:空白对照组,5-氟脲嘧啶组(浓度为100μmol.L-1),HJB组(浓度为6.25,12.5,25,50,100,200,400μmol.L-1)。用不同浓度的药物作用24 h和200μmol.L-1的HJB浓度作用不同时间(12,24,48 h),四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活性,并与空白对照组和5-氟脲嘧啶组作对比;流式细胞仪Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡率;分光光度法检测半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和半胱氨酸蛋白酶-8(Caspase-8)的相对活性。结果:与空白对照组相比,HJB对K562细胞的增殖有显著性抑制作用,并呈浓度依赖关系及时间依赖关系(P<0.05),作用24 h后IC50为158.7μmol.L-1。HJB可诱导K562细胞凋亡,用50,100,200μmol.L-1药物分别处理细胞24 h后,早期凋亡率较空白组明显升高(P<0.05),且呈浓度依赖关系;Caspase-3及Caspase8的相对活性均较空白对照组升高(P<0.05),并呈浓度依赖关系。结论:HJB明显抑制体外K562细胞生长并诱导其发生凋亡,且死亡受体途径可能是诱导其凋亡的一个机制。

MSPD-UPLC法同时测定狼毒大戟中4种成分

目的建立基质固相分散-超高效液相色谱法(MSPD-UPLC)测定狼毒大戟Euphorbia fischeriana Steud.中岩大戟内酯A、17-羟基-岩大戟内酯A、岩大戟内酯B、17-羟基-岩大戟内酯B的含有量。方法样品前处理采用MSPD法,以硅胶为分散剂,乙腈为洗脱溶剂;样品分析采用Waters BEH C18色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.7μm);流动相乙腈-水,梯度洗脱;体积流量0.4 mL/min;检测波长250 nm;柱温35℃。结果各目标分析物在各自范围内具有良好的线性关系(r≥0.999 5),检出限与定量限分别介于0.072~0.78μg/mL和0.24~2.61μg/mL之间,平均加样回收率93.0%~94.4%。结论该法操作简单、溶剂用量少、分析时间短,可用于狼毒大戟中活性成分的提取与检测。