解藻酸弧菌株ATCC 17749中海藻酸裂解酶基因的克隆与鉴定

以解藻酸弧菌株(Vibrio alginolyticus)ATCC 17749为研究对象,利用生物信息学寻找并预测得到5个可能的海藻酸裂解酶基因algV1、algV2、algV3、algV4和algV5。通过构建5个以pET-28a(+)为载体的大肠杆菌表达质粒pET28a-algV1、pET28a-algV2、pET28a-algV3、pET28a-algV4和pET28a-algV5,实现了5个基因的异源表达,并经海藻酸裂解酶定量和定性的活性分析,确定5个基因的编码产物都具有海藻酸裂解酶活性,其中重组的algV1、algV2和algV3为胞外酶,algV4和algV5为胞内酶。

副溶血性弧菌和溶藻弧菌的双重PCR检测技术

主要针对副溶血性弧菌（VpBJ1997）和溶藻弧菌（VaATCC17749）的gyrB基因的不同位点设计特异性引物，利用双重PCR技术同时检测Vp（BJ1997）和Va（ATCC17749），并对该反应体系的特异性以及灵敏度进行检测。结果显示Vp（BJ1997）灵敏度的检测下限可达2×10^2CFU／mL，Va（ATCC17749）灵敏度的检测下限可达2．03×10^2CFU／mL，双重PCR与单一PCR检测的灵敏度的数量级是相同的；与沙门氏菌（ATCC27892）、金黄色葡萄球菌（ATCC13565）、大肠杆菌（35218）、河弧菌（H265）、鳗弧菌（M936）、创伤弧菌（ATCC27562）无交叉反应；在人工污染试验中，混合菌液的检测下限2．84×10^3CFU／mL，而进一步稀释至2．84×10^2CFU／mL时，Vp（BJ1997）已检测不出，Va（ATCC17749）仍可检出。研究表明，该方法特异性强，灵敏度高，操作简单，成本低，检测速度快，为基层单位同时检测副溶血性弧菌和溶藻弧菌提供了一种快速准确的方法，对控制水产品中这两种致病性弧菌具有重大的意义。