牛瑟氏泰勒虫p23-IL-18融合基因的原核表达

为探索牛瑟氏泰勒虫病基因工程亚单位疫苗的可行性,以p23-IL-18融合基因克隆到原核表达载体pET-28a,构建原核重组质粒pET-28a-p23-IL-18,用IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western-blotting分析。结果表明,构建牛瑟氏泰勒虫pET-28a-p23-IL-18原核表达质粒,目的基因在大肠杆菌中获得表达,融合蛋白的分子量约为48 kDa,并被牛瑟氏泰勒虫阳性血清所识别,具有良好的反应原性。此结果为牛瑟氏泰勒虫病基因工程亚单位疫苗的制备提供了理论依据。

牛瑟氏泰勒虫不同靶基因PCR检测方法的比较

为筛选出检测牛瑟氏泰勒虫更为特异、敏感的PCR方法,本试验以牛瑟氏泰勒虫p23和p33基因、HSP70基因及18S rRNA基因为靶基因进行PCR检测,并从其敏感性、特异性和临床样本检出率等方面进行了比较。结果显示,4种靶基因引物对牛瑟氏泰勒虫的检测均有较高的特异性,当牛瑟氏泰勒虫基因组DNA浓度为127 ng/μL时,p23、p33、HSP70及18S rRNA4种基因的最小检测量分别为1×105、1×105、1×104和1×106copies/μL;检测临床样本阳性检出率分别为30.19%(16/53)、39.62%(21/53)、47.17%(25/53)和54.72%(29/53)。表明以18SrRNA基因为靶基因的PCR方法从敏感性和临床检出率上明显优于其他3种基因。