猪带绦虫不同阶段45W-4BX和18kD基因联合表达及保护性分析

【目的】获得不同发育阶段基因联合表达的具有良好免疫保护性的重组抗原,为研制高效的猪囊虫基因工程疫苗奠定基础。【方法】PCR扩增截去45W-4B基因的信号肽和C端17个疏水氨基酸序列,经BamH I和EcoR I酶切后与表达载体pGEX-4T-1连接转化BL21感受态细胞,酶切及PCR扩增鉴定阳性克隆。测序正确的质粒经EcoR I和Not I酶切处理后与截去信号肽的18 kD基因连接,构建双基因融合表达载体pGEX-4BX/18。用IPTG诱导的表达产物,进行SDS-PAGE电泳、Western blot分析活性。分别用300μg重组GST-4BX、GST-4BX/18蛋白免疫猪,间接ELISA测定抗体水平。感染后90 d剖检计算各组的减虫率,比较评价重组抗原的免疫保护性。【结果】4BX/18 kD在大肠杆菌中获得高效表达,表达产物为50 kD的融合蛋白,并能被人囊虫和感染初期的猪囊虫阳性血清所识别。重组抗原免疫猪后45 d抗体达到峰值,联合表达重组抗原的减虫率为97%,GST-4BX免疫组的减虫率为95%。【结论】重组抗原4BX和4BX/18kD均具有较好的免疫保护效果,有望利用它们研制出抗猪囊尾蚴病的高效疫苗。

神经诱向生长因子18kD蛋白的纯化

提取与纯化诱向生长因子是神经生物化学研究中的一个重要课题．采用自然系统凝胶电泳，分离周围神经损伤过程中产生的具有诱向生长作用的１８ｋＤ蛋白，再以等电聚焦凝胶电泳与神经组织联合培养，揭示了ｐＩ为５．２的１８ｋＤ蛋白具有诱神经生长的作用．经高效液相色谱仪分析获得较纯的１８ｋＤ诱向因子．蛋白／多肽测序仪检测，１８ｋＤ蛋白Ｎ端氨基酸序列为：ＰＥＰＡＷＳＡＰＡＰ．

猪囊尾蚴18kD蛋白基因的克隆及其序列分析

为在体外获得高纯度的猪囊尾蚴病的诊断抗原,克隆了猪囊尾蚴18kD蛋白的基因,并对其核苷酸和氨基酸序列进行了分析,揭示了18kD蛋白为一种分泌表达蛋白,为该蛋白的体外表达提供了基础。

周围神经18kD蛋白单克隆抗体的制备

本实验用不连续、非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳系统，以损伤坐骨神经远侧端提取的具有神经诱向生长作用的、PI为5．2的18kD蛋白作为抗原，免疫BALB／C小鼠，通过杂交瘤技术，Elisa法筛选，获得二株（Ⅲ8G、Ⅳ3C）稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。免疫印迹结果表明单克隆抗体能特异性识别分子量为18kD蛋白。免疫组化法显示：在实验组坐骨神经远侧端为阳性反应，对照组坐骨神经的神经膜为阴性。

18KD蛋白在损伤大鼠坐骨神经远侧端中的分布——免疫电镜与光镜观察

１８ＫＤ蛋白在损伤大鼠坐骨神经远侧端中的分布——免疫电镜与光镜观察严志强１陈云２顾晓松１（南通医学院神经科学研究所１，电镜室２，南通２２６００１）在神经系统发育及再生过程中，神经轴突如何到达其相应的靶器官，是当今神经科学的研究热点之一。近年来的研究显...

周围神经18KD诱向因子的生化分析

神经诱向生长是神经科学前沿中一个重要研究方向，提取与纯化诱向生长因子更是神经生物化学研究中的一个重要技术课题。本研究采用自然系统凝胶电泳，分离周围神经损伤过程中产生的具有诱向生长活性作用的１８ＫＤ蛋白，再以等电点聚焦凝胶电泳与神经组织联合培养，揭示了ＰＩ为５．２的１８ＫＤ蛋白具有诱导神经生长的作用。高效液相色谱仪分析提示，通过以上方法可获得较纯的１８ＫＤ诱向因子。本研究为神经诱向因子的分离，纯化与进一步的蛋白序列分析提供了可行的途径。

玉米超高蛋氨酸18kD δ-醇溶蛋白基因dzs18克隆及其原核表达

以玉米自交系吉818和富含蛋氨酸（Met）的BSSS53为材料,克隆编码超高蛋氨酸18k Dδ-醇溶蛋白（18kD δ-zein）的dzs18基因,并进行原核表达。结果表明,BSSS53中分离的目标DNA序列,其ORF内有8个碱基替换突变,第208个碱基C发生缺失,导致移码突变、产生截短的多肽链。从吉818中分离的目标DNA长度为741 bp,含有由648 bp构成的ORF,编码由215个氨基酸组成的超高蛋氨酸吉818-18kD-δ-zein。与参考序列相比,目标DNA序列中存在29个碱基替换突变、15个碱基的片段插入和3个碱基的片段缺失。吉818-18kD-δ-zein中Met残基数占27.9%,是10kDδ-zein的2倍,且比参考蛋白多20%,其中部蛋氨酸高密区（HMQR）内Met残基数占50.0%。玉米dzs18在原核细胞中的表达受菌株的影响,在大肠杆菌BL21（DE3）中不表达,在Rossetta（DE3）中正常表达。ITPG浓度在0.1-1.5 mmol/L范围内对目标蛋白的表达量没有明显影响;在1-5 h范围内,目标蛋白量随诱导时间的延长而增加,超过6 h,增加不明显。玉米dzs18基因在Rossetta（DE3）中表达的目标蛋白以包涵体即不溶性蛋白质颗粒形式存在。

小毛莨内酯对结核休眠菌感染病人GLS mRNA表达的影响

目的 研究小毛莨内酯抗人体结核休眠菌感染的分子免疫学机理。方法 采用PCR方法检测结核病人PBLs中结核菌 16kDα 晶状体同源蛋白DNA阳性的 5 6例患者为本研究对象 ;采用反转录聚合酶链反应半定量 (QC RT PCR)方法 ,测定不同剂量的Tern .对以上病人PBL颗粒裂解肽mRNA表达水平的影响。结果 当Tern .在 10 0mg L ,2 0 0mg L浓度时 ,能诱导结核休眠菌感染病人体外活化的PBLGLSmRNA的表达。结论 Tern .可能通过促进颗粒裂解肽mRNA的表达 ,增强机体CTL杀菌能力 ,达到抗结核休眠菌的作用。