膀胱肿瘤抗原、尿核基质蛋白22、细胞角蛋白-19对膀胱癌的诊断价值分析

目的分析膀胱肿瘤抗原(BTA)、尿核基质蛋白22(NMP22)、细胞角蛋白-19(CK-19)对膀胱癌的诊断价值。方法选取53例膀胱癌患者作为膀胱癌组,49例泌尿系良性疾病患者作为对照组。比较两组患者CK-19、NMP22及BTA水平,分析三者水平与膀胱癌患者临床特征的关系,分析CK-19、NMP22及BTA单独及联合检测对膀胱癌的诊断价值。结果膀胱癌组患者尿液NMP22、BTA及血清CK-19水平均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。肿瘤分期为Ⅲ~Ⅳ期的膀胱癌患者尿液NMP22、BTA及血清CK-19水平均明显高于Ⅰ~Ⅱ期患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。CK-19、NMP22及BTA联合检测诊断膀胱癌的灵敏度和特异度分别为0.805和0.869,曲线下面积(AUC)为0.854(95%CI:0.774~0.934),均高于CK-19、NMP22及BTA单独检测。结论膀胱癌患者CK-19、NMP22及BTA水平显著升高,三者水平升高与肿瘤分期相关,密切监测三者水平变化可为临床诊断膀胱癌提供依据。

COVID-19对高等教育的影响及我们的应对——基于国际组织相关报告的回溯性分析

文章选择联合国教科文组织及国际大学协会两大与高等教育相关的国际组织作为研究案例,以高等教育与COVID-19相关的研究报告作为分析样本,深度解读COVID-19对高等教育的教学、研究、公平和包容、国际交流、行政管理方面的影响,总结高等教育机构在危机不同时期的应对策略。最后提出后疫情时代高等教育变革的主要方向,即以可持续发展视角观照高等教育发展,以更系统的眼光统筹高等教育治理,以数字化转型推动高等教育创新发展,以高等教育国际合作维护全球共同利益。

siRNA-Med19对人肺癌A549细胞Med19转录、表达的影响

目的研究siRNA-Med19对人肺癌A549细胞Med19的影响。方法利用前期已合成的siRNA-Med19慢病毒载体,感染A549细胞,并以无病毒感染组作为空白对照组,以慢病毒载体感染组作为阴性对照组。采用荧光图片和白光图片对比方法判断细胞的感染率;RT-PCR法检测细胞Med19mRNA的转录水平;Western印迹法检测细胞Med19蛋白表达水平。结果慢病毒载体对人肺癌A549细胞的感染率在80%以上,siR-NA-Med19慢病毒感染组Med19mRNA转录水平明显降低,敲减效率大于70%,Med19蛋白表达量也明显降低。结论siRNA-Med19慢病毒载体可以高效感染人肺癌A549细胞,siRNA-Med19对A549细胞Med19的转录和表达具有明显的抑制和消减作用。

长链非编码RNA H19对口腔癌细胞的迁移和侵袭的影响以及分子机制

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)H19对口腔癌细胞侵袭、迁移的影响以及作用机制。方法荧光定量聚合酶链反应检测永生化口腔上皮细胞系HIOEC细胞以及口腔癌细胞系CAL27中H19、miR-107、细胞周期蛋白依赖性激酶6(CDK6)的表达。siRNA H19、miR-107 mimics、pcDNA H19、anti-miR-107转染CAL27细胞,Transwell法检测H19和miR-107对细胞侵袭、迁移的影响,TargetScan数据库预测H19、miR-107、CDK6的靶向关系,双荧光素酶报告基因检测H19、miR-107、CDK6的相互作用,蛋白质印迹法(Western blot)检测H19和miR-107对靶基因CDK6蛋白水平的影响。结果H19在CAL27细胞中的表达高于HIOEC细胞(P<0.05)。siRNAH19转染后,H19的表达降低,抑制CAL27细胞的侵袭、迁移能力(P<0.05)。H19与miR-107的3’-UTR特异性结合,调控miR-107的表达活性。miR-107在CAL细胞中的表达低于HIOEC细胞(P<0.05),siRNA H19转染后,miR-107的表达升高,antimiR-107共转染可促进siRNAH19对CAL27细胞的侵袭、迁移能力(P<0.05)。CDK6在CAL27细胞中的表达高于HIOEC细胞(P<0.05),CDK6的表达可被H19和miR-107共同调控。结论lncRNAH19通过靶向调控miR-107/CDK6信号轴影响口腔癌细胞的侵袭、迁移能力,在口腔癌的发生发展过程中起着重要作用。

印迹基因H19对人绒毛膜上皮癌细胞JEG-3基因表达谱的影响

目的获得印迹基因H19对滋养细胞株人绒毛膜上皮癌细胞系(JEG-3)细胞基因表达谱的影响,以期探讨H19对滋养细胞生物学行为的调控机制。方法含人全长H19cDNA重组真核表达质粒pRc/CMV经测序鉴定正确后,转染JEG-3细胞,采用Affymetrix的U133plus 2.0Array基因表达谱芯片检测基因表达谱的变化。结果转染后H19mRNA表达显著升高,JEG-3细胞基因表达谱明显改变,共筛选出96条差异基因,其中上调基因19条,下调基因77条。选择其中一种差异表达基因HES1,采用荧光定量PCR检测发现重度子痫前期胎盘组织HES1mRNA的表达水平较正常晚孕胎盘组织中HES1mRNA的表达水平明显降低。结论高通量基因芯片筛选出了H19调控滋养细胞的相关基因,为进一步探讨H19对滋养细胞生物学行为的调控机制提供了实验基础。

趋化因子CCL19对体外培养人头颈鳞癌细胞活性的影响

目的:探讨趋化因子CCL19在人头颈鳞癌细胞活性中的作用。方法:应用噻唑蓝比色(MTT)法检测不同浓度顺铂对人头颈鳞癌原发细胞系(PCI-4A)及淋巴结转移细胞系(PCI-4B)的生长抑制作用,观察不同浓度的CCL19对顺铂作用的影响,应用透射电镜技术观察4B细胞形态学变化,流式细胞仪(FCM)检测CCL19对顺铂诱导的4B细胞周期及凋亡率的影响。使用SPSS11.0软件包进行统计学分析。结果:顺铂对4B细胞的生长抑制率高于4A细胞,CCL19可以显著降低顺铂对4B细胞的生长抑制(P<0.05),但对4A细胞无明显作用(P>0.05),CCL19对顺铂作用的4B细胞的影响是通过形态学上向正常状态转化、减少细胞在G1期的停滞、减少细胞的凋亡率而产生的。结论:顺铂在人头颈鳞癌淋巴结转移细胞(PCI-4B)中的作用强于原发细胞(PCI-4A),CCL19可以显著降低顺铂在PCI-4B细胞中的作用,提高细胞的活性,这为探讨临床头颈鳞癌的化疗耐药机制提供了一个新的思路。

miR-19对肺腺癌A549细胞株迁移功能的影响

目的:探讨miR-19对肺腺癌A549细胞株迁移能力的作用。方法:运用qRT-PCR检测miR-19在肺上皮细胞株BEAS-2B和肺腺癌A549-Luc细胞株中的表达;建立稳定过表达miR-19的A549-Luc肺癌细胞株;qRT-PCR鉴定稳定细胞株A549/RFP+/H2B和A549/RFP+/m19中miR-19的表达水平;观察其形态变化及Transwell小室细胞迁移实验检测细胞迁移能力变化。结果:miR-19在BEAS-2B及A549-Luc细胞中的表达差异具有显著性(t=-20.954,P<0.001)。成功建立了稳定过表达miR-19的肺腺癌细胞株A549/RFP+/m19;观察发现A549/RFP+/m19细胞形态发生变化,且与空载A549/RFP+/H2B细胞相比,A549/RFP+/m19细胞迁移能力增强(P<0.001)。结论:miR-19可使肺腺癌A549-Luc细胞迁移能力增强。

结核分枝杆菌P19对巨噬细胞TLR-2表达及分布的影响

目的探讨结核分枝杆菌19kD脂蛋白(Mtb P19)对单核巨噬细胞表面TLR-2表达的影响。方法以10μg/ml Mtb P19作用于拂波醇酯(PMA)分化的THP-1细胞,CO2孵箱孵育6 h。免疫细胞化学法(ICC)观察巨噬细胞TLR-2分布;对巨噬细胞TLR-2进行荧光抗体染色,流式细胞术分析P19作用前后TLR-2的表达变化;激光共聚焦显微镜观察其受体排列。结果ICC法观察发现TLR-2均匀分布于巨噬细胞表面。P19作用组与对照组相比平均荧光强度明显增强;在作用组细胞表面出现多个斑块状染色阳性的荧光标记区,而对照组TLR-2分子总体呈现随机动态的分布。结论Mtb P19不仅能诱导巨噬细胞TLR-2表达增加,还可以引起受体发生功能性聚集。

沉默Med19对人乳腺癌裸鼠成瘤的影响

目的:通过观察慢病毒介导的siRNA沉默Med19基因对人乳腺癌裸鼠成瘤的影响,探讨Med19在乳腺癌发生发展中的作用。方法:利用前期已稳定感染Med19-siRNA慢病毒载体的人乳腺癌MCF-7细胞,采用Westernblotting方法检测Med19蛋白的沉默效果。稳定感染Med19-siRNA慢病毒载体的人乳腺癌MCF-7细胞接种于BALB/c裸鼠背侧皮下,观察裸鼠成瘤情况和移植瘤生长情况,并绘制生长曲线。以慢病毒空载体感染组作为阴性对照组。结果:所构建的Med19-siRNA慢病毒载体能有效抑制MCF-7细胞Med19蛋白的表达,蛋白表达水平下降了62%,Med19基因沉默组较空载体慢病毒感染组瘤体生长速度慢(t值分别为4.843、6.291、5.317,均P<0.01),肿瘤终体积分别为(620.08±263.07)mm3和(1406.77±351.14)mm3,终重量分别为(0.20±0.18)g和(0.67±0.27)g,差异有统计学意义(t值分别为4.399、3.615,均P<0.01)。结论:Med19基因沉默能有效抑制人乳腺癌裸鼠成瘤和移植瘤生长,表明Med19在乳腺癌发生发展中起到重要作用,并有可能成为乳腺癌靶向治疗的潜在靶点。

Grim-19对宫颈癌HeLa细胞端粒酶活性及衰老的影响

目的重组质粒转染HeLa细胞以探讨Grim-19表达水平的变化对HeLa细胞中端粒酶活性的影响。方法将重组质粒p3×flag-myc-cmv-24-Grim-19(简写Grim-19)通过脂质体转染至HeLa细胞,48 h后通过Western blot检测Grim-19、htert、P16、P21的表达情况,同时检测HeLa细胞衰老和端粒酶活性。结果转染后可见flag的表达及htert的表达降低及P16、P21的表达升高,细胞衰老增加,增殖减弱及端粒酶活性的降低。结论在子宫颈癌细胞株HeLa中Grim-19具有调控端粒酶活性和细胞衰老的作用。

腺病毒介导GRIM19对恶性胶质瘤CHG-5细胞增殖及分化的影响

目的观察增强外源性GRIM19(genes associated with retinoid-IFN-induced mortality 19)基因表达对恶性胶质瘤CHG-5细胞生物学特性的影响,初步探讨其机制。方法利用已成功构建的Ad-GRIM19腺病毒感染CHG-5细胞,通过形态学、细胞生长曲线、软琼脂克隆形成等观察增强GRIM19基因表达后CHG-5细胞形态、增殖和体外成瘤能力的变化,台盼蓝染色法检测细胞活力,Real-timePCR及Western blot检测STAT3与PCNA基因表达。结果Ad-GRIM19在体外感染CHG-5细胞后,明显改变CHG-5细胞生长形态,细胞增殖及体外成瘤减低,STAT3、PCNA基因表达下调。结论GRIM19过表达可显著抑制CHG-5细胞恶性表型,提示GRIM19基因在调控胶质瘤细胞分化程度及恶性生物学行为方面具有重要作用。

内生成团泛菌YS19对水稻乳熟期光合产物在旗叶、穗分配中的影响

从水稻植株中分离的内生成团泛菌YS19可以分泌4种激素类物质,分别是生长素(IAA)、细胞脱落酸(ABA)、赤霉素(GA_4)和细胞分裂素(CTK),其中,细胞分裂素有3种,即异戊烯腺嘌吟(iP)、玉米素核苷(ZR)和二氢玉米素核苷(HDZR),在水稻籽粒灌浆时期喷施YS19菌液后,观察到水稻内生成团泛菌可以调控光合产物在旗叶(源)、穗(库)中的分配,在水稻籽粒乳熟初期喷施YS19菌液对库的建成具有促进作用,而在水稻籽粒乳熟后期则具有抑制作用,其原因与YS19菌株产生的激素有关。

重组促凋亡蛋白TFAR19对CNE-1细胞凋亡影响的初步研究

目的探讨重组凋亡蛋白TFAR19对鼻咽癌细胞株CNE-1的促凋亡效应。方法将不同浓度的高纯度重组凋亡蛋白TFAR19分别和人类鼻咽癌细胞株CNE-1共同培养,通过细胞形态学观察,TUNEL检测及DNA片断化分析,观察TFAR19对细胞的促凋亡效应。结果不同浓度TFAR19蛋白均可促进细胞凋亡,加入5、10、15、20、30 mg/L的TFAR19蛋白后,鼻咽癌细胞株CNE-1的凋亡率分别是:15.26%、29.48%、37.11%、54.20%、72.36%。阴性对照组的细胞凋亡率为12.40%。结论TFAR19蛋白可直接进入CNE-1细胞并明显促进细胞凋亡,且呈剂量依赖性。

印迹基因H19对人绒毛膜上皮癌细胞JEG-3侵袭能力的影响

目的探讨印迹基因H19对滋养细胞侵袭能力的影响,以期从分子遗传学角度来阐明滋养细胞侵袭行为的调控机制。方法含人全长H19 cDNA重组真核表达质粒pRc/CMV经测序鉴定正确后,转染滋养细胞株JEG-3,观察其H19 mRNA表达和细胞侵袭力的变化。结果质粒转染JEG-3细胞的转染效率>50%,转染目的基因H19后mRNA表达较对照组显著升高;转染目的基因后JEG-3细胞穿膜细胞数明显少于未转染组和空载体转染组。结论H19基因过表达可抑制JEG-3的侵袭能力,为H19调控滋养细胞侵袭行为提供了直接的实验证据。

长链非编码RNA-H19对缺血缺氧条件下骨髓间充质干细胞生存和血管再生能力的影响

背景:课题组前期研究发现骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)移植后其在局部梗死组织中的生存力低下,形成新生血管的密度较低,在一定程度上影响了其治疗的效率。长链非编码RNA-H19(lncRNA-H19)被证实与骨髓间充质干细胞分化及血管形成密切相关。目的:体外观察lncRNA-H19对骨髓间充质干细胞在缺血缺氧条件下生存和血管再生能力的影响,并探讨其可能机制。方法:体外培养的骨髓间充质干细胞分为5组:MSCs+H19组、MSCs+H19对照组(MSCs+H19 NC组),MSCs+si-H19组、MSCs+si-H19对照组(MSCs+si-H19 NC组)和MSCs组。其中MSCs+H19组和MSCs+H19NC组分别予以转染lncRNA-H19及lncRNA-H19 scramble RNA阴性对照,MSCs+si-H19组和MSCs+si-H19NC组分别转染lncRNA-H19 siRNA及lncRNA-H19 siRNA scramble阴性对照,体外缺血缺氧条件(无血清,体积分数为1%O_2)下培养24 h,MTS法检测细胞增殖情况,TUNEL法检测细胞凋亡情况。取细胞培养基上清液分别刺激人脐静脉内皮细胞,观察血管形成情况。Western blot检测各组血管内皮生长因子A表达。结果与结论:(1)与MSCs组及MSCs+H19 NC组相比,MSCs+H19组增殖能力显著增强,凋亡显著减少,血管管腔样结构明显增多(P<0.01);(2)与MSCs组及MSCs+si-H19 NC组相比,MSCs+si-H19组增殖能力显著减弱,凋亡显著增加,血管管腔样结构明显减少(P<0.01);(3)与MSCs组及MSCs+H19 NC组相比,MSCs+H19组血管内皮生长因子A表达显著增高;(4)与MSCs组及MSCs+si-H19 NC组相比,MSCs+si-H19组血管内皮生长因子A表达显著减少;(5)结果表明,lncRNA-H19促进骨髓间充质干细胞在体外缺血缺氧环境下的生存并增强其血管形成能力,此作用可能与其上调血管内皮生长因子A表达相关。

COVID-19对武汉地区采供血的影响及预防措施

目的评估COVID-19疫情对武汉地区采供血工作的影响并制定应(急)对措施。方法收集武汉地区疫情期间2020年1月1日-1月22日,2020年1月23日-2月29日"封城"前后2个时间段期间的血液采集、供应和调剂数据,与去年同期数据应用SPSS 21.0统计学软件作比较分析。结果 2020年1月1日-2020年1月22日,武汉地区全血采集量8 059 U、较去年同期的9 628 U(P<0.05)下降了16.30%,单采血小板采集量4 563 U,较去年同期4 413 U(P>0.05)、增长了2.98%;1月23-2月29日,全血采血量511 U和采血人次287,均较去年同期下降数>90%;红细胞、血浆和血小板临床使用量分别为11 511 U、9 083 U和3 410 U,分别较去年下降63.99%、71.35%和51.11%;血液调剂量(U):红细胞1 1511、血浆6 145和血小板1 065,分别增加207.12%、-22.59%和600.66%。结论 COVID-19严重影响了武汉地区采供血工作;跨地区血液调剂是行之有效的应对策略。

长链非编码CDKN2B调控miR-19对慢性髓细胞白血病的影响

目的:探讨长链非编码CDKN2B调控miR-19的表达影响慢性髓细胞白血病细胞的生物学行为的方式及其机制。方法:q PCR检测不同白血病细胞中CDKN2B的表达情况;双荧光素酶报告基因检测CDKN2B与miR-19的相互作用;MTT增殖实验和流式细胞检测CDKN2B对HL-60细胞增殖和凋亡的影响;划痕愈合实验检测沉默CDKN2B后白血病HL-60细胞迁移能力的变化;Transwell侵袭实验检测沉默CDKN2B后白血病HL-60细胞侵袭能力的变化;划痕愈合实验和Transwell侵袭实验检测沉默CDKN2B后miR-19对HL-60细胞迁移和侵袭能力的影响;鬼笔环肽染色检测沉默MEG3后细胞骨架微丝微管形态变化;Western blot检测沉默CDKN2B后PI3K/AKT信号通路蛋白的表达情况。结果:在HL-60细胞中CDKN2B表达水平最低;CDKN2B能与miR-19的3'UTR特异性结合;过表达CDKN2B可以抑制HL-60细胞增殖能力,促进其凋亡行为;沉默CDKN2B可以增强白血病HL-60细胞侵袭和迁移能力;过表达CDKN2B后细胞骨架表现为伪足减少,运动能力减弱;肌动蛋白表达水平下调;过表达CDKN2B后PI3K/AKT通路蛋白表达情况相应下调。结论:CDKN2B可以靶向调节miR-19调控白血病细胞生物学行为。

苏云金杆菌辅助蛋白P19对杀虫晶体蛋白Cry11Aa表达的影响

苏云金杆菌以色列亚种的p19基因、cry11Aa基因和p20基因位于同一操纵子上,据推测辅助蛋白P19可能与Cry11Aa蛋白的晶体化相关。本研究利用穿梭载体pHT3101构建了两个重组质粒pHcy1和pHcy3,两质粒均携带cry11Aa基因,但后者完全缺失了cry11Aa基因上游的p19基因。将重组质粒电激转化至苏云金杆菌无晶体突变株4Q7中进行蛋白表达,SDS-PAGE结果表明在4Q7(pHcy1)和4Q7(pHcy3)中均能检测到正常表达的Cry11Aa蛋白,但单位体积培养液的Cry11Aa蛋白在辅助蛋白P19存在时的表达量明显高于其单独表达的表达量;透射电镜观察显示两菌株中的Cry11Aa蛋白形成了大小相近、形状相似的双梯形晶体;另外,生物测定结果表明重组菌株4Q7(pHcy1)和4Q7(pHcy3)对三龄致倦库蚊的杀虫活性没有显著性差异。该现象说明辅助蛋白P19的缺失对Cry11Aa蛋白的晶体形成和杀蚊活性没有影响,但P19作为分子伴侣在一定程度上帮助提高了Cry11Aa蛋白的表达水平。

泛素特异性蛋白酶19对烟熏诱导慢性阻塞性肺疾病大鼠模型骨骼肌萎缩的作用及机制

目的通过烟熏制备慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠模型,研究泛素特异性蛋白酶-19(USP-19)在COPD相关骨骼肌萎缩中的作用及机制。方法烟熏诱导大鼠COPD模型,观察肺及骨骼肌组织的组织形态学变化,利用蛋白质印迹法(Western blotting)及实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)观察骨骼肌细胞内USP-19、肌球蛋白重链(MHC)及丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)基因的表达情况。结果烟熏建立的大鼠COPD模型,大鼠肺组织呈肺气肿改变,烟熏12周时,每高倍镜视野下肌纤维数量增多40%,间接提示骨骼肌发生萎缩;骨骼肌细胞内MHC表达明显下调,与烟熏时间呈负相关;萎缩的骨骼肌细胞内USP-19基因的转录和表达均明显上调,与烟熏时间呈正相关,与MHC表达呈负相关;萎缩的骨骼肌细胞内MAPKs通路磷酸化水平明显增强(P<0.05)。结论 USP-19基因参与COPD模型鼠骨骼肌萎缩的发生,起负性调节作用,此作用可能通过MAPKs通路实现。

IL-19对哮喘模型大鼠气道平滑肌细胞增殖的影响

目的探讨IL-19对哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖的作用。方法通过对大鼠进行雾化卵清蛋白,制备哮喘模型大鼠。提取哮喘大鼠ASMCs进行培养,分别以1μg/L、10μg/L、100μg/L IL-19干预ASMCs生长。采用流式细胞仪、MTT法检测ASMCs增殖情况,观察不同浓度IL-19对ASMCs增殖的影响。结果与正常鼠相比,慢性哮喘大鼠ASMCs增殖明显,处于S期的细胞比例明显增高。经10μg/L、100μg/L IL-19干预后,慢性哮喘大鼠ASMCs处于S期的细胞比例减少,增殖亦减弱。且两组间比较有明显差异。而经1μg/L IL-19干预后,慢性哮喘大鼠ASMCs处于S期的细胞比例及增殖均无明显变化。结论一定浓度的IL-19可能抑制慢性哮喘大鼠ASMCs的增殖。