LncRNA CASC9靶向调节miR-195-5p/VEGFA轴对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响

目的探讨长链非编码RNA癌易感性候选基因(LncRNA CASC)9对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖、凋亡和迁移的影响及作用机制。方法实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测人OSCC组织与细胞中LncRNA CASC9表达,筛选最佳细胞系。体外培养OSCC细胞SCC15,将细胞分为空白对照(Control)组、si-CASC9组、si-NC组、miR-195-5p mimic组、miR-NC组、si-CASC9+NC inhibitor组、si-CASC9+miR-195-5p inhibitor组、miR-195-5p mimics+pcDNA组、miR-195-5p mimics+VEGFA组,qRT-PCR检测LncRNA CASC9、miR-195-5p表达,CCK-8法检测SCC15细胞增殖,流式细胞仪检测SCC15细胞凋亡,Transwell实验检测SCC15细胞迁移;Western印迹法检测SCC15细胞中血管内皮生长因子(VEGF)A、增殖细胞核抗原(PCNA)、半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3、基质金属蛋白酶(MMP)-9蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-195-5p与LncRNA CASC9、VEGFA的靶向关系。结果LncRNA CASC9在OSCC组织与细胞中表达较癌旁组织显著上调(P<0.05);抑制LncRNA CASC9表达或过表达miR-195-5p可显著抑制SCC15细胞增殖及迁移,促进细胞凋亡(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验显示,LncRNA CASC9、VEGFA与miR-195-5p存在靶向关系(P<0.05);抑制miR-195-5p表达可显著逆转抑制LncRNA CASC9表达对SCC15细胞增殖、凋亡及迁移的作用(P<0.05);上调VEGFA表达可显著逆转过表达miR-195-5p对SCC15细胞增殖、凋亡及迁移的作用(P<0.05)。结论LncRNA CASC9在OSCC组织与细胞中上调表达,抑制LncRNA CASC9表达可通过调节miR-195-5p/VEGFA轴抑制OSCC细胞增殖与迁移,促进细胞凋亡。

circPVT1靶向调控miR-195-5p/SOX9轴影响结肠癌细胞增殖、凋亡及上皮间质转化

目的:探究环状RNA浆细胞瘤变体易位1(circPVT1)靶向调控微小RNA-195-5p(miR-195-5p)/性别决定区Y框蛋白9(SOX9)轴对结肠癌细胞增殖、凋亡及上皮间质转化(EMT)的影响。方法:体外培养人正常结肠上皮细胞NCM-460、人结肠癌细胞系(SW480、HCT116、HCT29、LOVO、SW620)至对数期,将SW480细胞分为对照组(正常培养SW480细胞不进行转染)、空载质粒组(转染空载质粒)、circPVT1沉默组[转染circPVT1小干扰RNA(siRNA)质粒]、miR-195-5p过表达组[转染miR-195-5p模拟物(mimics)质粒]、SOX9沉默组(转染SOX9 siRNA质粒)、circPVT1沉默+miR-195-5p低表达组(转染circPVT1 siRNA和miR-195-5p siRNA质粒)。各组转染相应质粒后培养48 h。荧光定量PCR法检测NCM-460细胞、人结肠癌细胞系(SW480、HCT116、HCT29、LOVO、SW620)和各组SW480细胞circPVT1、miR-195-5p、SOX9 mRNA的表达;噻唑蓝和流式细胞仪分别检测各组SW480细胞增殖和凋亡;蛋白印迹法检测各组SW480细胞SOX9、凋亡和EMT相关蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验检测circPVT1与miR-195-5p、miR-195-5p与SOX9的靶向关系。结果:与NCM-460细胞比较,SW480细胞、HCT116细胞、HCT29细胞、LOVO细胞、SW620细胞中circPVT1、SOX9 mRNA表达显著升高,miR-195-5p表达显著降低(P<0.05);其中,SW480细胞中circPVT1、SOX9 mRNA表达最高,miR-195-5p表达最低;故选择SW480细胞进行后续实验。与对照组和空载质粒组比较,circPVT1沉默组circPVT1、SOX9 mRNA及蛋白表达显著降低,miR-195-5p表达显著升高(P<0.05);miR-195-5p过表达组miR-195-5p表达显著升高,SOX9 mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05);SOX9沉默组SOX9 mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05)。与对照组和空载质粒组比较,circPVT1沉默组、miR-195-5p过表达组、SOX9沉默组细胞增殖率、Bcl-2、Vimentin蛋白表达显著降低,凋亡率、Bax、E-cadherin蛋白表达显著升高(P<0.05)。与circPVT1沉默组比较,circPVT1沉默+miR-195-5p低表达组miR-195-5p、凋亡率、Bax、E-cadherin蛋白表达显著降低,SOX9 mRNA及蛋白、细胞增殖率、Bcl-2、Vimentin蛋白表达显著升高(P<0.05)。circPVT1与miR-195-5p、miR-195-5p与SOX9存在靶向调控关系。结论:沉默circPVT1可以靶向上调miR-195-5p表达,抑制SOX9表达,进而抑制SW480细胞增殖和EMT进程,促进其凋亡。

长链非编码RNA AFAP1-AS1靶向miR-195-5p对肝癌细胞生物学行为的影响

目的探讨长链非编码核糖核酸(lncRNA)AFAP1-AS1及微小核糖核酸-195-5p(miR-195-5p)对肝细胞癌(HCC)细胞生物学行为的影响。方法常规培养人HCC细胞系(HepG2、Hep3B、SMMC-7721、Bel7402、SK-hep1细胞)和正常人肝细胞(HL-7702细胞),用实时荧光定量PCR法检测AFAP1-AS1、miR-195-5p并筛选实验细胞。将对数生长期实验细胞随机分为si-AFAP1-AS1组、si-NC组,miR-195-5pmimics组、mimics-NC组,miR-195-5pinhibitor+si-NC组、miR-195-5p inhibitor+si-AFAP1-AS1组、inhibitor-NC+si-AFAP1-AS1组、inhibitor-NC+si-NC组,用Lipofectamine 2000试剂将相应质粒按照分组转染入细胞。用CCK-8实验、菌落形成实验检测细胞增殖能力,用流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期,用Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力,用双荧光素酶报告基因实验验证AFAP1-AS1与miR-195-5p的靶向关系。结果HCC细胞中AFAP1-AS1表达高于正常人肝细胞(P均<0.05),HCC细胞中miR-195-5p表达低于正常人肝细胞(P均<0.05)。由于SK-hep1细胞中AFAP1-AS1表达最高、miR-195-5p表达最低,因此,后续研究均采用SK-hep1细胞进行实验。与si-NC组比较,si-AFAP1-AS1组中AFAP1-AS1表达低、细胞增殖能力低、迁移和侵袭细胞少、G0/G1期细胞比例高、细胞凋亡率高(P均<0.05)。通过Starbase v3.0在线数据库预测发现,AFAP1-AS1与miR-195-5p有互补的结合位点。双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-NC组、miR-195-5p组共转染WT-AFAP1-AS1后相对荧光素酶活性比较差异有统计学意义(P<0.05),共转染MUT-AFAP1-AS1后相对荧光素酶活性比较差异无统计学意义(P>0.05)。与inhibitor-NC+si-NC组比较,si-NC+miR-195-5p inhibitor组细胞增殖能力高、迁移和侵袭细胞多、G_(0)/G_(1)期细胞比例低、细胞凋亡率低(P均<0.05),而si-AFAP1-AS1+miR-195-5p inhibitor组上述细胞生物学行为则相反。结论lncRNA AFAP1-AS1可能通过竞争性结合miR-195-5p参与调控HCC细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡等生物学行为。

长链非编码RNA FGD5-AS1调节miR-195-5p/PIM1轴对高糖诱导的心肌细胞损伤的影响

目的探讨长链非编码RNA FGD5反义RNA1(lncRNA FGD5-AS1)调节miR-195-5p/PIM1轴对高糖诱导的心肌细胞损伤的影响。方法将大鼠心肌细胞H9c2及人心肌细胞随机分为对照组、模型组、lncRNA FGD5-AS1过表达组、miR-195-5p inhibitor组、阴性对照组、lncRNA FGD5-AS1过表达+miR-195-5p mimics组,分组处理后检测其lncRNA FGD5-AS1、miR-195-5p和PIM1表达、增殖、凋亡、促炎性细胞因子水平。结果与对照组相比,模型组细胞lncRNA FGD5-AS1、PIM1 mRNA及蛋白表达、存活率,增殖率降低(P<0.05);miR-195-5p表达,凋亡率,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平升高(P<0.05);过表达lncRNA FGD5-AS1可逆转模型组细胞上述变化,上调miR-195-5p可减弱过表达lncRNA FGD5-AS1的逆转作用。结论过表达lncRNA FGD5-AS1可通过下调miR-195-5p增强PIM1表达,从而抑制高糖诱导的心肌细胞炎症反应,促进细胞存活,减轻细胞凋亡。

品质≠价格＋品牌——AOC 195P液晶显示器

无论是家庭还是商业用户，在购买IT产品时性价比始终的考虑的首要因素，没有良好的性价比就等于失去一半的竞争力，这点对于很多知名度不高的厂商至关重要。AOC冠捷作为显示器、液晶显示器和OEM供应商．长期以来给消费者的印象始终是价格低廉、性能一般．因此其市场地位一直没有逃脱中低端这个怪圈。不过随着AOC 195P液晶显示器的推出，也预示着其向专业领域的过渡。

重症坏死性胰腺炎患者血清lncRNA MEG3、miR-195-5p表达与病情严重程度及预后的关系

目的探讨血清长链非编码RNA MEG3、微小RNA(miR)-195-5p在重症坏死性胰腺炎患者中的表达及其与病情严重程度及预后的关系。方法选取2020年10月至2023年1月沧州市中心医院收治的122例急性胰腺炎患者为研究对象,根据病情严重程度将其分为重症坏死性胰腺炎患者(重症组,53例)和非重症坏死性胰腺炎(非重症组,69例),另根据预后结局将重症坏死性胰腺炎患者分为预后良好组(38例)和预后不良组(15例)。同时选取同期在该院的体检健康者50例为对照组。比较各组临床资料及血清lncRNA MEG3、miR-195-5p水平;采用Spearman相关分析血清lncRNA MEG3、miR-195-5p水平与急性生理学和慢性健康状况Ⅱ(APACHEⅡ)、Ranson评分的关系;采用多因素Logistic回归分析重症坏死性胰腺炎患者发生预后不良的影响因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析lncRNA MEG3、miR-195-5p对重症坏死性胰腺炎患者预后的评估价值。结果重症组和非重症组年龄、性别、体重指数、基础疾病及病因比较,差异无统计学意义(P>0.05),与非重症组比较,重症组APACHEⅡ、Ranson评分升高(P<0.05);与对照组比较,非重症组和重症组血清lncRNA MEG3、miR-195-5p水平降低(P<0.05),且重症组血清lncRNA MEG3、miR-195-5p水平低于非重症组(P<0.05);Spearman相关分析结果表明,AP患者血清lncRNA MEG3、miR-195-5p水平与APACHEⅡ、Ranson评分均呈负相关(P<0.05);多因素Logistic回归分析结果显示,APACHEⅡ、Ranson评分及血清lncRNA MEG3、miR-195-5p水平是影响重症坏死性胰腺炎患者预后不良的独立危险因素(P<0.05);ROC曲线结果显示,lncRNA MEG3、miR-195-5p单独评估重症坏死性胰腺炎患者预后不良的曲线下面积(AUC)分别为0.767、0.777,灵敏度分别为86.7%、80.0%,特异度分别为49.9%、45.8%,二者联合评估的AUC为0.982,灵敏度、特异度分别为86.7%、78.8%。结论血清lncRNA MEG3、miR-195-5p水平与重症坏死性胰腺炎病情严重程度及预后有关,二者可评估重症坏死性胰腺炎病情严重程度及预测预后。

LncRNA SNHG16通过调控miR-195-5p/MYB促进胃癌细胞增殖及迁移

目的探讨lncRNA SNHG16(SNHG16)对胃癌细胞增殖、迁移的影响及其分子调控机制。方法基于在线数据库检索SNHG16在胃癌组织中的表达情况并筛选SNHG16的下游靶基因。通过生物信息学方法分析、双荧光素酶报告基因实验验证SNHG16与miR-195-5p间相互作用关系。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测SNHG16、miR-195-5p和MYB在胃癌细胞(HGC-27、MKN-28)中的表达情况;敲低SNHG16检测miR-195-5p或MYB表达;过表达miR-195-5p检测MYB表达;蛋白质印迹分析(Western blot)检测各组中MYB的蛋白表达水平。敲低SNHG16或过表达miR-195-5p,通过细胞增殖及划痕实验分别检测胃癌细胞(HGC-27、MKN-28)增殖及迁移能力。结果LncRNA SNHG16在胃癌组织及胃癌细胞(HGC-27、MKN-28、MKN-45、NCI-N87)中表达升高。双荧光素酶报告基因实验结果显示,将psiCHECK2-SNHG16-WT和miR-195-5p mimic同时转染进HGC-27中,显著抑制了HGC-27细胞的荧光素酶活性。qRT-PCR及WB实验结果显示:敲低HGC-27、MKN-28细胞中SNHG16可上调miR-195-5p并抑制MYB在转录及翻译水平的表达;过表达HGC-27、MKN-28细胞中miR-195-5p可抑制MYB表达。CCK8增殖实验及细胞划痕实验结果表明:敲低SNHG16或过表达miR-195-5p均可抑制HGC-27、MKN-28细胞的增殖和迁移。结论LncRNA SNHG16可通过miR-195-5p调节MYB在胃癌细胞中的表达,SNHG16高表达可促进胃癌细胞增殖和迁移。

miR-195-5p靶向PAPPA对肺癌A549细胞增殖、迁移的影响及分子机制

目的探讨微小RNA-195-5p(miR-195-5p)靶向妊娠相关血清蛋白(PAPP)A对肺癌A549细胞增殖、侵袭和迁移的影响和分子机制。方法将A549细胞分为miR-NC组、miR-195-5p组、si-NC组、si-PAPPA组、miR-195-5p+pcDNA组、miR-195-5p+pcDNA-PAPPA组。实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肺癌A549细胞miR-195-5p与PAPPA mRNA表达,CCK-8检测A549细胞增殖活性,Western印迹检测PAPPA蛋白表达,Transwell检测细胞侵袭能力,划痕实验检测迁移能力,双荧光色素酶试验验证miR-195-5p与PAPPA的靶向关系。结果与人支气管黏膜上皮细胞BEAS-2B相比,miR-195-5p在肺癌A549细胞中的表达明显降低,PAPPA mRNA及蛋白表达明显增高(P<0.05)。过表达miR-195-5p后A549细胞的增殖、侵袭及迁移能力明显降低(P<0.05);与si-NC组相比,沉默PAPPA后A549细胞增殖、侵袭和迁移能力显著降低(P<0.05);PAPPA是miR-195-5p的靶基因;过表达PAPPA后部分逆转miR-195-5p对A549细胞增殖、侵袭及迁移的抑制作用。结论miR-195-5p在肺癌中表达减低,具有抑制肺癌细胞增殖、侵袭及迁移的作用,其分子机制是通过靶向PAPPA而发挥作用。

血清miR-195-5p和DRD1在妊娠期糖尿病合并高血压孕妇中的表达水平及意义

目的探讨血清miR-195-5p和DRD1在妊娠期糖尿病合并高血压孕妇中的表达水平及意义。方法前瞻性选取2022年2月至2023年1月在本院定期产前检查并分娩的GDM患者269例,根据患者是否并发HDP,将患者分为GDM组(n=171)和GDM-HDP组(n=98),另选取正常健康的孕妇100例作为对照组。采用葡萄糖氧化酶法测定空腹血糖,qRT-PCR检测血清中miR-195-5p和DRD1相对表达水平,观察对照组、GDM组及GDM-HDP组的miR-195-5p、DRD1及空腹血糖水平;观察不同疾病严重程度血清miR-195-5p、DRD1及空腹血糖水平;Logistic回归模型分析GDM合并HDP的影响因素;Spearman秩相关分析血清miR-195-5p、DRD1和空腹血糖的相关性,采用受试者工作特征曲线(ROC)分析血清miR-195-5p、DRD1在GDM合并HDP中的诊断价值。结果与对照组相比,GDM组和GDM-HDP组中miR-195-5p的水平明显降低(P<0.001),DRD1及空腹血糖水平明显升高(P<0.001);与GDM组相比,GDM-HDP组中miR-195-5p的水平显著降低(P<0.001),DRD1及空腹血糖水平显著升高(P<0.001);GDM-HDP组患者血清中miR-195-5p水平明显高于轻度子痫前期、重度子痫前期患者,轻度子痫前期患者血清miR-195-5p水平显著高于重度子痫前期患者(P<0.001);GDM-HDP组患者血清中DRD1及空腹血糖水平明显低于轻度子痫前期、重度子痫前期患者,轻度子痫前期患者血清DRD1及空腹血糖水平显著低于重度子痫前期患者(P<0.001);miR-195-5p是GDM合并HDP发生的保护因素(P<0.001),而DRD1和空腹血糖是GDM合并HDP发生的危险因素(P<0.001);miR-195-5p与空腹血糖呈负相关(r=-0.276,P<0.001),DRD1与空腹血糖呈正相关(r=0.309,P<0.001);血清miR-195-5p诊断GDM合并HDP的AUC值为0.826,95%CI为0.769~0.883,血清DRD1诊断GDM合并HDP的AUC值为0.884,95%CI为0.837~0.929,miR-195-5p和DRD1联合诊断AUC值为0.952,95%CI为0.924~0.981,miR-195-5p和DRD1联合检测的AUC值、灵敏度、准确性明显高于miR-195-5p和DRD1单独检测,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论GDM合并HDP患者血清中miR-195-5p明显降低,DRD1显著升高,与GDM合并HDP发生密切相关,且miR-195-5p和DRD1联合检测诊断GDM合并HDP时具有较高的临床价值。

IL-17通过抑制miR-195-5p表达促进子宫内膜癌细胞生长和转移

目的:探讨白细胞介素17(IL-17)对人子宫内膜癌细胞的活力、迁移和侵袭能力的影响及其潜在作用机制。方法:收集人子宫内膜癌组织和良性子宫病变组织,RT-qPCR法检测组织中IL-17和微小RNA-195-5p(miR-195-5p)的表达。以不同浓度IL-17干预人子宫内膜癌HEC-1-B细胞48 h,RT-qPCR法检测细胞中miR-195-5p表达。采用MTT和Transwell实验分别检测100μg/L IL-17干预或转染miR-195-5p mimics后HEC-1-B细胞的活力、迁移能力和侵袭能力改变;过表达miR-195-5p联合100μg/L IL-17干预,检测HEC-1-B细胞的活力、迁移能力和侵袭能力。结果:在人子宫内膜癌组织中,IL-17高表达而miR-195-5p低表达(P<0.05)。浓度为10、100和300μg/L的IL-17干预HEC-1-B细胞48 h后,miR-195-5p的表达水平显著降低。MTT和Transwell实验结果表明,100μg/L IL-17能够提高HEC-1-B细胞的活力、迁移能力和侵袭能力(P<0.05),而过表达miR-195-5p所得结果相反(P<0.05)。过表达miR-195-5p能够减弱IL-17对HEC-1-B细胞活力、侵袭和迁移的促进作用(P<0.05)。结论:IL-17在人子宫内膜癌组织中高表达。外源性IL-17能够促进人子宫内膜癌HEC-1-B细胞的生长、迁移和侵袭,这一作用可能与抑制miR-195-5p表达有关。

miR-195-5p靶向FGF2抑制子宫内膜癌HEC-1B细胞恶性生物学行为

目的:探讨miR-195-5p通过靶向FGF2抑制子宫内膜癌HEC-1B细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的分子机制。方法:HEC-1B细胞培养与转染完成后分为4组:HEC-1B组、miR-195-5p mimic组、p LV-FGF2组和miR-195-5p+FGF2组。q RT-PCR检测细胞miR-195-5p和FGF2 m RNA水平,荧光素酶实验验证miR-195-5p与FGF2的靶向关系,Western blotting检测FGF2表达水平,CCK-8法检测HEC-1B细胞增殖水平,流式细胞术检测HEC-1B细胞凋亡率,Transwell实验检测HEC-1B细胞侵袭能力,划痕实验检测HEC-1B细胞迁移能力。结果:与HEC-1B组相比,miR-195-5p mimic组miR-195-5p表达升高、FGF2 m RNA水平下降(均P<0.01);miR-195-5p可直接靶向FGF2。与HEC-1B组相比,miR-195-5p mimic组FGF2的蛋白表达水平下降,p LV-FGF2组FGF2的蛋白水平明显上升,且miR-195-5p+FGF2组FGF2的蛋白表达水平低于p LV-FGF2组(均P<0.01)。miR-195-5p mimic组细胞增殖水平低于HEC-1B组,p LV-FGF2组细胞增殖水平高于HEC-1B组(均P<0.01)。与HEC-1B组相比,miR-195-5p mimic组细胞凋亡率增加,p LV-FGF2组细胞凋亡率降低,且miR-195-5p+FGF2组细胞凋亡率高于p LV-FGF2组(均P<0.01)。与HEC-1B组相比,miR-195-5p mimic组每个视野下的侵袭细胞数和划痕愈合率下降,p LV-FGF2组每个视野下的侵袭细胞数和划痕愈合率上升,且miR-195-5p+FGF2组每个视野下的侵袭细胞数和划痕愈合率低于p LV-FGF2组(均P<0.01)。结论:miR-195-5p通过靶向FGF2抑制子宫内膜癌HEC-1B细胞的增殖、侵袭和迁移并促进细胞凋亡,其作为子宫内膜癌的治疗靶点。

MicroRNA-195-5p调节Bmpr1α表达对骨髓间充质干细胞成脂分化的影响

目的探讨miR-195-5p在补肾方含药血清干预大鼠原代骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cell,BM SC)中的表达及其对成脂分化的影响。方法体外贴壁法原代培养的大鼠BM SC细胞经流式细胞术、CD44和CD34免疫荧光染色鉴定后,与椎间盘软骨细胞和成骨细胞一起采用荧光定量RT-PCR方法检测细胞中rno-miR-195-5p的表达情况;采用荧光素酶报告基因实验验证骨形态发生蛋白受体-1α(Bmpr1α)是否为rno-miR-195-5p的靶基因,采用Western印迹法和油红O染色检测rno-miR-195-5p对Bmpr1α表达和BMSC成脂分化的影响。结果流式细胞术与免疫荧光分析显示所培养细胞具备BMSC特征。rno-miR-195-5p在补肾方含药血清干预的原代BM SC中表达明显升高(P<0.01),且在分化完成的软骨细胞和成骨细胞中高表达。双荧光素酶报告实验与Western印迹法证实Bmpr1α是rno-miR-195-5p的靶基因。转染rno-miR-195-5p mimics上调BM SC中rno-miR-195-5p可抑制Bmpr1α的表达(P<0.05),降低成脂分化能力;而转染rno-miR-195-5p inhibitor可显著增加BM SC中Bmpr1α的表达(P<0.01),增强成脂分化能力。结论补肾方含药血清干预BMSC上调rno-miR-195-5p,通过降低其靶基因Bmpr1α的表达而降低BMSC的成脂分化,改善骨质疏松症状。

miR-195-5p靶向调控ELMO2抑制IL-17诱导的胃癌细胞AGS侵袭和迁移

目的:研究miR-195-5p调控吞噬细胞运动蛋白2(ELMO2)对白介素17(IL-17)诱导的胃癌细胞AGS侵袭和迁移的影响和机制。方法:以胃癌细胞AGS作为实验对象,转染miR-195-5p mimics,给予IL-17处理,qRT-PCR方法测定细胞中miR-195-5p表达;Transwell小室测定细胞侵袭和迁移能力;Western blot测定细胞中E-cadherin、Vimentin蛋白表达水平。生物信息学软件预测miR-195-5p的靶基因可能为ELMO2,双荧光素酶系统鉴定靶向关系。在胃癌细胞AGS中共转染miR-195-5p mimics、pcDNA3.1-ELMO2,检测细胞侵袭和迁移能力变化。结果:IL-17处理后的胃癌细胞AGS中miR-195-5p表达水平下调,细胞侵袭和迁移能力升高,细胞中E-cadherin蛋白表达水平下降,Vimentin蛋白表达水平升高。转染miR-195-5p mimics后的细胞经过IL-17处理以后,细胞中miR-195-5p表达水平升高,细胞侵袭和迁移能力降低,细胞中E-cadherin蛋白表达水平升高,Vimentin蛋白表达水平降低。miR-195-5p靶向负调控ELMO2表达。pcDNA3.1-ELMO2能够提高转染miR-195-5p mimics后的细胞侵袭和迁移能力。结论:miR-195-5p靶向负调控ELMO2抑制IL-17诱导的胃癌细胞AGS侵袭和迁移。

重楼皂苷Ⅰ通过调控LncRNA CEBPA-AS1/miR-195-5p通路抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及促进细胞凋亡的初步研究

目的:探讨重楼皂苷Ⅰ(PPⅠ)是否通过调控长链非编码RNA CEBPA-AS1(LncRNA CEBPA-AS1)/微小RNA-195-5p(miR-195-5p)通路影响瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及凋亡。方法:原代培养人瘢痕疙瘩成纤维细胞,使用不同浓度的PPⅠ处理细胞,si-CEBPA-AS1、pcDNA-CEBPA-AS1分别转染至细胞;采用MTT检测细胞增殖;应用流式细胞仪检测细胞周期;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;采用qRT-PCR法检测LncRNA CEBPA-AS1、miR-195-5p的表达量;双荧光素酶报告实验检测LncRNA CEBPA-AS1与miR-195-5p的靶向关系。结果:与Control组比较,PPⅠ可明显降低细胞存活率、S期细胞比例、Bcl-2蛋白水平、LncRNA CEBPA-AS1的表达水平,提高G0/G1期细胞比例、凋亡率、miR-195-5p的表达水平,差异均有统计学意义(P<0.05)。与si-NC组比较,si-CEBPA-AS1组细胞存活率、S期细胞比例降低,G0/G1期细胞比例、凋亡率升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶报告实验证实LncRNA CEBPA-AS1可靶向调控miR-195-5p;转染pcDNA-CEBPA-AS1可明显逆转PPⅠ对细胞增殖、细胞周期及凋亡的作用。结论:重楼皂苷Ⅰ可能通过下调LncRNA CEBPA-AS1的表达及上调miR-195-5p的表达从而抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及促进细胞凋亡。

miR-195-5p通过靶向STAT3调控免疫抑制基因PD-L1参与卵巢癌增殖和侵袭的机制研究

目的探究微小RNA(microRNA,miR)-195-5p通过靶向STAT3调控免疫抑制基因程序性死亡受体-配体1(programmed cell death-ligand 1,PD-L1)参与卵巢癌增殖和侵袭的机制。方法通过双荧光素酶报告基因检测方法验证miR-195-5p靶向STAT3。将卵巢癌细胞系SKOV-3分为4组:对照组、mimic组、mimic+STAT3组和STAT3组。通过质粒转染技术过表达miR-195-5p和STAT3。qPCR和Western blot检测RNA或蛋白的表达水平。分别通过CCK-8法、Transwell实验检测各组的细胞活力、侵袭能力。通过荷瘤裸鼠实验在体内验证过表达miR-195-5p对肿瘤生长、STAT3和PD-L1的影响。结果 miR-195-5p直接靶向STAT3。过表达miR-195-5p抑制STAT3 mRNA和蛋白的表达水平(P<0.05),过表达STAT3显著逆转miR-195-5p对STAT3的抑制作用(P<0.05)。Mimic组的细胞活力和细胞迁移能力显著低于对照组(P<0.05),STAT3组的细胞活力和细胞迁移能力显著高于对照组(P<0.05),并且mimic+STAT3组的细胞活力和细胞迁移能力显著高于mimic组(P<0.05)。荷瘤裸鼠实验显示miR-195-5p组荷瘤裸鼠的肿瘤体积和质量均显著低于对照组(P<0.05)。miR-195-5p组荷瘤裸鼠的肿瘤组织中STAT3和PD-L1蛋白水平显著低于对照组(P<0.05)。结论 miR-195-5p可通过靶向STAT3抑制PD-L1的表达并抑制卵巢癌细胞生长、侵袭和免疫抑制反应。

HSF1基因缺失通过上调microRNA-195a-3p加速压力超负荷下心脏重构

目的:探讨热休克转录因子1(HSF1)调控微小RNA-195a-3p (miR-195a-3p)对心肌微血管内皮细胞血管新生功能的影响,旨在阐明HSF1基因缺失加重压力超负荷下心脏重构的病理分子机制。方法:压力超负荷动物模型采用小鼠主动脉弓缩窄(TAC),辅以心脏超声功能评价。在体实验分组为HSF1基因敲除(HSF1^(-/-))小鼠假手术组、C57BL/6野生型(WT)小鼠假手术组、HSF1^(-/-)小鼠TAC模型组和C57BL/6 WT小鼠TAC组;细胞实验分组为对照组、miR-195a-3p模拟物干预组和阴性对照microRNA(miR-NC)干预组。TAC术后4周,通过病理组织切片检测各组小鼠心肌肥厚(HE染色)和血管新生(CD31染色),小鼠心超检查心脏主要功能指标变化;通过生物信息软件TargetScan 6.2结合萤光素酶(luciferase)报告基因检测,以及Western blot验证,测定miR-195a-3p调控血管新生的下游分子靶点;并用miR-195a-3p诱导微血管内皮细胞,观察其对细胞成管能力的影响。结果:HSF1缺失会导致TAC诱导的小鼠左心室重构加重。芯片筛查结果表明HSF1缺失可促进心脏12种microRNAs表达上调,5种microRNAs在心肌微血管内皮细胞中表达显著升高,其中miR-195a-3p的增高具有统计学显著性。miR-195a-3p过表达可以有效抑制微血管内皮细胞CD31和血管内皮生长因子(VEGF)的表达,阻滞细胞形成管腔样结构。TargetScan 6.2预测miR-195a-3p的靶点为AMP活化蛋白激酶α2(AMPKα2),在微血管内皮细胞用miR-195a-3p模拟物干预可以有效抑制AMPKα2的表达,同时miR-195a-3p模拟物也抑制了CD31和VEGF的表达。结论:HSF1基因缺失导致的miR-195a-3p表达上调是加速压力超负荷下心脏重构的重要诱因,其机制可能是通过抑制AMPKα2介导的血管新生信号通路的激活。

miR-195-5p稳定表达的膀胱癌T24细胞系的构建及其功能鉴定

目的:构建miR-195-5p稳定表达的膀胱癌T24细胞系,探讨miR-195-5p在膀胱癌T24细胞中的表达及高表达miR-195-5p对细胞生长的影响。方法:Real-time qRT-PCR(quantitative reverse tran-scription PCR)方法检测miR-195-5p在膀胱癌5637、T24、SW780细胞中的表达。通过构建pSilencer-miR-195-5p重组质粒,将其稳定转染至T24细胞,筛选miR-195-5p稳定表达细胞系。应用MTT实验和流式细胞术分别检测T24细胞高表达miR-195-5p对细胞增殖、凋亡的影响。结果:miR-195-5p在3种膀胱癌细胞系中普遍低表达,稳定转染的T24细胞具有miR-195-5p高表达特性,与对照细胞相比,其增殖活力和抗凋亡能力明显减低。结论:成功构建了能稳定表达miR-195-5p的T24细胞系,miR-195-5p高表达可以抑制细胞增殖、促进细胞凋亡。miR-195-5p低表达可能参与膀胱癌发生发展。

LncRNA SNHG1下调miR-195-5p改善软骨细胞凋亡和炎症微环境

目的探讨长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因1(LncRNA SNHG1)和miR-195-5p在OA凋亡和炎症微环境中的作用及相关性。方法先检测OA患者与大鼠模型软骨组织和正常软骨组织中SNHG1和miR-195-5p的表达情况。再对体外软骨细胞进行培养,转染,建立OA细胞模型。建立大鼠OA模型,将大鼠分为对照组(n=10)、模型组(n=10)、模型组+SNHG 1干预(SNHG 1,n=10)、模型组+inhibitor干预(inhibitor,n=10)。最后收集软骨组织进行一系列细胞功能实验,研究SNHG1、miR-195-5p对OA软骨细胞凋亡、炎症、增殖的影响,并与体外实验比较。研究SNHG1和miR-195-5p的关系。注射SNHG1过表达质粒、miR-195-5p抑制剂探究对OA大鼠模型的体内影响。结果在OA组织中SNHG1的表达下调,而miR-195-5p的表达上调(P<0.001)。调高SNHG1或敲低miR-195-5p的表达可降低OA细胞凋亡率,改善炎性微环境,恢复细胞增殖能力(P<0.05)。得出SNHG1可充当miR-195-5p的分子海绵。SNHG1促进剂、miR-195-5p抑制剂能够减弱OA大鼠模型的凋亡与炎症反应。结论通过调节SNHG1-miR-195-5p轴,调高SNHG1或敲低miR-195-5p有利于改善软骨细胞的凋亡与炎症微环境,为OA进展机理提供了新见解。

干扰CASC9表达对结直肠癌细胞增殖、凋亡的影响及其与miR-195-5p/CCND1轴的关系

目的探讨长链非编码RNA癌症易感性候选基因9(CASC9)对结直肠癌细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其作用机制与miR-195-5p细胞周期蛋白D1(CCND1)轴的关系。方法取人正常结肠黏膜上皮细胞系NCM460和结直肠癌细胞系SW480、SW620、HCT-116,采用实时荧光定量PCR法检测四种细胞中的CASC9的表达量。将CASC9表达量最高的结直肠癌细胞分为CASC9干扰组和干扰对照组,CASC9干扰组转染shRNA-CASC9,干扰对照组转染sh-NC。采用CCK-8法检测两组细胞增殖情况,流式细胞术检测两组细胞凋亡率,实时荧光定量PCR法检测细胞中miR-195-5p、CCND1 mRNA表达。使用StarBase数据库预测CASC9与miR-195-5p、miR-195-5p与CCND1的潜在结合位点,采用双荧光素酶报告基因检测法进行验证。结果与NCM460细胞相比,SW480、SW620、HCT-116细胞CASC9表达升高,其中SW480细胞CASC9表达高于SW620、HCT-116细胞(P均<0.01)。选择SW480细胞用于后续实验,CASC9干扰组细胞增殖能力较干扰对照组降低(P<0.01),细胞凋亡率较干扰对照组升高(P<0.05),miR-195-5p表达升高、CCND1 mRNA表达降低(P均<0.01)。StarBase数据库分析表明,CASC9可靶向吸附miR-195-5p;CCND1为miR-195-5p下游靶蛋白。荧光素酶报告基因结果显示,CASC9可与miR-195-5p特异性结合(P<0.01)。结论CASC9在结直肠癌细胞中表达升高,其机制可能是CASC9作为miR-195-5p吸附海绵靶向调控CCND1表达,从而促进结直肠癌细胞的增殖并抑制其凋亡。

miR-195-3p在肾癌中的表达及其临床意义研究

目的研究miR-195-3p在肾癌与癌旁组织及肾癌细胞与正常细胞系中的表达差异,分析差异表达与患者临床病理特征间的关系,探究其临床意义。方法提取27例配对标本(组织及细胞系)的总RNA,经过逆转录、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测标本中miR-195-3p标本中的表达量,统计分析miR-195-3p在不同组织、细胞系间的表达差异及其与临床病理特征间的相关性。通过转染上调和下调miR-195-3p,并进行细胞增殖实验(MTT),评估miR-195-3p对肾癌细胞增殖的影响。结果 miR-195-3p在肾癌组织(18例,66.67%)及肾癌细胞系中的表达较癌旁组织及正常细胞系明显上调(P<0.05),miR-195-3p在肾癌中的表达量与患者的年龄、性别、癌组织类型、TNM分期、AJCC分期无明显相关性(P>0.05)。miR-195-3p在肾癌细胞系(ACHN、786-O)表达上调后促进肾癌细胞增殖,表达下调后抑制肾癌细胞增殖。结论 miR-195-3p在肾癌组织中明显升高,并且促进肾癌细胞增殖,提示其可能与肾癌的发生发展有一定关系。