重组CRM_(197)-4GnRH去势疫苗抗原分子的原核表达及免疫效果评价

通过大肠杆菌表达系统对CRM_(197)-4GnRH重组去势疫苗抗原进行表达,采用不同种类佐剂制备疫苗,研究其对大鼠的免疫去势作用,为获得1种免疫效果好、有效期长、生产成本低的促性腺激素释放激素(GnRH)免疫去势基因工程疫苗提供借鉴。采用白喉毒素无毒突变体(CRM_(197))与4拷贝GnRH串联,将CRM_(197)-4GnRH基因与表达载体连接,并通过优化试验确定大肠杆菌的最优表达条件,用SDS-PAGE和Western blot鉴定目标蛋白的表达情况。将融合蛋白与不同佐剂乳化,制备成9种测试疫苗后分别免疫大鼠,测定血清中GnRH抗体滴度和睾酮浓度。结果显示,重组大肠杆菌的最优表达条件为诱导时间表达5 h,培养基为LB液体培养基,IPTG诱导浓度为0.5 mmol/L;通过SDS-PAGE和Western blot试验,表明目标融合蛋白已成功表达;动物试验结果表明,重组疫苗水包油包水佐剂组、重组疫苗油包水佐剂组、GnRH+Th抗原(辅助型T细胞抗原)表位(G1抗原)油包水佐剂组测试疫苗免疫大鼠较其他组GnRH抗体滴度显著升高、睾酮浓度显著下降(P<0.05),表明这3种疫苗具有良好的免疫去势作用。研究结果为GnRH免疫去势疫苗的研制奠定了基础。

血清lncRNA HOTAIR、miR-197-3p水平与精神分裂症患者精神症状及认知功能的相关性

目的探讨血清长链非编码RNA-HOX转录本反义基因间RNA(lncRNA HOTAIR)、微小RNA-197-3p(miR-197-3p)水平与精神分裂症(SCZ)患者精神症状及认知功能的相关性。方法选取2021年4月—2023年3月广州医科大学附属脑科医院精神科诊治SCZ患者118例为研究对象(SCZ组),并选取同期健康体检者110例作为健康对照组。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测血清lncRNA HOTAIR、miR-197-3p水平,对参与者进行阳性与阴性症状量表(PANSS)评分和认知功能评价;Pearson、Spearman相关系数分析血清lncRNA HOTAIR与miR-197-3p水平及二者与精神症状、认知功能的相关性;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清lncRNA HOTAIR、miR-197-3p水平对SCZ的评估价值。结果与健康对照组比较,SCZ组血清lncRNA HOTAIR表达水平升高,miR-197-3p水平降低(t/P=9.859/<0.001、19.191/<0.001)。生物信息学预测,lncRNA HOTAIR与miR-197-3p存在结合位点。Pearson相关性分析结果显示,SCZ患者血清中lncRNA HOTAIR表达与miR-197-3p表达呈负相关(r=-0.543,P<0.001)。与健康对照组比较,SCZ组阳性症状、阴性症状、一般病理症状及总分均显著升高(t/P=31.623/<0.001、28.219/<0.001、48.918/<0.001、39.574/<0.001),TMT、BACS、WMS-III-SS、BVMT、HVLT、CPT以及SCWT中单次测验、颜色测验评分显著降低(t/P=6.520/<0.001、7.666/<0.001、4.114/<0.001、8.191/<0.001、5.902/<0.001、4.985/<0.001、13.060/<0.001、8.938/<0.001)。SCZ患者lncRNA HOTAIR水平与阴性症状、总分呈正相关(r/P=0.498/<0.001、0.507/<0.001),与TMT、CPT呈负相关(r/P=-0.476/<0.001、-0.485/<0.001);miR-197-3p与阴性症状、总分呈负相关(r/P=-0.408/<0.001、-0.453/0.009),与TMT、CPT呈正相关(r/P=0.449/0.001、0.517/<0.001)。血清lncRNA HOTAIR、miR-197-3p及二者联合预测SCZ发生的AUC分别为0.819、0.885、0.927,二者联合预测AUC显著高于各自单独预测(Z/P=4.580/<0.001、2.953/0.003)。结论SCZ患者体内血清lncRNA HOTAIR上调,miR-197-3p下调,与精神症状及认知功能相关。

不同病理类型及分期甲状腺癌组织中miR-197、miR-221和miR-222的表达及其临床意义

目的:观察不同病理类型及分期甲状腺癌组织中miR-197、miR-221和miR-222的表达,并分析其在甲状腺癌诊断中的意义。方法:回顾性分析2020年01月至2022年12月我院92例甲状腺癌患者临床资料,患者均进行甲状腺癌组织、癌旁组织病理检查,采用定量逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)测定miR-197、miR-221和miR-222表达水平,对比不同病理类型、分期等病理特征的甲状腺癌患者miR-197、miR-221和miR-222表达状况,并分析其在甲状腺癌诊断中的意义。结果:甲状腺癌组织中miR-197、miR-221、miR-222表达高于癌旁组织(t=14.696、14.004、15.351,P<0.05);淋巴结转移、未分化癌、Ⅲ-Ⅳ期的甲状腺癌患者miR-197、miR-221、miR-222表达分别高于未发生淋巴结转移、乳头状癌/髓样癌/滤泡癌、Ⅰ-Ⅱ期甲状腺癌患者(P<0.05)。经Logistic回归分析,结果显示,miR-197、miR-221、miR-222高表达是甲状腺癌患者发生淋巴结转移、发生未分化癌及是Ⅲ-Ⅳ期甲状腺癌的危险因素(OR>1,P<0.05)。结论:不同病理类型及分期甲状腺癌组织中miR-197、miR-221和miR-222的表达存在差异,三者将有助于判断甲状腺癌是否淋巴结转移、不同病理类型及临床分期。

miR-197在人口腔鳞状细胞癌中的表达及对细胞增殖的作用机制

目的探讨miR-197在人口腔鳞状细胞癌(OSCC)中的表达及对细胞增殖的作用机制。方法选取2015年3月—2019年3月在海南医学院第一附属医院选择手术切除病灶的100例OSCC患者的肿瘤组织及癌旁组织(距离病灶边缘超过2.5 cm),qRT-PCR检测miR-197在OSCC组织及细胞系CAL27中的表达,Western blotting检测JAK2在OSCC组织及细胞系中的表达。构建沉默miR-197表达的病毒载体(miR-197-siRNA)及miR-197-siRNA阴性对照(miR-197-siRNA-NC),转染CAL27细胞,以未处理的CAL27细胞作为空白对照;倒置显微镜观察转染miRNA-197后的细胞形态;流式细胞术、EdU标记实验、Transwell小室实验分别检测miR-197对CAL27细胞凋亡率、DNA合成能力、侵袭能力的影响;荧光素酶实验基因报告分析miR-197与JAK2的作用关系,Western blotting检测各组细胞中JAK2的表达。结果qRT-PCR结果显示,与癌旁组织相比,miR-197在OSCC组织中的表达明显升高,JAK2在OSCC组织中的表达明显降低(P<0.05)。与人正常口腔黏膜角化细胞株HOKs相比,miR-197在人OSCC细胞株CAL27中的表达明显上升,JAK2在CAL27中的表达明显下降(P<0.05);与miR-197-siRNA-NC组相比,miR-197-siRNA组贴壁细胞数量明显减少,胞质空泡样,细胞堆积明显增多,染色质固缩,核膜破损严重,线粒体空泡。流式细胞术、EdU标记实验、平板集落克隆实验、软琼脂集落形成实验结果表明,与miR-197-siRNA-NC组相比,miR-197-siRNA组细胞凋亡率明显增加,细胞内DNA合成明显受阻,细胞增殖和侵袭明显受到抑制,差异均具有统计学意义(P<0.05);荧光素酶实验基因报告分析结果证明,miR-197与JAK2具有靶向调控关系;Western blotting结果表明,与miR-197-siRNA-NC组相比,miR-197-siRNA组细胞中JAK2的表达明显升高(P<0.05)。结论miR-197在OSCC中呈高表达,下调miR-197可抑制OSCC细胞增殖,这可能与JAK信号通路有关。

非小细胞肺癌血清miR-197和miR-203的表达及意义

目的：检测外周血清miR-197、miR-203在非小细胞肺癌的表达及对非小细胞肺癌诊断的意义。方法：采用实时荧光定量PCR检测80例正常人和80例非小细胞肺癌患者血清中miR-197、miR-203的表达量,绘制ROC曲线分析其诊断非小细胞肺癌的价值。结果：miR-197和miR-203在NSCLC血清中均高表达,miR-197在两组中表达有差异[（4.23±0.38）vs（1.25±0.24）,P〈0.05],miR-203在两组中表达有差异[（3.32±0.21）vs（1.32±0.42）,P〈0.05]。miR-197诊断非小细胞肺癌的AUC值为0.83（95%CI：0.68-0.93）,而miR-203则为0.76（95%CI：0.60-0.87）。联合miR-197与miR-203诊断非小细胞肺癌的AUC值提高至0.93（95%CI：0.70-0.98）。结论：非小细胞肺癌外周血中miR-197、miR-203呈高表达,与NSCLC临床TNM分期、淋巴结转移关系密切。ROC曲线分析显示联合检测miR-197、miR-203特异度及灵敏度均可达90%,有望作为诊断NSCLC的潜在分子标志物。

肺癌患者血浆miR-197-3p和miR-361-3p表达的诊断评价

目的:评价血浆miR-197-3p和miR-361-3p用于肺癌诊断的价值。方法:采用实时定量PCR法检测57例肺癌患者和53例良性肺病患者血浆中miR-197-3p和miR-361-3p的表达水平。建立这两个血浆miRs的受试者工作特征(ROC)曲线评价其诊断肺癌的效果,并与血清癌胚抗原和细胞角蛋白19(Cyfra21-1)诊断效果进行比较。结果:miR-197-3p和miR-361-3p在肺癌患者血浆中的表达水平明显高于良性肺病患者(均P<0.001)。两指标诊断肺癌的ROC曲线下面积分别为0.908和0.869(均P<0.001)。血浆miR-197-3p表达与肺癌的病理组织学类型显著相关(P=0.011);而血浆miR-361-3p表达与肺癌的分化程度及临床分期相关(P=0.005和P=0.015)。血浆miR-197-3p和miR-361-3p测定诊断肺癌的敏感性(78.9%和71.9%)和准确性(81.8%和80%)高于血清癌胚抗原(42.6%和60%)和Cyfra21-1(25%和58.9%),两种miR的联合检测可较大程度提高诊断的敏感性(89.5%)和准确性(85.5%),但特异性略有下降。结论:血浆miR-197-3p和miR-361-3p可作为诊断肺癌的肿瘤标志物,诊断效果优于血清癌胚抗原和Cyfra21-1。

慢病毒介导的miRNA-197-3p-siRNA对喉癌细胞系Hep-2生物学行为的影响

目的通过构建慢病毒介导(lentivirus,LV)的miRNA-197-3p-siRNA,探讨下调miRNA-197-3p对喉癌细胞系Hep-2生物学行为的影响。方法针对目标序列合成特异性siRNA干扰片段并克隆入慢病毒载体,将重组miRNA-197-3p-RNAi-LV3转染喉鳞状细胞癌Hep-2。Hep-2细胞设为干扰组(miRNA-197-3p-siRNA,MI组)、阴性对照组(negative control,NC组)和空白对照组(blank,B组);分别采用聚合酶链反应方法检测miRNA-197-3p的表达情况;用CCK8法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭情况。结果 miRNA-197-3p-RNAi-LV3可显著降低miRNA-197-3p的表达。CCK8实验显示细胞增殖能力显著降低(P<0.05)。Transwell实验显示细胞侵袭能力明显减弱(P<0.05)。流式细胞仪检测表明转染后对Hep-2细胞周期及细胞凋亡均无明显影响(P>0.05)。结论 miRNA-197-3p-siRNA通过下调miRNA-197-3p的表达,可以抑制Hep-2细胞增殖,并降低其侵袭能力。

白喉毒素无毒变异体CRM_(197)的表达及其载体作用

目的表达白喉毒素无毒变异体CRM197,并考察其载体作用。方法利用基因工程技术在大肠杆菌BL21(DE3)中表达CRM197,用金属镍离子亲和层析纯化;以重组CRM197为蛋白载体,在EDAC的作用下,与活化的A群脑膜炎球菌荚膜多糖(GAMP)结合,制备GAMP-rCRM197结合物,免疫BALB/c小鼠,间接ELISA法测定血清中A群脑膜炎球菌多糖特异性IgG抗体,并分析其免疫原性。结果重组CRM197在大肠杆菌中主要以包涵体形式表达,表达量占菌体总蛋白的25%左右;Western blot证明重组CRM197具有良好的反应原性;各针接种后,结合物诱生的多糖特异性IgG水平均显著高于GAMP组和GAMP+rCRM197混合物组,具有较强的免疫原性;多次接种产生了免疫增强效应,重组CRM197具有载体蛋白的作用。结论已在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达了重组CRM197,以纯化的重组CRM197作为载体制备的GAMP-rCRM197结合物具有良好的免疫原性,为以重组CRM197为蛋白载体制备其他结合疫苗奠定了实验基础。

喉鳞癌中microRNA-197表达水平的研究

目的:检测喉鳞癌细胞株Hep-2中microRNAs(miRNAs)的表达谱,并测定喉鳞癌组织中miRNA-197(miR-197)的表达水平。方法:采用miRNAs芯片技术检测喉鳞癌细胞株Hep-2、正常人支气管上皮细胞株HBEAs-2B中miRNAs的表达,得到miRNAs表达谱。根据miRNAs芯片结果,挑选Hep-2中表达显著上调的miR-197,并采用实时定量逆转录聚合酶链反应(realtime quantitative reverse-transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)验证miR-197在20例喉鳞癌组织及10例癌旁正常组织中的表达。结果:miRNAs芯片结果表明,Hep-2细胞株中有166个miRNAs上调,如miR-197、miR-133b等;47个miRNAs下调,如miR-519d、miR-20b等。RT-PCR检测结果显示,miR-197在喉鳞癌组织中表达水平显著高于癌旁正常组织(P<0.05)。结论:miR-197在喉鳞癌中表达显著上调,可能作为喉鳞癌的特异性miRNA在喉鳞癌的发生发展过程中有重要作用。

白喉毒素突变体CRM197在白喉杆菌中的表达纯化

CRM197是一种白喉毒素突变体,第52位的甘氨酸突变为谷氨酸,作为载体蛋白广泛用于疫苗开发。将阐述一种新的生产CRM197方法。将合成的CRM197基因片段克隆到表达载体pCKM4.1中,表达质粒pCKM5.1电转化至大肠杆菌E.coli S17-1中,通过结合转移转化至白喉杆菌(ATCC?27010TM的白喉杆菌)中,载体上的导肽序列可以使得CRM197作为可溶性蛋白分泌到胞外表达,CRM197蛋白可占到菌体总蛋白的70%。增强对铁的调控,进一步优化培养基及发酵条件以提高产量。经过Q膜、硫酸铵沉淀、阴离子交换纯化步骤获得纯度达到95%的CRM197样品,提高了蛋白得率,节约了纯化时间和成本。

不同病理类型及分期甲状腺癌中miR-221 miR-222 miR-197和miR-346的表达研究

目的探讨不同病理类型及分期甲状腺癌中miR-221、miR-222、miR-197和miR-346的表达水平,为临床手术方式选择及术后治疗提供参考。方法选取2013年6月～2017年8月行甲状腺手术的40例甲状腺癌(乳头状癌、滤泡癌各20例)及癌旁正常甲状腺组织、20例良性甲状腺疾病组织,术中取材后,立即放入液氮中保存后转入-70℃保存。采用定量RT-PCR检测miR-221、miR-222、miR-197和miR-346在相应组织标本中的表达水平。结果对甲状腺癌,miR-221与miR-222的表达与患者的年龄、性别、最大肿瘤灶等无明显相关性(P>0.05),与TNM分期及淋巴转移情况相关(P<0.05);miR-197和miR-346的表达在20例甲状腺滤泡癌中均有明显升高(P<0.05),乳头状癌组织中未见显著变化(P>0.05)。miR-221与miR-222在良性甲状腺疾病组织表达量变化均不明显(P>0.05);但在甲状腺癌组织中的表达变化显著,差异均有统计学意义(P<0.05);对miR-197和miR-346在相应组织标本中的表达水平进行比较结果显示,良性甲状腺疾病组织中miR-197和miR-346表达没有明显变化(P>0.05);在20例滤泡癌组织中明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);在乳头状癌组织及癌旁正常组织中的均无明显变化(P>0.05)。结论不同病理类型及分期甲状腺癌中miRNA的表达可作为甲状腺癌早期诊断、淋巴结转移、复发及远处转移密切相关的预警分子,为甲状腺癌手术方式选择及术后指导治疗提供了重要依据。

miR197-p53途径在三阴性和激素受体依赖型乳腺癌中的研究

目的:探究miR197在三阴性和激素受体依赖型乳腺癌中的表达、作用机制以及预后。方法:收集健康女性(乳腺癌疑似患者活检后正常)乳腺样本(n=10),三阴性乳腺癌患者(n=40),激素受体依赖型[雌激素和(或)孕激受体阳性、人表皮生长因子受体-2(Her-2)阴性]乳腺癌患者(n=40)的肿瘤样本。通过荧光实时定量PCR检测三组样本的miR197表达。通过蛋白免疫印迹法(Western Blotting),检测正常女性和不同类型乳腺癌患者p53以及凋亡通路蛋白。结果:低表达miR197占三阴性乳腺癌患者的77.5%(31/40)、占激素受体依赖型乳腺癌的42.5%(17/40)的和正常女性的20.0%(2/10),分别P<0.05、P<0.005。miR197表达高的细胞p53的表达较低,低表达miR197细胞Caspase-3、Caspase-9表达增高,凋亡显著。结论:miR197-p53途径抑制细胞凋亡,与乳腺癌不良预后相关。

hsa-miR-197在子宫肌瘤中的表达及生物信息学特征分析

应用实时定量聚合酶链式反应(PCR)技术检测子宫肌瘤组织中的hsa-miR-197表达水平,并与配对正常子宫肌细胞对比。通过miRbase、UCSC、NCBI等在线数据库获取并分析hsa-miR-197序列保守性及其基因组特征。选择miRanda、MirTarget2及TargetScan三个在线数据库预测hsa-miR-197的靶基因并取交集以便后续分析。通过基因本体(GO)功能注释、GO富集分析和信号转导通路富集分析初步阐明,hsamiR-197靶基因参与调控的细胞功能与信号通路。hsa-miR-197的功能较广泛,参与肿瘤发生的多种生物学过程,提示hsa-miR-197可能与子宫肌瘤的发病机制密切相关。

基于MAX197的蓄电池监测管理测试仪设计及实现

设计了一套多通道电池单体电压监测显示系统,该系统下位机基于MAX197,上位机采用基于VB6.0开发的交互式可视化蓄电池组监测配组管理平台,下位机与上位机采用RS232实现串口通信。该系统是高精度的蓄电池动静态参数优化配组测试系统。实践证明,对进一步优化电池配组具有较好的参考价值。

MiR-197-3p/STAMP2对ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡及炎症应激的影响

目的探究miR-197-3p/前列腺六次跨膜蛋白(Six transmembrane protein of prostate,STAMP) 2对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡和炎症应答。方法用ox-LDL处理HUVEC复制内皮细胞损伤模型; RT-PCR检测miR-197-3p和STAMP2表达; ELISA检测细胞凋亡; Western blot用于检测STAMP2,Bax和Bcl-2的蛋白水平; ELISA检测HUVECs中细胞间黏附分子(ICAM)-1,血管内皮细胞黏附分子(VCAM)-1和E选择素(E-selectin)的表达水平;生物信息学预测miR-197-3p的靶基因;并采用双萤光素酶报告系统、qRT-PCR及Western blot验证miR-197-3p与STAMP2的靶向调控关系。结果 ox-LDL能明显上调miR-197-3p的表达(P <0. 05),同时降低STAMP2的表达(P <0. 05),且呈时间依赖性;下调miR-197-3p能够显著抑制ox-LDL诱导的细胞凋亡(P <0. 05),同时降低促凋亡蛋白Bax并增加抑凋亡蛋白Bcl-2(P <0. 05);抑制miR-197-3p明显降低ox-LDL诱导的炎症因子的表达(P <0. 05);此外,生物信息学预测提示STAMP2是miR-197-3p的靶基因,而且qRT-PCR及Western blot结果显示抑制miR-197-3p明显上调STAMP2 mRNA和蛋白水平(P <0. 05),从而证实miR-197-3p能够靶向调控STAMP2。结论 MiR-197-3p可以通过靶向调控STAMP2从而调节ox-LDL诱导的HUVECs凋亡及炎症应答,为动脉粥样硬化的靶向治疗提供理论基础。

高速A/D转换芯片MAX197应用

文中重点介绍A/D转换器MAX197的不同参考电压的电路接法,工作模式及编程要点,并给出其在微机系统中的应用实例。

A/D转换MAX197控制器的FPGA实现

文章利用FPGA器件设计一个A/D转换控制器,按照MAX197的时序直接对A/D的转换工作进行控制,从而完成模数转换。所有这些功能都采用VHDL语言进行描述。最后对改A/D转换进行了硬件综合和系统的仿真,实验结果表明该方法简单易行。功能的实现减轻了系统主CPU的负担,在一些大型系统中具有实际应用价值。

虚拟仪器中基于MAX197的智能卡研制

讨论了一款供虚拟仪器开发使用 ,基于MAX197的智能ISA插卡的研发。该智能卡具有 8路模拟量输入通道、8路开关量输入、8路开关量输出。采样率达 10 0kSPS ,分辨率为 12位。在板CPU为高性能单片机 80C32 0 ,可根据用户需求完成复杂的测量控制任务。很适合电力系统的测控自动化需求。此卡采用ISA系统总线作为PC机接口电路。功能完善 ,使用方便。此卡在虚拟数字示波器及电力系统数字距离保护中已成功运用。以RTDS(RealTimeDigitalSimulate)标定后的测量误差最大值为 0 .77%。

《水利水电工程测量规范》(SL197—97)亟待修订

《水利水电工程测量规范》(SL197—97)是在测绘新技术、新设备应用的起步阶段制定的。由于近年来测绘新技术、新设备发展迅速,因此《水利水电工程测量规范》在指导当前的测绘生产中显得非常滞后。另外,《水利水电工程测量规范》在编写、校对、印刷过程中存在一些错误,对指导测绘生产和保证测绘产品质量产生了不利的影响。因而,为了适应测绘新技术、新设备的应用和改正现行《水利水电工程测量规范》中的错误,必须尽快对其进行修订。

miR-197靶向调节CD82对结肠癌细胞侵袭转移的影响

目的探讨下调microRNA-197(miR-197)对结肠癌HCT116细胞侵袭转移能力的影响及其作用机制。方法将对数生长期HCT-116细胞随机分为miR-197反义寡核苷酸(inhibitor)组、无义序列阴性对照(NC)组、空白对照(Mock)组,采用脂质体介导转染法,将miR-197反义寡核苷酸(miR-197 inhibitor)转染HCT116细胞。运用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-197的表达水平;通过生物信息学预测miR-197靶基因,应用Western blot法检测CD82蛋白的表达;采用transwell小室实验检测HCT116细胞的侵袭、迁移能力的改变。结果miR-197反义寡核苷酸转染HCT116细胞后,inhibitor组miR-197的表达较NC组和Mock组明显降低(P<0.05);下调miR-197的表达后,inhibitor组的CD82蛋白表达较其余两组显著增加(P<0.05);转染miR-197反义寡核苷酸的HCT116细胞的侵袭与迁移能力inhibitor组较NC组、Mock组均降低(P<0.05)。结论下调结肠癌HCT116细胞中miR-197的表达能抑制肿瘤细胞的侵袭和转移,其机制可能与其靶点CD82表达增加有关,这将为结肠癌的治疗提供新的靶点。