SULT1A1蛋白表达和性激素含量与子宫肌瘤发病相关性的研究

目的:检测子宫肌瘤SULT1A1蛋白表达和性激素含量,分析其在子宫肌瘤发生、发展中的作用。方法:化学发光分析法测定30例子宫肌瘤患者、30例同年龄段健康女性以及10例因CINⅢ行全子宫切除术患者血清及组织匀浆中E2、P、T含量。Western Blot方法检测SULT1A1蛋白的表达,并采用Spearman进行等级相关分析。结果:肌瘤组血清E2含量明显低于健康女性组(P<0.05),其T含量则明显高于健康女性组(P<0.01),P含量各组无显著差异。肌瘤组织E2含量显著高于肌瘤包膜外子宫肌层组织及CINⅢ患者子宫肌层组织(P<0.001)、前二者P、T含量组间无显著差异。肌瘤组织中SULT1A1蛋白表达与肌瘤包膜外子宫肌层组织比较差异显著(P<0.05)。肌瘤组织,肌瘤包膜外子宫肌层组织和CINⅢ患者子宫肌层组织中SULT1A1蛋白相对含量与相应组织匀浆E2含量均为负相关,与相应血清E2含量无明显相关性。结论:子宫肌瘤的发生、发展与子宫肌瘤组织局部SULT1A1蛋白活性降低有关。

P450 1A1蛋白生物信息学分析

CYP1A1基因编码细胞色素P450 1A1蛋白。该蛋白是重要的活化多环芳烃类致癌物的主要酶类。本文对P4501A1蛋白的基本特性进行了初步预测和分析。通过分析其氨基酸的组成表明P450 1A1蛋白组成比例最高的为亮氨酸,占比10.2%。疏水性分析表明P450 1A1蛋白整体呈现为亲水性。利用PSORT对其进行亚细胞定位表明P450 1A1主要分布于细胞质中,这与大多数蛋白的分布一致。其后采用同源建模方法,构建了P450 1A1的三级结构模型,从预测结果来看,P450 1A1蛋白主要以α-螺旋为其主要结构。这些结果是对P450 1A1蛋白的初步分析,为更进一步地了解P450 1A1蛋白提供了帮助。

^(18)F-FDG PET/CT摄取值及血清载脂蛋白A1、谷胱甘肽对不同运动障碍亚型帕金森病的预测价值

目的:探讨^(18)F-脱氧葡萄糖(^(18)F-FDG)正电子发射断层扫描-计算机断层扫描(PET/CT)摄取值及血清载脂蛋白A1(Apo A1)、谷胱甘肽(GSH)用于不同运动障碍亚型帕金森病的预测价值。方法:选取2020年12月至2022年12月在临沂市人民医院就诊的84例帕金森病患者,根据国际运动障碍协会统一帕金森病评定量表(MDS-UPDRS)将患者分为震颤为主型(TD)组(50例)和姿势不稳或步态障碍型(PIGD)组(34例)。比较不同运动障碍亚型帕金森病患者^(18)F-FDGPET/CT的^(18)F-FDG摄取值、血清Apo A1及GSH水平,并通过受试者工作特征(ROC)曲线分析上述3项指标联合预测不同运动障碍亚型帕金森病的价值;验证^(18)F-FDG摄取值、血清Apo A1及GSH联合检测对不同运动障碍亚型帕金森病患者预测结果与患者实际亚型的一致性。结果:TD组丘脑的^(18)F-FDG摄取值显著低于PIGD组;TD组血清Apo A1水平显著高于PIGD组、TD组血清GSH水平显著高于PIGD组,差异有统计学意义(t=3.669、2.758、2.824,P<0.05);ROC曲线下面积(AUC)分析显示,丘脑^(18)F-FDG摄取值、Apo A1及GSH联合预测不同运动障碍亚型帕金森病的AUC为0.858;^(18)F-FDG摄取值、血清Apo A1及GSH联合对不同运动障碍亚型帕金森病患者预测结果与患者实际亚型的一致性较高(Kappa=0.804)。结论:^(18)F-FDG PET/CT摄取值、血清Apo A1及GSH联合应用对不同运动障碍亚型帕金森病有较好的的预测价值。

miR-137通过靶向MCL1和谷氨酰胺转运SLC1A5调节肺癌细胞的铁死亡机制

目的 探讨miR-137通过靶向髓系白血病1蛋白(MCL1)和谷氨酰胺转运蛋白溶质载体家族A1成员(SLC1A)5调节肺癌细胞铁死亡的机制。方法 非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系A549从美国典型培养物保藏中心获得。培养基均补充有10%胎牛血清(FBS),在37℃的含5%CO_(2)的潮湿空气中孵育。培养细胞以进行miR-137载体转染,直至细胞融合度达到70%~80%。将培养细胞分为对照组、miR-137转染组和miR-137沉默组。通过实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)分析细胞MCL1和SLC1A5、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)4 mRNA表达。通过双重荧光素酶报告基因测定miR-137与MCL1和SLC1A的靶向作用。通过铁测定试剂盒测量每个细胞系中的Fe2+浓度。通过线粒体超氧化物(MitoSOX)指示剂测量了细胞中MitoSOX的产生。通过相应试剂盒检测活性氧(ROS)、还原型谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)水平。通过流式细胞仪检测细胞凋亡。通过Transwell法测定miR-137对细胞迁移、侵袭的影响。结果 miR-137沉默组较miR-137转染组和对照组MCL1、GPX4和SLC1A5 mRNA表达显著升高(P<0.05),miR-137转染组较对照组MCL1、SLC1A5和GPX4 mRNA表达显著降低(P<0.05)。与对照组相比,miR-137转染组显著降低了用Wt-SLC1A5和Wt-MCL1载体共转染的NSCLC细胞中的荧光素酶活性(P<0.05),而Mut-SLC1A5和Mut-MCL1模拟共转染荧光素酶活性酶无显著变化(P>0.05)。miR-137沉默组较miR-137转染组和对照组Fe2+浓度、MitoSOX浓度显著降低,线粒体相对膜电位显著升高(P<0.05),miR-137转染组较对照组Fe2+浓度、MitoSOX浓度显著升高,线粒体相对膜电位显著降低(P<0.05)。miR-137沉默组较miR-137转染组和对照组ROS和MDA浓度显著降低,GSH浓度显著升高(P<0.05),miR-137转染组较对照组ROS和MDA浓度显著升高,GSH浓度显著降低(P<0.05)。24、48和72 h时,miR-137转染组较miR-137沉默组和对照组细胞凋亡率显著升高(P<0.05),72 h时miR-137沉默组较对照组细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。miR-137沉默组较miR-137转染组和对照组细胞迁移、侵袭数量显著增多(P<0.05),miR-137转染组较对照组细胞迁移、侵袭数量显著减少(P<0.05)。结论 miR-137可以靶向调控SLC1A5和MCL1,诱导肺癌细胞铁死亡,从而促进细胞凋亡。

舒心饮对冠心病患者脂代谢及三磷酸腺苷结合盒转运体蛋白A1／G1表达的影响

目的 探讨舒心饮对冠心病患者脂代谢及巨噬细胞三磷酸腺苷结合盒转运体蛋白A1/G1（ABCA1/ABCG1）表达的影响.方法 选取浙江嘉兴市中医医院2013年10月至2015年10月心内科门诊和住院的冠心病患者60例,按随机数字表法分为观察组及对照组,每组30例.两组均给予西药常规治疗,观察组在西药常规治疗基础上服用舒心饮（药物组成：黄芪30 g、党参15 g、麦冬15 g、生地黄9 g、熟地黄9 g、枸杞15g、桑寄生15g、葛根9 g）,对照组仅给予西药常规治疗,两组均连用14d.检测两组患者治疗前后总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）的变化及巨噬细胞ABCA1和ABCG1的mRNA和蛋白表达水平.结果 治疗后观察组TC、LDL-C水平均明显低于对照组[TC （mmol/L）：3.72±0.58比3.38±0.66,LDL-C（mmol/L）：2.39±0.68比2.05±0.59,均P＜0.05],HDL-C明显高于对照组（mmol/L：1.30±0.15比1.15±0.35,P＜0.05）.反转录-聚合酶链反应（RT-PCT）显示,观察组治疗后ABCA1和ABCG2的mRNA表达均高于对照组[ABCA1 mRNA （2-ΔΔCt）：1.05±0.12比0.92±0.16,ABCG1 mRNA（2-ΔΔCt）：0.95±0.11比0.89±0.08,均P＜0.05].蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）显示,观察组治疗后ABCA1和ABCG1的蛋白表达高于对照组[ABCA1（灰度值）：0.48±0.09比0.64±0.17,ABCG1（灰度值）：0.37±0.21比0.61±0.12,均P＜0.05].结论 舒心饮可以影响冠心病患者的脂代谢,其机制可能与上调巨噬细胞ABCA1和ABCG1的表达有关.

血清前白蛋白、C反应蛋白、载脂蛋白A1对重症肺炎患者生存状况的评估价值

目的探讨血清前白蛋白(Prealbumin,PAB)、C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、载脂蛋白A1(Apolipoprotein-A1,ApoA1)对重症肺炎患者生存状况的评估价值。方法将重症肺炎患者根据入院治疗30 d后的生存情况分为恶化组和非恶化组,回顾性分析两组患者入院1周内血清PAB、CRP、ApoA1动态变化情况。结果血清PAB入院后5 d,恶化组(165.47±33.79)mg·L-1,非恶化组(193.36±40.81)mg·L-1,两组具有明显差异(P<0.05);血清CRP水平入院后1 d开始,恶化组(27.13±7.64)mg·L-1,非恶化组(22.84±6.24)mg·L-1,两组具有明显差异(P<0.05);血清ApoA1水平从入院后3 d,恶化组(1.15±0.33)g·L-1,非恶化组(1.37±0.39)g·L-1,两组具有明显差异(P<0.05)。结论血清PAB、CRP、ApoA1对重症肺炎患者生存状况具有良好的评估价值,可结合患者住院时间及病情进行综合分析。

嗜乳脂蛋白3A1(BTN3A1)促进结核杆菌耐热抗原诱导的人外周血Vγ9Vδ2 T细胞活化增殖

目的初步探讨嗜乳脂蛋白3A1(BTN3A1)在结核杆菌耐热抗原(MTB-HAg)诱导的人外周血Vγ9Vδ2 T细胞活化增殖中的作用。方法人外周血单个核细胞(PBMC)先加BTN3A1阻断性抗体作用3 h,再分别用MTB-HAg和磷酸类抗原(PAg)刺激培养24 h后收集细胞,用流式细胞术检测Vγ9Vδ2 T细胞中CD69表达;或刺激20 h后收集细胞,检测Vγ9Vδ2 T细胞中1型辅助性T(Th1)细胞因子γ干扰素(IFN-γ)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)产生细胞比例;或刺激后,在含白细胞介素2(IL-2)培养液中培养10 d后,收集细胞检测Vγ9Vδ2 T细胞扩增比例及增殖活性。结果MTB-HAg刺激后,Vγ9Vδ2 T细胞中CD69平均荧光强度和阳性细胞比例在BTN3A1阻断组均明显下降(为刺激组的13.84%和43.00%);而PAg阻断组的CD69平均荧光强度和阳性细胞比例显著被抑制(为刺激组的3.10%,4.47%和9.53%,10.91%)。MTB-HAg刺激后Vγ9Vδ2 T细胞中IFN-γ和TNF-α产生细胞比例在BTN3A1阻断组显著减少,Vγ9Vδ2 T细胞扩增数量和细胞增殖活性在BTN3A1阻断组也显著减少或降低。与PAg阻断组明显被抑制的结果相似。结论BTN3A1促进MTB-HAg诱导的外周血Vγ9Vδ2 T细胞活化增殖。

叉头盒蛋白A1(FOXA1)在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的研究叉头盒蛋白A1(FOXA1)在良性乳腺肿瘤、乳腺癌及癌旁组织中的表达,以及与临床资料的相关性。方法采用免疫组织化学方法,检测54例乳腺癌、54例癌旁组织及20例良性乳腺肿瘤(10例纤维腺瘤和10例导管内乳头状瘤)中FOXA1的表达。分析FOXA1的表达与患者年龄、癌组织雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、细胞增殖核抗原KI67、人类表皮生长因子受体2(HER2)、肿瘤分期、瘤体大小以及阳性淋巴结数等临床资料的关系。结果 FOXA1在乳腺癌组织中的阳性率为68.5%(37/54),癌旁组织中的阳性率为88.9%(48/54),良性乳腺肿瘤中的阳性率为100%(20/20),FOXA1在乳腺癌与癌旁组织间、乳腺癌与良性乳腺肿瘤间的表达差异有统计学意义(P<0.05),而在癌旁组织与良性乳腺肿瘤间的表达差异无统计学意义(P>0.05);FOXA1的表达与组织学分级、Ki67呈负相关,与ER、PR呈正相关;FOXA1表达在各近似分子亚型间、Luminal A亚型与非Luminal A亚型间、Luminal亚型与非Luminal亚型之间有差异性。结论乳腺癌组织中普遍表达FOXA1,Luminal A型中最高,提示FOXA1可能成为乳腺癌患者预后良好的标志物之一。

WASH通过与核内不均一核糖核蛋白A1(hnRNP A1)的相互作用调控选择性剪接和基因转录

目的探讨Wiskott-Aldrich综合征蛋白和富含脯氨酸同源物(WASH)与核内不均一核糖核蛋白A1(hnRNP A1)的相互作用及其生物学功能.方法利用质谱鉴定、免疫共沉淀技术,研究WASH复合体核心成员WASH/FAM21与hnRNP A1相互作用.使用实时定量PCR检测WASH沉默细胞与对照细胞中端粒长度.使用RNA-Seq检测WASH沉默细胞与对照细胞转录谱.结果质谱鉴定结果显示包括hnRNP A1在内的多种hnRNP家族成员与FAM21-d219N相互作用.免疫沉淀结果验证了内源WASH/FAM21与hnRNP A1的相互作用.WASH沉默并未对端粒的相对长度产生影响,但明显提高了外显子跳跃的数量,并且影响包括部分核因子κB(NF-κB)靶基因在内的数百基因的转录.结论细胞核内的WASH可与hnRNP A1相互作用,参与选择性剪接和基因转录的调控.

牦牛B细胞淋巴瘤2相关蛋白A1的原核表达及体外活性

为研究牦牛(Bos grunniens) B细胞淋巴瘤2相关蛋白A1 (B cell lymphoma 2 related protein A1, BCL2A1)的原核表达及体外活性。采用原核表达载体构建、细胞划痕实验、CCK-8法、透射电镜和实时荧光定量PCR等方法。结果显示,成功构建pET-32a-BCL2A1重组质粒,表达获得约33 kDa的BCL2A1。终浓度为0.02μg/mL、0.2μg/mL、2.0μg/mL的BCL2A1均能使HepG2细胞活性显著降低(P <0.05),并在一定程度上抑制细胞的迁移。2.0μg/mL BCL2A1导致HepG2细胞核固缩,胞质中高密度物质聚集,溶酶体吞噬形成致密的凋亡小体等。此外,细胞凋亡相关基因CASP9的mRNA水平在2.0μg/mL组中显著上调(P <0.05),CASP8的mRNA水平在0.2μg/mL和2.0μg/mL组中显著上调(P <0.05),而CASP3和Cyt c的mRNA水平在3个浓度处理组均显著上调(P <0.05)。这提示BCL2A1可能通过凋亡途径影响HepG2细胞活性,为进一步探索牦牛BCL2A1基因功能积累资料。

黏蛋白5B上调高迁移率族蛋白组A1促进乳腺癌细胞侵袭转移

目的探讨黏蛋白5B(mucin 5B,MUC5B)抑制乳腺癌细胞侵袭转移的作用及可能的分子机制。方法在多个数据库中统计MUC5B在乳腺癌组织中的表达量,qRT-PCR方法检测MUC5B在正常乳腺上皮细胞和多种乳腺癌细胞中的表达量。在乳腺癌细胞中过表达和敲低MUC5B,transwell实验检测上述细胞的侵袭能力。生物信息学预测结合实验验证MUC5B对高迁移率族蛋白组A1(human high mobilitygroup A1,HMGA1)的调控作用。在乳腺癌细胞中干预MUC5B,同时干预MUC5B和HMGA1,transwell实验检测上述细胞的侵袭能力。结果UALCAN结合The human Protein Altas在线数据库证实MUC5B在乳腺癌组织中的表达量显著高于其在正常组织中的表达量。qRT-PCR结果显示MUC5B在乳腺癌中的表达量远高于其在正常上皮细胞MCF-10A中的表达量。在乳腺癌细胞MCF-7中过表达MUC5B,transwell实验发现MUC5B可明显增加该细胞的侵袭能力;在乳腺癌细胞MDA-MB-231中敲低MUC5B,则该细胞的侵袭能力大大降低。最后,生物信息学结合qRT-PCR和WB实验证实MUC5B可显著上调HMGA1的表达。在MCF-7细胞中,敲低HMGA1可逆转该细胞因MUC5B而增加的侵袭能力;相似的,在MDA-MB-231细胞中,过表达HMGA1可逆转该细胞因敲低MUC5B而减弱的侵袭能力。结论MUC5B通过上调HMGA1促进乳腺癌细胞侵袭。

Premier Hb9210糖化血红蛋白分析仪性能验证

目的对Premier Hb9210糖化血红蛋白分析仪的分析性能进行验证,以了解该检测系统在本室能否达到厂家声明的分析性能指标以及我国《糖化血红蛋白实验室检测指南》的要求,是否适用于我室进行临床检测。方法参考美国临床实验室标准化协会（CLSI）EP15-A2文件、《临床化学设备线性评价指南》、《临床实验室检验项目参考区间的制定》[4]及仪器说明书对该仪器配套检测系统的准确度、携带污染、精密度、线性范围、参考区间按顺序进行验证。结果准确度验证全部结果相对偏差满足厂家声明要求,绝对偏差满足《糖化血红蛋白实验室检测指南》的要求,配对资料T检验A组与B组、A组与C组,B组与C组P值分别为0.718、0.673、0.936,两者差异无统计学意义。携带污染验证高-低标本检测值（x±s）为5.02±0.057,CV%为1.14%;低-低标本值（x±s）为4.93±0.069,CV%为1.39%;携带污染为0.09,误差限度为0.21。精密度验证3个不同水平的Hb A1c样本,检测结果（Hb A1c%,x±s）为4.78±0.077、7.93±0.086、11.56±0.083,不精度（CV%）分别为1.61、1.08、0.72不精密度分别为0.82%,0.72%和0.79%。糖化血红蛋白浓度在4.0%~18.7%内回归分析呈线性,直线回归方程：y=1.005x-0.142,R2=1≥0.95。结论 Premier Hb9210糖化血红蛋白分析仪在我室能达到厂家声明的分析性能指标以及《糖化血红蛋白实验室检测指南》的要求,适用于我室临床检测糖化血红蛋白A1c（Hb A1c）。

乙醛脱氢酶ALDH4A1的生物信息学分析

目的研究乙醛脱氢酶1A1(ALDH1A1)蛋白的结构与功能,进一步探究其在动脉粥状硬化发生发展及临床病理因素的关系。方法利用Protparam、ProtScale、NetPhos3.1、YinOYang 1.2 Server、NetNGlyc 1.0Server、SOPMA及SWISS-MODEL等在线软件和生物信息学手段对ALDH1A1蛋白的理化性质、亲疏水性、磷酸化位点、糖基化位点及二、三级结构等生物学特性进行了系统分析,并利用Clustal×2和MEGA7.0软件对ALDH1A1蛋白进行同源性分析和系统进化分析。结果ALDH1A1蛋白由563个氨基酸组成,是亲水碱性蛋白,不稳定指数为41.65;在体外哺乳动物中的半衰期为30h;共有44个可能的磷酸化位点和8个可能的糖基化位点;无跨膜螺旋区与信号肽;二级结构预测结果显示,ALDH1A1蛋白中α-螺旋结构与无规则卷曲结构占比都较高,而β-转角结构占比很少,只有4.97%;同源性与进化性分析显示,与褐家鼠序列一致性最高的是黄金仓鼠,它们的亲缘关系最近。结论ALDH4A1进化性高度保守功能重要,有助于揭示蛋白功能、靶向药物设计,有助于动脉粥样硬化治疗提供理论参考。

ANXA1在胃癌中的表达及临床意义

目的检测胃癌组织中膜联蛋白1（ANXAl）的表达，探讨ANXAl与胃癌发生发展的关系。方法采用免疫组化法（immunohistochemistry，IHC）对20例胃炎组织和80例胃癌组织中的ANXAl表达情况进行检测，并分析ANXA1表达与胃癌临床病理特征之间的关系。结果在80例胃癌组织中，ANXAl阳性表达率为90．0％（72／80），明显高于胃炎组织的表达（20．O％，4／20）；ANXAl的表达与胃癌的淋巴结转移之间差异具有统计学意义（P〈O．01），而与患者年龄、性别、胃壁侵犯、分期、分化无统计学意义。结论ANXAl高表达在胃癌的发生发展中可能起着重要作用。

人脑星形细胞瘤中EphA2-ephrinA1、CD105的表达及与预后的关系

目的检测酪氨酸激酶受体EphA2及配体ephrinA1在人脑星形细胞瘤中的表达,并探讨其与脑星形细胞瘤预后的关系。方法采用免疫组织化学法检测55例手术切除人脑星形细胞瘤组织及15例正常脑组织中EphA2、ephrinA1的表达情况,并采用CD105抗体标记微血管内皮细胞,计算微血管密度(MVD)。结果 EphA2(51/55)、CD105-MVD(34.26±12.61)在星形细胞瘤中阳性表达明显高于正常脑组织,两者差异有统计学意义(P<0.01);而且随着星形细胞瘤病理级别越高,EphA2及CD105-MVD蛋白染色强度和阳性细胞数均明显升高,ephrinA1则具有相反的趋势,随星形细胞瘤级别越低ephrinA1表达越高。EphA2表达与CD105-MVD呈显著正相关(r=0.713,P<0.05),ephrinA1表达与CD105-MVD呈显著负相关(r=-0.772,P<0.05),EphA2的表达与ephrinA1的表达呈显著负相关(r=-0.912,P<0.05)。EphA2、CD105-MVD和ephrinA1均是重要的星形细胞瘤预后相关风险因子。EphA2、CD105-MVD阳性ephrinA1阴性的星形细胞瘤患者较三者均阳性或三者均阴性或EphA2、CD105-MVD阴性ephrinA1阳性的患者生存期明显缩短。结论 EphA2及CD105-MVD在星形细胞瘤中特异性高表达、ephrinA1特异性低表达与星形细胞瘤不良预后密切相关,EphA2和ephrinA1有望成为脑星形细胞瘤诊断和特异性靶向治疗及预后评估的新靶点。

HMGA1对肝细胞癌的增殖、迁移和细胞周期的作用影响

目的:探究HMGA1对肝癌细胞增殖、迁移及细胞周期的影响。方法:通过生物信息学、qRT-PCR、蛋白质印迹法分析HMGA1在正常肝组织与肝癌组织、正常肝细胞与肝癌细胞中的表达及其表达量与患者生存期的关系;通过GO和KEGG通路分析HMGA1及其相关基因在肝癌细胞生理活动中可能发挥的作用;MTT、克隆形成、Transwell实验及流式细胞术用于分析下调HMGA1对肝细胞癌的增殖、迁移、凋亡和细胞周期的影响。结果:与正常肝组织比较,肝癌组织HMGA1表达上调,且表达水平与患者生存期呈负相关;筛选得出451个正相关基因和398个负相关基因在TCGA-LIHC和GSE15765两个数据集中都具有统计学意义,KEGG和GO分析结果表明HMGA1及其相关基因参与组成细胞组分,并主要影响肿瘤细胞的分裂增殖、转录调控、氧化还原过程和代谢过程等;下调HMGA1抑制肝癌细胞的细胞活力、迁移,诱导细胞凋亡并阻滞细胞周期;敲低HMGA1使肿瘤体积缩小、重量减轻。结论:HMGA1可能作为原癌基因促进肝癌细胞的生长。

Annexin 1抑制BCG诱导的巨噬细胞RAW246.7细胞炎性应答及凋亡

目的建立体外结核分枝杆菌感染巨噬细胞模型,探讨膜联蛋白A1(ANXA1)对卡介苗(BCG)菌株诱导的RAW246.7细胞炎性反应及凋亡的调控作用。方法用BCG感染RAW246.7细胞。用RT-q PCR检测ANXA1、IL-6和TNF-αmRNA表达。Western blot检测ANXA1及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及caspase-3的表达;用MTT检测细胞存活率;用ELISA检测细胞的凋亡率;ELISA试剂盒检测细胞因子IL-6和TNF-α的含量。结果 ANXA1在BCG感染的巨噬细胞RAW246.7中明显下调(P<0.05),并呈时间依赖性。ANXA1高表达显著降低BCG刺激诱导的炎性细胞因子IL-6和TNF-α的表达水平(P<0.05)。此外,过表达ANXA1明显提高BCG感染的巨噬细胞的存活率(P<0.05),并抑制细胞凋亡,通过上调抑凋亡蛋白Bcl-2的表达同时下调促凋亡蛋白Bax的表达水平(P<0.05),并降低caspase-3的蛋白表达量(P<0.05)。结论 ANXA1能够抑制BCG刺激诱导巨噬细胞的炎性应答进程及凋亡,为结核病的临床研究和治疗提供了理论基础。

老年腔隙性梗死患者血清Hcy、ApoA1、HDL-C水平及相互关系

目的探讨老年腔隙性梗死(LI)患者血清Hcy、ApoA1、HDL-C水平及相互关系。方法选取2012-05—2013-05我院收治的70例老年LI患者作为为观察组,以同期体检的健康老年人70例作为对照组。所有入选者均进行血清Hcy、HDL-C和ApoA1水平测定,并分析三者之间关系。结果观察组患者血清Hcy水平明显高于对照组,而ApoA1和HDL-C水平明显低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。观察组患者血清Hcy水平与ApoA1和HDL-C水平之间呈明显的负相关性(r值分别为=-0.315、-0.328,P均<0.05),ApoA1和HDL-C水平之间呈明显的正相关性(r=-0.309,P<0.05)。结论血清Hcy在老年LI形成中起重要作用,与血清HDL-C和ApoA1水平之间的关系可能是其参与老年LI患者动脉粥样硬化的形成机制之一。

转移相关肺腺癌转录本1(MALAT1)促进缺氧诱导的肾小管间皮细胞转分化

目的研究长链非编码RNA转移相关肺腺癌转录本1(MALAT1)参与缺氧诱导的肾小管上皮细胞上皮间质转分化(EMT)调控的机制。方法 HK-2肾小管上皮细胞缺氧处理0、12、24、48、72 h,实时定量PCR检测MALAT1 mRNA和miR-100-3p水平。HK-2细胞分别感染特异性lncRNA慢病毒和miRNA慢病毒下调MALAT1和miR-100-3p,采用实时定量PCR检测MALAT1 mRNA和miR-100-3p水平,免疫荧光细胞化学染色检测上皮钙黏素(ECD)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅳ型胶原蛋白α1链(COL4A1)的表达。构建单侧输尿管梗阻(UUO)动物模型,设置单侧输尿管未结扎组(对照组)、结扎7 d组(UUO7 d组)、结扎3周组(UUO 3周组)、腺相关病毒(AAV)组。在UUO动物模型中,采用AAV感染下调MALAT1水平后,采用HE和Masson染色检测各组肾组织病变情况,采用免疫组织化学染色检测肾组织ECD和α-SMA的表达。结果在缺氧诱导的HK-2细胞中,随缺氧刺激时间延长,MALAT1表达逐渐升高,而miR-100-3p表达逐渐减低;缺氧诱导HK-2细胞72 h后,慢病毒感染下调MALAT1水平,miR-100-3p水平升高,同时ECD表达增加、COL4A1和α-SMA表达降低;缺氧诱导HK-2细胞72 h后,转染下调miR-100-3p水平,MALAT1水平无显著变化,miR-100-3p水平降低,ECD表达降低,COL4A1和α-SMA表达增加;体内实验:与对照组相比,UUO动物模型组MALAT1表达显著升高,而miR-100-3p表达明显降低; AAV组与3周组比较,ECD表达显著升高,而α-SMA表达显著降低。结论 MALAT1可通过负向调控miR-100-3p,进而促进COL4A1表达,促进缺氧诱导的HK-2细胞EMT,并且可以促进UUO肾病小鼠肾脏纤维化。

血清Gas6和TSP-1水平与糖尿病视网膜病变的相关性研究

目的探讨血清生长停滞特异基因6(Growth arrest specific gene 6,Gas6)和血小板反应蛋白-1(thrombospondin-1,TSP-1)水平与糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)的相关性.方法选择2017年3月~2019年3月在陕西省咸阳市中心医院和西安市第八医院就诊的152例2型糖尿病(Type 2 diabetes mellitus,T2DM)患者作为研究对象,依据DR分型标准分为增殖性糖尿病视网膜病变(proliferative diabetic retinopathy,PDR)组(45例),非增殖性糖尿病视网膜病变(non-proliferative diabetic retinopathy,NPDR)组(52例)和单纯糖尿病(diabetes mellitus,DM)组(55例)。血清Gas6和TSP-1水平采用酶联免疫吸附法检测。空腹血糖(fasting serum glucose,FSG)采用己糖激酶法测定,糖化血红蛋白A1c(glycocsylated A1c,HbA1c)采用液相色谱法检测。采用彩色多普勒超声仪检测视网膜中央动脉收缩期最大流速(peak systolic velocity,PSV)和舒张末期血流速度(end diastolic velocity,EDV),比较分析以上指标的变化与DR的相关性。结果血清Gas6在DM组、NPDR组和PDR组中的水平分别为7.39±1.17,5.14±0.86和4.28±0.79ng/L;而血清TSP-1在三组中的水平分别为163.96±52.41,113.26±41.07和92.38±35.24ng/L,与DM组比较,血清Gas6和TSP-1水平在NPDR组和PDR组中显著降低;其中PDR组降低更显著,以上结果比较的差异均有统计学意义(F=83.37~136.49,均P=000)。在NPDR组和PDR组中,血清Gas6和TSP-1水平分别有正相关性(r=0.819,0.837,P均<0.01)。在NPDR组中,Gas6和TSP-1水平分别与FPG和HbA1c水平有负相关性,而与视网膜中央动脉PSV和EDV有正相关性(rGas6=-0.826,-0.809,0.792,0.778,均P<0.01;rTSP-1=-0.802,-0.789,0.784,0.765,均P<0.01)。在PDR组中,Gas6和TSP-1水平分别与FSG,HbA1c水平有负相关性,而与视网膜中央动脉PSV和EDV有正相关性rGas6=-0.857,-0.839,0.817,0.812,均P<0.01;rTSP-1=-0.838,-0.824,0.813,0.794,均P<0.01)。结论分析Gas6和TSP-1与DR的相关性可以预测DR的发生,评价DR的病情进展,并为DR发病机制的研究提供新的线索。