LeCOP1LIKE基因的克隆、反义构建及微型番茄的转化

本文报告利用EST筛选结合RT-PCR的方法从番茄中克隆了LeCOP1LIKE基因的1 060 bp cDNA片段,并利用其非保守域构建反义RNA表达载体。利用农杆菌介导法,将LeCOP1LIKE基因的反义RNA表达载体转入微型番茄Micro-Tom,获得了10株反义LeCOP1LIKE转基因微型番茄。RT-PCR分析表明其中4个转基因株系中的LeCOP1LIKE表达被显著抑制,并发现抑制LeCOP1LIKE基因的表达导致转基因番茄的株高下降、叶片的叶绿素含量提高、果实中番茄红素含量增加。并且明显抑制转基因种子的发育。这些实验结果证明了LeCOP1LIKE基因为番茄发育过程中光形态建成的抑制因子。

菊花CmTPS1like基因的克隆及表达特性

[目的]本文旨在克隆菊花β-石竹烯合成酶同源基因(CmTPS 1like)并探讨其参与蚜虫取食和茉莉酸甲酯(MeJA)处理应答表达的机制。[方法]以菊花‘神马’为试验材料,采用高保真PCR及染色体位移法分别克隆CmTPS 1like基因全长及上游启动子序列,并采用RT-qPCR分析CmTPS 1like基因的组织特异性表达以及响应蚜虫取食和MeJA处理的表达模式。[结果]CmTPS 1like基因开放阅读框(ORF)共有1644个碱基,编码548个氨基酸,且与菊科植物野菊同源性最高(95.26%)。CmTPS 1like基因上游启动子区包括2个MeJA响应元件、5个MYC结合元件、2个MYB结合元件、5个光响应元件等。CmTPS 1like基因在茎中表达量最高,叶和根中表达量次之,花中表达量最低。蚜虫取食12和24 h后,菊花叶片中CmTPS 1like基因的表达水平上调。随着MeJA处理时间的增加(3~24 h),CmTPS 1like基因被持续诱导表达。[结论]CmTPS 1like基因在菊花‘神马’茎中表达量最高,其表达受蚜虫取食和MeJA处理的影响。