人RIP2基因启动子绿色荧光蛋白表达载体的构建与鉴定

目的:构建人RIP2基因启动子的绿色荧光蛋白表达载体。方法:根据特定限制性内切酶位点,以人基因组DNA为模板,PCR扩增含人RIP2基因启动子不同长度2段序列,构建含人RIP2基因启动子驱动的绿色荧光蛋白载体pEGFP-C2-RIP2(750 bp)wt、pEGFP-C2-RIP2(941 bp)wt,用VspⅠ和NheⅠ双酶切鉴定重组质粒,进行DNA序列分析,重组质粒经阳离子聚合物JetPeiTM介导转染HEK293细胞48 h后观察。结果:酶切鉴定和序列测定证实目的基因已插入重组质粒;细胞转染结果表明,重组质粒转染HEK293细胞均能表达绿色荧光,其中构建的pEGFP-C2-RIP2(750 bp)wt重组质粒绿色荧光表达强于pEGFP-C2-RIP2(941 bp)wt。结论:成功构建2段不同长度的人RIP2基因启动子绿色荧光蛋白表达载体。

心力衰竭家兔心肌细胞中RIP2蛋白表达异常研究

目的研究家兔心肌细胞中受体相互作用蛋白2(RIP2)在容量负荷联合压力负荷产生的心力衰竭(HF)中的表达变化。方法 20只新西兰大耳白兔使用随机数表法分为对照组(Sham组,n=10)和心力衰竭组(HF组,n=10)。Sham组仅行假手术,HF组经颈动脉刺破主动脉瓣增加心脏容量负荷,2周后缩窄腹主动脉增加心脏压力负荷。2个月造模结束后家兔均行心脏超声检测心脏结构及心功能,称量体质量(BW)、心脏体质量(HW)及肺脏体质量(LW),左室游离壁组织做成石蜡切片后行HE及胶原PSR染色,RIP2蛋白免疫组化染色。结果与Sham组比较,HF组家兔心脏室壁厚度增加[HW/BW:(2.25±0.31)vs(4.06±0.59)],心腔扩大[LVEDD:(1.12±0.09)cm vs(1.72±0.21)cm],心功能减低[EF:(72.34±6.89)%vs(40.75±7.92)%],差异有统计学意义(P<0.05),免疫组化中RIP2在心肌细胞内的褐色颗粒减少。结论心力衰竭家兔心肌细胞中RIP2蛋白表达减少。

白藜芦醇调控NF-κB/RIP2信号缓解大鼠膀胱癌的作用

目的研究白藜芦醇(Resveratrol,RES)通过调节NF-κB/RIP2信号通路来治疗和缓解大鼠膀胱癌的保护作用。方法大鼠构建膀胱癌模型后,白藜芦醇(20 mg/kg)和生理盐水连续灌胃14 d。HE染色法观察膀胱组织形态;Western blot法和实时PCR检测NF-κB、RIP2、Caspase 3和Bcl-2蛋白含量和mRNA含量的表达。结果与对照组相比,模型组和实验组大鼠NF-κB、RIP2和Caspase 3 m RNA和蛋白含量显著升高,Bcl-2 m RNA和蛋白含量显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,实验组大鼠NF-κB、RIP2和Caspase 3 m RNA和蛋白含量显著降低,Bcl-2 m RNA和蛋白含量显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 b白藜芦醇能够有效缓解和抑制膀胱癌细胞的生长,且NF-κB/R1P2信号通路在此过程中发挥重要作用。

Foot-and-Mouth Disease Virus Inhibits RIP2 Protein Expression to Promote Viral Replication

Receptors interaction protein 2(RIP2)is a specific adaptor molecule in the downstream of NOD2.The role of RIP2 during foot-and-mouth disease virus(FMDV)infection remains unknown.Here,our results showed that RIP2 inhibited FMDV replication and played an important role in the activation of IFN-βand NF-κB signal pathways during FMDV infection.FMDV infection triggered RIP2 transcription,while it reduced the expression of RIP2 protein.Detailed analysis showed that FMDV 2B,2C,3C^(pro),and L^(pro) proteins were responsible for inducing the reduction of RIP2 protein.3C^(pro) and L^(pro) are viral proteinases that can induce the cleavage or reduction of many host proteins and block host protein synthesis.The carboxyl terminal 105-C114 and 135-C144 regions of 2B were essential for reduction of RIP2.Our results also showed that the N terminal 1-61 region of 2C were essential for the reduction of RIP2.The 2C-induced reduction of RIP2 was dependent on inducing the reduction of poly(A)-binding protein 1(PABPC1).The interaction between RIP2 and 2C was observed in the context of viral infection,and the residues 1-61 were required for the interaction.These data clarify novel mechanisms of reduction of RIP2 mediated by FMDV.

肺曲菌病患者外周血中NLRP3-RIP2-NF-κB信号通路的表达及意义

目的:研究NLRP3-RIP2-NF-κB信号通路在肺曲菌病患者外周血中的表达水平,及其介导炎症反应的作用机制。方法:选取2016年5月~2019年10月收治的肺曲菌病患者62例为研究对象,分为侵袭性肺曲霉菌病组(IPA组)24例和非侵袭性肺曲霉菌病组(NIPA组)38例,并选取同期20例非真菌感染者作为对照组。采用RT-PCR法检测三组NLRP3、RIP2、NF-κB mRNA表达水平;Western Blot法检测NLRP3、RIP2、NF-κB蛋白水平;ELISA法检测炎症介质hs-CRP、IL-6水平,对三组上述指标进行比较,并采用Spearman相关性分析分析NLRP3 mRNA与RIP2、NF-κB、IL-6、hs-CRP之间的相关性。结果:(1)IPA组、NIPA组NLRP3、RIP2、NF-κB mRNA表达水平均高于对照组,且IPA组高于NIPA组(P<0.05)。(2)IPA组、NIPA组NLRP3、RIP2、NF-κB蛋白表达水平均高于对照组,且IPA组高于NIPA组(P<0.05)。(3)IPA组、NIPA组IL-6、hs-CRP水平均高于对照组,且IPA组高于NIPA组(P<0.05)。(4)相关性分析发现外周血中NLRP3 mRNA水平与下游基因RIP2、NF-κB mRNA水平呈正相关(相关指数r=0.676,P<0.001;r=0.513,P<0.001);与炎症介质IL-6、hs-CRP及NLRP3水平呈正相关(相关指数r=0.467,P<0.001;r=0.621,P<0.001)。结论:肺曲菌病患者外周血中NLRP3、RIP2、NF-κB mRNA和蛋白表达均升高,NLRP3可能通过RIP2依赖的NF-κB信号通道介导肺曲菌病患者致炎过程。