2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)在支原体培养中的应用研究

为了分析细菌培养指示剂2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)在支原体培养中的应用,笔者将牛支原体、丝状支原体山羊亚种、山羊支原体山羊肺炎亚种、绵羊肺炎支原体、鸡毒支原体、肺炎支原体分别接种于含有TTC的改良Thiaucourt’s液体培养基(TTC-MTB)和改良Thiaucourt’s固体培养基(TTC-MTA)中,同时以常规酚红指示剂培养基作为对照,观察支原体在2种培养基中的生长情况,并筛选TTC在培养基中的最适指示浓度。结果显示,与常规酚红指示剂相比较,TTC有更为灵敏的培养指示效果;在固体培养基中,TTC指示的支原体红色菌落更有利于菌落的计数及形态的观察;TTC的最佳使用浓度为0.2 mg/mL。本研究可为支原体培养和优化疫苗生产工艺提供参考。

^(131)I标记番泻苷A在正常小鼠体内分布和评价心肌活性研究

采用Iodogen法标记番泻苷A得到131I标记番泻苷A溶液,并研究131I标记番泻苷A在小鼠体内分布和用于检测坏死心肌细胞的可行性。将标记物静脉注射到正常小鼠体内,分别在给药4、24、48h后处死,测定标记物在主要脏器的分布。采用结扎左冠状动脉前降支法建立大鼠急性心肌梗死模型,考察131I标记番泻苷A给药24h后,在主要脏器、梗死心肌上分布,并采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色和磷屏自显影对心脏切片进行组织学分析。结果显示:131I标记番泻苷A在小鼠血中清除较快,肾脏的放射性摄取高。131I标记番泻苷A主要分布在大鼠的梗死心肌区域,梗死心肌与正常心肌放射性摄取比为11.9。TTC染色和磷屏自显影对比证明,131I标记番泻苷A对坏死心肌具有较强靶向性。结果表明,131I标记番泻苷A能选择性的在大鼠坏死心肌区域聚集,在心肌梗死诊断方面具有较好的开发前景。

TTC-脱氢酶还原法测定铜绿微囊藻活性

利用氯化三苯基四氮唑（TTC）-脱氢酶还原法定量地测定了铜绿微囊藻细胞的活性,并对影响活性测定的因素进行了分析与研究.结果显示,TTC浓度大于0.6%时会抑制酶活性,最适TTC浓度为0.2%;脱氢酶还原反应在Tris-HCl缓冲液中能正常进行,而在磷酸盐缓冲液中受到抑制,最适pH值为7.5-8.0;培养时间和培养温度对TTC脱氢酶还原反应的影响较大,最适培养时间为8-16h,最适培养温度为30-35℃;反应不需加入非离子去垢剂,吐温20和曲拉通X-100对脱氢酶反应会产生较强抑制作用.TTC还原所生成的三苯基甲臢（TPF）可采用50%乙醇提取.研究显示TTC-脱氢酶还原法可以很好地进行藻细胞活性定量化测定.

小鼠脑片Formazan定量测量方法评价缺血性损伤及神经保护作用

目的 建立一种定量测量 2 ,3,5 三苯基四氮唑(TTC)红色还原产物formazan的方法 ,用于评估离体脑片缺血性损伤以及依达拉奉和ONO 10 78的神经保护作用。方法 以TTC为底物在小鼠脑片生物合成formazan标准品 ,并进行分离、纯化和鉴定。小鼠脑片以缺氧缺糖 (OGD)方法诱导损伤 ,用分光光度法在 4 90nm处测量皮质和纹状体formazan合成量。依达拉奉和ONO 10 78加入培养液 ,观察其神经保护作用。结果 合成并纯化了formazan标准品 ,其纯度为 0 993,线性测量范围在 0 0 5～ 1g·L-1。OGD减少formazan合成 ,与处理时间有依赖性。依达拉奉 (0 0 1～ 1μmol·L-1)抑制OGD诱导的formazan合成减少 ,而ONO 10 78无作用。结论 定量测量formazan是一种评价离体脑片损伤及药物神经保护作用的有用方法。

紫孢侧耳子实体组织的TTC─脱氢酶活性

本文报道紫孢侧耳（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓｓｏｐｉｄｕｓ）子实体发育过程中，菌褶组织中的ＴＴＣ─脱氢酶活性随着成熟度的增加逐渐增强，其它各结构组织中的ＴＴＣ─脱氢酶活性逐渐降低。在子实体发育的幼小阶段，菌柄、菌柄与菌盖之间组织的脱氢酶活性高于菌褶和菌肉组织中的酶活。子实体的周边和表皮组织（菌盖直径在５ｃｍ以上）中的脱氢酶活性均高于其内部各结构组织中的酶活。

TTC-脱氢酶还原法测定螺旋藻细胞活性的条件优化

为确定氯化三苯基四氮唑（TTC）-脱氢酶还原法测定螺旋藻细胞活性的最优条件,首先通过单因素实验对影响藻细胞活性测定的TTC质量分数、缓冲液p H、提取剂（乙醇）体积分数、培养时间、培养温度进行分析,选定各因素的变化范围,再利用正交试验设计方法,在藻细胞活性测定的最适培养温度下,对TTC质量分数、缓冲液p H、提取剂体积分数、培养时间进行3水平优化试验。最后确定优化的TTC-脱氢酶还原法测定螺旋藻细胞活性的条件为TTC质量分数0.1%、缓冲液p H 8.0~8.5、乙醇体积分数60%、培养时间5 h、培养温度35℃。在此条件下所测藻细胞活性最高,为螺旋藻细胞活性的评价提供了一定参考。

Determination of drought tolerance using root activities in Robinia pseudoacada 'Idaho' transformed with mtl-D gene

Idaho locust （Robinia pseudoacacia ‘Idaho＇） is an exotic multi-purpose tree used in landscaping, soil and water conserva- tion, fodder sources and others. To improve its drought tolerance for reclaiming arid land, five lines of transformed mtl-D gene, as osmotic regulator in plant cells, have been selected and managed to determine their drought tolerance under experimental conditions. Qualitative and quantitative variables of transformed plants were studied. The critical value of drought tolerance was determined by detecting the 2,3,5-triphenyl tetrazolium chloride （TTC） reductants in roots and soil water content （SWC）. The critical value for drought tolerance was SWC 6% while for the control plants the critical SWC was 8%; a moderate level of SWC is 13% and the highest SWC for plant endurance was 18%. The method proved to be reliable and sensitive in the evaluation of drought tolerance for forest trees.

当归内酯治疗大鼠局灶性脑缺血的作用机制

目的观察当归内酯对局灶性脑缺血大鼠的治疗,并探讨其作用机制。方法线栓法堵塞大脑中动脉起始处,造成大鼠局灶性脑缺血(MCAO),缺血2 h后行神经功能评分。随机将模型大鼠分为当归内酯高、低剂量组和模型组,于再灌04、h时分别灌服受试药物80、20 mg.kg-1或等体积溶媒;假手术组同时灌服等体积溶媒。再灌24 h,各组大鼠再行神经功能评分,经TTC染色法测定脑组织梗死面积,免疫组化方法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在脑组织中的表达,分光光度法测定脑组织中iNOS活性及NO含量。结果当归内酯能够显著减小MCAO所致大鼠的脑梗死面积(P<0.01),明显改善MCAO大鼠的神经症状(P<0.01),降低缺血脑组织中iNOS的表达量、酶活性以及NO水平(P<0.05或P<0.01)。结论当归内酯对大鼠局部脑缺血损伤具有明显的保护作用,其机制可能与降低缺血脑组织中iNOS表达量及其酶活性、抑制NO的细胞毒有关。

不同播种量对甘肃礼县掌叶大黄育苗质量的影响

通过在甘肃礼县采收三年生掌叶大黄种株种子并采用不同播种量(35,45,55,65,75和85kg/hm2)育苗,育苗结束后测定苗栽质量指标,移栽定植到大田后定期测定成活率,旨在揭示播种量对掌叶大黄苗栽质量的影响,为其规范化栽培提供依据。结果表明,在甘肃礼县育苗时种子播种量对掌叶大黄育苗质量具有极显著影响,在35kg/hm2最低播种量基础上,随着播种量的增大育成苗栽数持续增多,苗栽产量先显著提高后下降,但苗栽根长、根粗、单苗重和根系TTC还原强度等个体质量指标均呈降低趋势,播种量为65kg/hm2时苗栽产量最高,单苗鲜重和根系TTC还原强度减小程度较轻,苗栽综合指标优异,生长健壮,大小适中,产苗数多,移栽成活率高,说明从育苗质量和育苗效益综合考虑,甘肃礼县掌叶大黄育苗适宜种子播种量为65kg/hm2。

氯化三苯四氮唑校正纸片扩散法检测天然抗菌成分的误差

目的:对现行纸片扩散法(K-B法)检测天然抗菌成分存在显著误差的原因进行分析,提出改进方法。方法:采用氯化三苯四氮唑(TTC)对指示菌显色、分析天然产物乙醇浸膏中抗菌成分的极性、样品在平板培养前适当扩散等方法,对K-B法检测天然抗菌成分存在显著误差的原因进行了研究。结果:天然产物中存在中极性、弱极性甚至非极性抗菌成分,在培养基中扩散较慢,现行K-B法以透明抑菌圈为判读抗菌活性依据,会低估样品抗菌活性,甚至出现假阴性结果,造成漏筛。以不能被TTC显色的指示菌范围和透明抑菌圈之和来判读天然产物抗菌活性,提高了K-B法检测天然抗菌成分的准确性和可靠性。结论:现行K-B法不能直接应用于由有机溶剂提取的天然抗菌成分的活性检测,TTC显色K-B法可有效消除由样品扩散速度较慢引起的显著误差。

硫酸黏菌素预混剂理化性质及抗菌活性检测和分析

对不同厂家10％硫酸黏菌素预混剂产品，分别用常规（如药典中微生物检测、HPLC、密度等）及非常规（最低抑菌浓度、96孔微管最低抑菌浓度、灰分含量、灼烧残渣、显微拍照等）方法进行区别和分析，为饲料厂用户建立和健全评判硫酸黏菌素预混剂的方法提供参考依据。不同厂家的10％硫酸黏菌素预混剂，在理化性质和活性含量上都存在一定的差异。

氯化三苯四氮唑染色后梗死灶定量分析方法

缺血性脑血管病以发病、死亡、致残率高而极大地危害着人类健康。控制梗死灶的大小是治疗该病的预期目标以及评判治疗方法优劣的重要指标。准确、客观地测定梗死灶部位和大小是影响实验结果的关键问题,而梗死灶的定量分析则是影响实验结论及其可靠程度的核心问题。本文以氯化三苯四氮唑(TTC)染色法标记后常用的测量和计算梗死程度的方法为例,对近几年国内外梗死灶定量分析常用方法进行探讨。从TTC用于染色的原理、准备工作、脑梗死体积常用测量计算方法等方面进行系统的归纳总结,以期为研究工作者根据实验目的、实验室条件等选择适当方法,以获得真实可靠的大脑梗死程度提供参考。