新的核苷衍生物N^2,N_3-亚乙烯基腺嘌呤核苷的合成

描述了一条有效的合成新的荧光核苷衍生物N2 ,N3 亚乙烯基腺苷的合成路线 .实验中首先通过 6步制备了N2 ,N3 亚乙烯基鸟苷 ,然后经过氯化 ,再氨化得到标题化合物 .标题化合物和新的中间化合物的结构分别通过1HNMR ,MS和HRMS进行了确证 ,标题化合物的荧光性质初步得到证实 .

高效液相色谱法测定大鼠血浆、尿和肝匀浆中的2′,3′-二脱氢-2′,3′-二脱氧核糖-2-氨基-6-环丙胺基嘌呤核苷(英文)

目的 建立高效液相法测定大鼠血浆、尿和肝匀浆中 2′,3′ 二脱氢 2′,3′ 二脱氧核糖 2 氨基 6 环丙胺基嘌呤核苷 (Cyclo D4G ,D4G前药 )的简单而特异、适合于研究其体内药物代谢动力学的方法。方法 采用高效液相色谱法 ,C 18Hy persilODS柱 ,流动相为 7% (v v)乙腈的磷酸盐缓冲液 (pH 7 4 0 ) ,紫外检测波长为 2 83nm。结果 该方法的线性范围为0 5 - 80 μg·mL- 1 ,提取平均回收率 10 0 1% ,精确度为 99 4 % ,日内和日间差均小于 9 0 %。结论 Cyclo D4G在大鼠血浆中稳定 ,在肝匀浆中

2’-脱氧腺苷的合成

以腺嘌呤(Ⅰ)和1-乙酰氧基-3,5-二(对甲基苯甲酰基)-2-脱氧核糖(Ⅱ)为原料,先将腺嘌呤进行硅醚保护,然后与Ⅱ催化缩合生成带保护基的2’-脱氧腺苷,脱保护基,得到-βD-2’-脱氧腺苷。考察了反应物(Ⅰ)和(Ⅱ)的摩尔比、催化剂的用量及反应温度对2’-脱氧腺苷收率的影响。结果表明,最佳反应条件为:(Ⅰ)∶(Ⅱ)(摩尔比)=1∶1,催化剂用量为0.54%,反应温度为20℃时,2’-脱氧腺苷的总收率可达65%。

PPAR-γ2基因-C34G、NADPH氧化酶p22phox亚基基因-C242T多态性与幽门螺杆菌感染的交互作用和食管鳞状细胞癌的关系

目的探讨过氧化物酶体增殖因子活化受体-γ2（PPAR-γ2）基因-C34G、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）氧化酶p22phox亚基基因-C242T多态性与幽门螺杆菌（H.Pylori）感染的交互作用和食管鳞状细胞癌（ESCC）的关系。方法选择我院2010年5月~2015年3月收治的ESCCBroderⅠ级、BroderⅡ级和BroderⅢ级患者各200例,以200例健康体检者作为对照组,以上述各组患者的外周血白细胞为样本,利用PCR-RFLP检测PPAR-γ2基因-C34G和NADPH氧化酶p22phox亚基基因-C242T多态性。采用14C-UBT检测受检者H.Pylori与14C结合的每分钟衰变数（DPM）以判断H.Pylori感染情况。采用非条件Logistic回归对-C34G、-C242T多态性与H.Pylori感染的交互作用进行分析。结果 -C34G（CG）和-C34G（GG）基因型者患ESCC的风险均显著增加,-C242T（CT）和-C242T（TT）基因型者患ESCC的风险也显著增加。基因突变的协同分析发现-C34G（GG）和-C242T（TT）基因型在ESCC发生、发展存在正向的交互作用,另外在-C34G（CG）和-C242T（TT）之间、-C34G（CG）和-C242T（CT）之间及-C34G（GG）和-C242T（CT）之间均存在正向交互作用（γ均大于1）。H.Pylori感染者患ESCC的风险性均明显增高。H.Pylori感染与-C34G（CG）、-C34G（GG）、-C242T（CT）和-C242T（TT）基因型与均有正向交互作用（γ均大于1）。结论携带-C34G（CG）、-C34G（GG）、-C242T（CT）和-C242T（TT）基因型的个体属ESCC高危险人群,这些基因型和H.Pylori感染的交互作用促进了ESCC的发生、发展,应当采取根除H.Pylori或调控基因表达的措施以达到有效预防LSCC的目的。

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶2抑制剂通过影响微小RNA-155/白细胞介素-10保护脊髓损伤大鼠

目的探讨烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶2(NOX2)抑制剂对脊髓损伤大鼠的保护作用及其机制。方法将购自北京中国科学院的SD大鼠随机分为假手术组、对照组和观察组,观察组和对照组大鼠均接受脊髓采用脊髓打击器损伤脊髓,观察组大鼠采用NOX2抑制剂(gp91ds-tat)处理,术后检测各组大鼠肢体运动功能,5周后取脊髓组织,检测其中NOX2、炎性因子及微小RNA(miRNA,miR)-155含量和小胶质细胞/巨噬细胞浸润情况,组间比较采用方差检验和t检验。结果在术后第2~5周,与对照组脊髓损伤运动功能(BBB)评分比较(5.54±1.10、6.24±1.96、9.56±1.02、10.58±1.77),观察组的BBB评分均显著升高(12.12±1.98、15.14±2.25、16.77±2.14、17.05±1.87),差异有统计学意义(t=8.941,9.252,9.115,7.035,P<0.05)。观察组大鼠脊髓组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、NOX2相对表达量显著少于对照组(t=9.024、11.247、12.846、13.237,P<0.05),白介素-10(IL-10)、精氨酸酶1(Arg1)、类几丁质酶3样分子3(Ym1)相对表达量显著多于对照组(t=13.294、8.356、15.389,P<0.05)。观察组脊柱组织中miR-155含量均显著高于对照组(t=7.363,P<0.05)。而观察组大鼠在损伤处和未损伤处M1、M2型细胞比例与假手术组差异均无统计学意义(F=1.035,P>0.05)。结论NOX2抑制剂可以通过调节miR-155/IL-10信号通路调节炎性反应保护受损脊髓。

大鼠液压冲击脑损伤Nrf2、HO-1和NQO-1动态表达变化及意义

目的探讨大鼠液压冲击伤后水肿脑组织核因子2相关因子2(nuclear factor erythroid-2-related factor 2,Nrf2)、血红素氧化酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)和磷酸酰胺腺嘌呤二核苷酸醌氧化还原酶-1(NADPH quinineoxidoreductase-1,NQO-1)的表达变化及其意义。方法成年雄性SD大鼠56只制作液压冲击颅脑损伤模型,术后1 h、6 h、12 h、24 h、3 d、7 d用干湿质量法测定脑组织含水量,Western blot测定Nrf2胞浆、胞核蛋白以及HO-1、NQO-1蛋白;用实时荧光定量PCR测定Nrf2 mRNA表达。结果自冲击伤后6 h,脑组织含水量开始增加,24h达高峰,持续至3 d,然后开始下降(P<0.05)。组织学观察印证了脑水肿趋势。Western blot检测结果显示胞浆Nrf2蛋白于伤后12 h开始持续降低,而胞核Nrf2蛋白则于1h开始升高,24 h达到高峰,3 d时降低,7 d后明显降低,但仍高于NC组(P<0.05)。HO-1和NQO-1蛋白表达与胞核Nrf2蛋白趋势一致。实时荧光定量PCR显示TBI组术后各时间点Nrf2 mRNA表达水平无明显变化(P>0.05)。结论液压冲击伤后出现核因子Nrf2转位激活,可能通过上调HO-1、NQO-1蛋白表达发挥神经保护作用。

涤痰汤对血管性痴呆大鼠海马NOX2/ROS通路、GSH、HO-1表达的影响

目的观察涤痰汤对血管性痴呆(VD)大鼠海马还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(NOX)2/活性氧(ROS)通路、血红素氧合酶(HO)-1、谷胱甘肽(GSH)的影响,探讨涤痰汤治疗VD的作用机制。方法40只大鼠随机分为假手术组、模型组、涤痰汤高剂量组、涤痰汤低剂量组,每组10只,采用改良双侧颈总动脉永久阻断法(2-VO)制备VD大鼠模型,涤痰汤高剂量组、涤痰汤低剂量组分别以9.71g/kg、4.85g/kg涤痰汤灌胃,假手术组、模型组给予等量生理盐水,每日1次,给药4w后,Morris水迷宫实验进行大鼠行为学检测,HE染色观察大鼠海马组织病理学变化,Western印迹法检测海马组织HO-1蛋白的表达,免疫组织化学法检测NOX2表达的变化,生化试剂盒测定海马组织ROS、GSH的含量。结果与假手术组比较,模型组大鼠空间学习记忆能力显著下降(P<0.01);海马区神经元数量减少,可见坏死的神经元,细胞形态不规则,染色不均匀,细胞边界模糊,细胞膜、核膜不清晰,细胞核固缩;NOX2、HO-1表达量及ROS含量明显增高(P<0.01),GSH含量明显降低(P<0.01)。与模型组比较,涤痰汤高剂量组、涤痰汤低剂量组大鼠空间学习记忆能力改善(P<0.01,P<0.05);海马神经元数量增多,细胞形态较规则,染色较均匀,细胞边界较清晰;NOX2表达量及ROS含量显著降低(P<0.01,P<0.05),HO-1表达量及GSH含量显著升高(P<0.01,P<0.05);与涤痰汤高剂量组比较,涤痰汤低剂量组大鼠空间学习记忆能力显著下降(P<0.05);NOX2表达量及ROS含量显著升高(P<0.05),HO-1表达量及GSH含量显著降低(P<0.05)。结论涤痰汤可能通过调节VD大鼠海马区氧化应激,保护海马神经元,改善大鼠空间学习记忆能力。

8-异前列腺素F2α及烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化酶p22phox亚基C242T基因多态性与2型糖尿病大血管病变的相关性

目的：探讨8-异前列腺素F2α（8-epi-prostaglandin F2 alpha，8-isoPGF2α）及烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADPH）氧化酶P22phox亚基C242T基因多态性与河北省汉族人群2型糖尿病（T2DM）大血管病变的关系。方法选取2012年7月至2013年7月在河北医科大学第三医院内分泌科住院的215例T2DM患者（其中单纯T2DM组110例，T2DM大血管病变组105例）和100名健康对照者为研究对象，采集其体质指数（BMI）、收缩压（SBP）、舒张压（DBP）、踝肱指数（ABI）等一般情况，应用全自动生化分析仪测定空腹血糖（FBG）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C），在德国拜耳DCA2000仪器上测量糖化血红蛋白（HbA1c）；采用酶联免疫吸附法对8-isoPGF2α水平进行测定，同时用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性检测受试者p22phox亚基C242T基因多态性。采用方差分析、相关分析和logistic逐步回归法进行统计学分析。结果T2DM大血管病变组8-isoPGF2α水平明显高于单纯T2DM组[（49±24）比（33±13）ng/L，t=－5.856，P〈0.05]和正常对照组[（49±24）比（28±13）ng/L，t=－7.780，P〈0.05]。8-iso-PGF2α与SBP、DBP、BMI、TC、TG、LDL-C、FBG及HbA1c呈显著正相关（r=0.247、0.269、0.201、0.134、0.177、0.233、0.255、0.226，均P〈0.05），与ABI和HDL-C呈显著负相关（r=－0.382、－0.195，均P〈0.05）。T2DM大血管病变组T等位基因及CT＋TT基因型频率均显著高于单纯T2DM组和对照组（χ^2值分别为6.67、4.08、14.01、10.81，均P〈0.05）。CT＋TT型大血管病变发生率高于CC型（χ^2=10.06，P〈0.01）。多元回归分析显示BMI、LDL-C及8-iso-PGF2α是大血管病变的独立危险因素（β=0.913、2.787、0.835）。结论单纯T2DM以及T2DM大血管病变者体内存在氧化应激，但T2DM大血管病变者更加明显；NADPH氧化酶p22phox亚基C242T多态性可能与T2DM大血管病变的易患性无关。

血清Nox2、ATG7水平对新生儿窒息心肌损伤的评估价值

目的探讨自噬相关基因-7(ATG7)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶2(Nox2)在新生儿窒息病儿血清中的表达及早期诊断价值。方法选取2019年1月至2021年12月在郑州大学第三附属医院产科分娩的75例新生儿窒息病儿为研究组,根据是否合并心肌损伤将病儿分为窒息心肌损伤组31例,窒息非心肌损伤组44例。同期选择50例健康足月新生儿为对照组。收集一般资料,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)测量血清ATG7水平,采用蛋白质印迹法检测Nox2水平,以Nox2/β肌动蛋白的灰度比值为Nox2表达量;采用Pearson法分析ATG7、Nox2表达的相关性及与各指标的相关性;利用受试者操作特征曲线(ROC曲线)评价Nox2、ATG7水平对新生儿窒息心肌损伤的诊断价值。结果与对照组[0.26±0.06、(4.83±0.61)ng/L]比较,新生儿窒息病儿血清Nox2(0.65±0.09)、ATG7[(21.04±3.66)ng/L]表达水平升高,且窒息心肌损伤组[0.85±0.11、(24.23±3.98)ng/L]病儿血清中Nox2、ATG7水平高于窒息非心肌损伤组[0.51±0.08、(18.80±3.43)ng/L](P<0.05);窒息心肌损伤病儿血清中Nox2、ATG7表达呈显著正相关(r=0.57,P<0.05);病儿血清中Nox2和ATG7表达与肌酸激酶同工酶(CK-MB)、缺血修饰白蛋白(IMA)、超敏C-反应蛋白(hs-CRP)、氨基末端脑钠肽前体(NT-ProBNP)、肌钙蛋白I(cTnI)、肌红蛋白表达均呈正相关(P<0.05);ROC曲线结果显示,血清Nox2、ATG7水平预测新生儿窒息合并心肌损伤的曲线下面积(AUC)及其95%CI分别为0.91(0.82,0.96)、0.89(0.80,0.95),对应的灵敏度分别为83.87%、87.10%,特异度分别为84.09%、75.00%,二者联合预测的AUC及其95%CI为0.92(0.84,0.97),灵敏度为90.32%,特异度为81.82%。结论窒息心肌损伤病儿血清中Nox2、ATG7表达均上调,二者联合检测对窒息心肌损伤有一定的诊断价值。

嘌呤能离子通道型受体7及其在周围神经再生中的作用

在周围神经系统的神经节内,神经元胞体被周围的卫星胶质细胞包裹形成神经结构功能单元,而嘌呤能离子通道型受体7(P2X7R)是卫星胶质细胞膜上的一个腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)门控的非选择性离子通道,有研究表明,P2X7R可促进细胞增殖和促进神经轴突生长,也有研究报道,其被激活后可导致环氧化酶2(COX-2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)等炎症介质的释放,介导细胞的损伤,因此P2X7R的功能尚存争议。本文就P2X7R的结构、功能以及在周围神经系统中作用的研究方法做一简单综述,为研究P2X7R在神经再生中的具体功能提供方法学支持。

嘌吟能离子通道型受体7介导的帕金森大鼠认知功能障碍

目的探讨嘌呤能离子通道型受体7(P2X7R)在帕金森(PD)大鼠认知功能障碍中的作用。方法成年大鼠90只实验分为5组,每组6只大鼠,3个重复,运用6-羟基多巴胺(6-OHDA)制备PD大鼠模型。向PD大鼠注射P2X7R激动剂2,3-腺苷5-三磷酸三乙铵盐(BzATP)和拮抗剂考马斯亮蓝G(CBBG)检测大鼠在水迷宫中的学习记忆能力和疼痛反应,Real-time PCR和Western blotting检测海马组织P2X7的表达情况。结果与正常大鼠相比,PD大鼠学习速度缓慢,记忆能力弱,CBBG提高了PD大鼠的学习记忆能力,BzATP使PD大鼠的学习记忆能力减退;海马组织Real-time PCR结果显示,与对照组相比,P2X7R在海马组织中mRNA表达量最高,CBBG组P2X7R表达量下调,BzATP组P2X7R表达量上调;对P2X7R进行Western blotting检测,与PD组相比,BzATP组P2X7蛋白表达量显著升高,CBBG组P2X7蛋白表达量较低。结论PD大鼠存在认知功能障碍,CBBG可改善PD大鼠的学习记忆功能,BzATP可抑制PD大鼠的学习记忆功能。

高迁移率族蛋白B-1和NADPH氧化酶衍生活性氧对糖尿病视网膜病变大鼠视网膜电图波幅和玻璃体通透性的影响

目的:探究高迁移率族蛋白B-1(HMGB1)和还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶衍生活性氧(ROS)对糖尿病视网膜病变(DR)大鼠视网膜电图波幅和玻璃体通透性的影响及机制。方法:选取40只雄性SD大鼠,根据实验目的将大鼠分为对照组、DR模型组、HMGB1注射组和ROS抑制剂组。使用链脲佐菌素诱导大鼠糖尿病,进而发展DR模型。通过2’-7’-二氯荧光素-二乙酸酯(DCFH-DA)检测大鼠视网膜组织匀浆中ROS的生成。通过蛋白印迹分析视网膜组织中Nox2、HMGB1、Occludin和ZO-1的蛋白表达。通过PCR分析大鼠视网膜组织匀浆中PARP-1和Caspase 3的mRNA表达。通过视网膜电图分析大鼠a波和b波振幅。通过测量FITC-BSA荧光评估大鼠玻璃体通透性。结果:DR模型组和HMGB1注射组较对照组大鼠视网膜ROS水平升高(均P<0.05),ROS抑制剂组较DR模型组和HMGB1注射组ROS水平降低(均P<0.05)。DR模型组和HMGB1注射组较对照组Nox2和HMGB1的蛋白表达升高(均P<0.05),ROS抑制剂组较HMGB1注射组和DR模型组Nox2和HMGB1的蛋白表达降低(均P<0.05)。HMGB1注射组和DR模型组较对照组大鼠视网膜PARP-1和Caspase 3的mRNA表达升高(均P<0.05)。HMGB1注射组和DR模型组较对照组a波和b波振幅减少(均P<0.05),ROS抑制剂组较HMGB1注射组和DR模型组振幅升高(均P<0.05)。HMGB1注射组和DR模型组较对照组Occludin和ZO-1的蛋白表达降低(均P<0.05),ROS抑制剂组较HMGB1注射组和DR模型组Occludin和ZO-1的蛋白表达升高(均P<0.05)。DR模型组和HMGB1注射组较对照组荧光强度升高(P<0.05),ROS抑制剂组较DR模型组和HMGB1注射组荧光强度降低(P<0.05)。结论:糖尿病视网膜组织中HMGB1和Nox衍生的ROS之间存在正反馈,这可能是促进糖尿病诱导的视网膜电图波幅降低和玻璃体通透性增加的机制。

NOX4对高糖代谢乳腺癌细胞侵袭转移能力的作用

利用2-氟[18F-2]脱氧葡萄糖([18 F]fluorodeoxyglucose,18F-FDG)乳腺癌细胞摄取实验筛选高糖酵解率的乳腺癌细胞;采用基因沉默技术,降低细胞烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NOX 4)表达;采用免疫印迹方法检测三组细胞(空白对照组、非特异性siRNA转染组和特异性NOX 4-siRNA转染组)的上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)相关分子HIF-1α和TGF-β表达水平;通过细胞侵袭实验分析三组细胞的侵袭能力差异。结果显示,高侵袭力的MDA-MB-231较低侵袭力的MCF-7乳腺癌细胞系具有高糖酵解率(t=10.52,P<0.05);抑制MDA-MB-231细胞的NOX 4表达,降低了细胞EMT相关因子HIF-1α、TGF-β表达(P均<0.01)与细胞侵袭能力(t=-8.0,P<0.01)。本研究初步证实NOX 4失活能够降低高糖代谢乳腺癌细胞的侵袭转移能力。

二甲双胍通过Nrf2/HO-1/NQO1通路减轻子痫前期大鼠胎盘组织氧化应激损伤

目的:研究二甲双胍通过核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)/磷酸酰胺腺嘌呤二核苷酸醌氧化还原酶1(NQO1)通路减轻子痫前期(PE)大鼠胎盘组织氧化应激损伤的作用。方法:孕鼠随机分为对照组、模型组、二甲双胍组(150 mg·kg^(-1))、ML385组(Nrf2/HO-1通路抑制剂,剂量20 mg·kg^(-1))、二甲双胍+ML385组(剂量分别为150 mg·kg^(-1)、20 mg·kg^(-1))5组,每组12只,除对照组外,其余组通过皮下注射N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)的方法建立PE大鼠模型。按照分组以药物处理后,测定各组大鼠妊娠晚期血压及24 h尿蛋白含量;检测各组大鼠妊娠结局情况,比较其平均子代数目及体重;测定各组大鼠胎盘组织氧化应激因子谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)和外周血炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、干扰素-γ(IFN-γ)水平;检测各组大鼠胎盘组织Nrf2/HO-1/NQO1通路蛋白表达。结果:与对照组相比,模型组大鼠妊娠晚期平均动脉压、24 h尿蛋白含量、胎盘组织MDA水平及外周血炎症因子TNF-α、IL-6、IFN-γ水平明显升高(P<0.05),胎盘组织GSH-Px水平、平均子代数目及体重、Nrf2、HO-1、NQO1蛋白表达明显降低(P<0.05)。与模型组相比,二甲双胍组大鼠妊娠晚期平均动脉压、24h尿蛋白含量、胎盘组织MDA水平及外周血炎症因子TNF-α、IL-6、IFN-γ水平降低(P<0.05),平均子代数目及体重、胎盘组织GSH-Px水平、Nrf2、HO-1、NQO1蛋白表达升高(P<0.05);ML385组大鼠妊娠晚期平均动脉压、24 h尿蛋白含量、胎盘组织MDA水平及外周血炎症因子TNF-α、IL-6、IFN-γ水平升高(P<0.05),平均子代数目及体重、胎盘组织GSH-Px水平、Nrf2、HO-1、NQO1蛋白表达降低(P<0.05)。与二甲双胍+ML385组相比,二甲双胍组大鼠妊娠晚期平均动脉压、24 h尿蛋白含量、胎盘组织MDA水平及外周血炎症因子TNF-α、IL-6及IFN-γ水平降低(P<0.05),平均子代数目及体重、胎盘组织GSH-Px水平、Nrf2、HO-1、NQO1蛋白表达升高(P<0.05);ML385组大鼠妊娠晚期平均动脉压、24 h尿蛋白含量、胎盘组织MDA水平及外周血炎症因子TNF-α、IL-6及IFN-γ水平升高(P<0.05),平均子代数目及体重、胎盘组织GSH-Px水平、Nrf2、HO-1、NQO1蛋白表达降低(P<0.05)。结论:二甲双胍可激活Nrf2/HO-1/NQO1通路,进而降低PE大鼠血压,减轻胎盘组织氧化应激和炎症损伤,改善其妊娠后期高血压及蛋白尿症状,促使子代存活。

大鼠液压冲击脑损伤核因子E2相关因子2-抗氧化反应元件通路的时程表达变化

目的 观察大鼠液压冲击脑损伤核因子E2相关因子2（Nrf2）-抗氧化反应元件（ARE）信号通路及其下游因子血红素氧化酶-1（HO-1） 和磷酸酰胺腺嘌呤二核苷酸醌氧化还原酶-1（NQO-1）时程表达变化.方法 成年雄性SD大鼠56只,制作液压冲击颅脑损伤模型,术后1、6、12、24h、3、7d对大鼠进行神经功能评分,用干湿重法测定脑含水量;Western blot测定胞质、胞核Nrf2蛋白以及HO-1、NQO-1蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）测定Nrf2-mRNA表达.结果 创伤性脑损伤（TBI）组脑含水量于冲击伤后6h开始增加[（78.98±0.12）%],24h达高峰（82.98±0.62）%],3d开始下降[（82.26±0.72）%],神经功能评分趋势与之相反,24h下降至最低值（2.78±0.66）,差异均有统计学意义（F=98.712、78.806,P=0.000）.Western blot证实TBI组胞核Nrf2于1h开始升高（0.82±0.18）,24h达到高峰（1.87±0.82）,3d时降低（1.42±0.55）,而胞质Nrf2自12h开始持续走低（1.14±0.22）,呈相反趋势,差异均有统计学意义（F=11.566、17.928,P=0.001）.HO-1和NQO-1蛋白表达与胞核Nrf2蛋白趋势一致（F=16.175、12.694,P=0.001）.FQ-PCR结果显示TBI组冲击伤后各时间点Nrf2-mRNA表达水平无明显变化（F=0.802,P=0.968）.结论 大鼠脑液压冲击伤Nrf2-ARE通路激活,可能在创伤性颅脑损伤中发挥抗氧化应激损伤作用.

竹叶菜中的核苷类化学成分

目的 :为了开发利用竹叶菜资源 ,对竹叶菜的化学成分进行了研究。方法 :运用硅胶柱层析法分离其化学成分 ,用UV、IR、NMR、MS及X晶体衍射的方法进行结构鉴定。结果 :从甲醇提取物中分离得到 3个核苷类化合物 ,分别鉴定为胸腺嘧啶脱氧核苷 (Ⅰ ) ,腺嘌呤核苷 (Ⅱ ) ,2′ 脱氧腺苷 (Ⅲ )。结论 :首次对竹叶菜的核苷类化学成分进行了报道 。

UFLC-QTRAP-MS/MS法测定绞股蓝中10个核苷类成分

目的:建立UFLC-QTRAP-MS/MS的方法,同时测定不同产地绞股蓝及其商品药材中10个化合物(胸苷、尿苷、腺苷、肌苷、2′-脱氧鸟苷、鸟苷、腺嘌呤、次黄嘌呤、尿嘧啶、鸟嘌呤)的含量。方法:采用XBridge Amide色谱柱(2.1 mm×100 mm,3.5μm),以0.2%甲酸水溶液(A)-0.2%甲酸乙腈溶液(B)为流动相,0.6 m L·min^(-1)流速梯度洗脱,正离子(ESI+)模式下多反应监测(MRM)检测。结果:尿嘧啶、胸苷、尿苷、次黄嘌呤、肌苷、2′-脱氧鸟苷、腺苷、鸟苷、腺嘌呤、鸟嘌呤的线性范围分别为1.97~3 936.00、2.00~200.00、30.48~3 048.00、19.84~1 984.00、10.16~1 016.00、4.95~990.00、19.72~1 972.00、14.70~2 940.00、1.96~196.00、14.76~1 476.00 ng·m L^(-1)(r>0.997 3),平均加样回收率为99.3%~101.3%,含量分别为181.54~1 604.95、0.00~216.45、63.65~1 093.17、3.48~555.12、0.07~215.66、0.00~171.65、0.00~338.63、24.67~966.08、0.37~140.07、14.89~830.79μg·g^(-1),绞股蓝中以尿嘧啶、尿苷、鸟苷、鸟嘌呤含量较高;不同产地及商品药材中10个成分含量有所差异。结论:该方法为绞股蓝药材内在质量的综合评价提供新的科学依据。

高液相色谱在研究人工核酸酶中的应用

目的:用反相高效液相色谱梯度洗脱法测定了用Cu（Ⅱ）组氨酸配合物切割DNA-二核苷酸2’-脱氧腺嘌吟（3’→5’）-2’-脱氧腺嘌呤核苷酸的产物。方法:色谱柱Hypersil BDS C18 150mm×4.6mm;流动相为C:0.2mol·L-1磷酸二氢铵溶液（pH5.5）,B:甲醇-水（3:2）;流速:0.85mL·min-1;梯度为B:0 0→5min;B:0→50％ 5→17min;B,50％→100％17→18min;B:100％19min 停止。紫外检测波长260nm。结果:在本文中,用HPLC检测可得到直接有效的数据。结论:本方法准确、灵敏。

正源负源比较液质联用测定酶解液中脱氧核苷酸含量

目的:建立一种快速灵敏的同时测定DNA酶解液中5′-腺嘌呤脱氧核苷酸(dAMP)、5′-胸腺嘧啶脱氧核苷酸(dT-MP)、5′-鸟嘌呤脱氧核苷酸(dGMP)、5′-胞嘧啶脱氧核苷酸(dCMP)的超高效液相色谱质谱(UPLC-MS)方法。方法:采用UPLC-MS色谱质谱系统,安捷伦ZORBAXSBAq-C18柱(4.6mm×250mm,5μm);以20mmol.L-1醋酸铵缓冲盐溶液(A)-乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱(0～10min,B相从5%→10%;10～11min,B相从10%→90%;11～15min,B相为90%;15～16min,B相从90%→5%;16～18min,B相为5%),流速0.6mL·min-1;在电喷雾正离子模式下,采用多反应监测模式(MRM)选择性监测5′-腺嘌呤脱氧核苷酸(dAMP)(m/z332.1/81.1和332.1/136.2)、5′-胸腺嘧啶脱氧核苷酸(dTMP)(m/z323.1/81.1和323.1/207.2)、5′-鸟嘌呤脱氧核苷酸(dGMP)(m/z348.1/152.1348.1/313.3)和5′-胞嘧啶脱氧核苷酸(dCMP)(m/z308.1/81.1和308.1/112.1)。结果:5′-腺嘌呤脱氧核苷酸(dAMP)、5′-胸腺嘧啶脱氧核苷酸(dTMP)、5′-鸟嘌呤脱氧核苷酸(dGMP)和5′-胞嘧啶脱氧核苷酸(dCMP)的线性范围分别为34.8～1160.0ng.mL-1(r=0.9997),32.8～820.0ng.mL-1(r=0.9997),60.0～1200.0ng.mL-1(r=0.9990),37.6～940.0ng.mL-1(r=0.9998),检出限分别为9.4,8.48,11.43,10.35ng·mL-1;定量限分别为31.35,28.28,38.10,34.50ng·mL-1;样品加标回收率为71.1%～117.2%;日内、日间精密度试验的RSD为0.94%～4.99%。结论:该方法快捷,灵敏度高,专一性强,重复性好,可用于DNA酶解液中4种脱氧核苷酸的分析。

新疆细虫草菌核的膨大弯颈霉菌株SFYT002核苷类成分分析

目的:定量分析膨大弯颈霉菌株SFYT002菌丝体中核苷类成分。方法:本研究从新疆细虫草菌核分离出一株膨大弯颈霉菌株SFYT002,以已知的7种核苷为标准品,并与野生新疆细虫草和冬虫夏草做比较,采用高效液相色谱法(HPLC)对其核苷类成分进行测定。结果:膨大弯颈霉SFYT002菌株含有与冬虫夏草相同的7种核苷类成分,其中该菌株尿嘧啶为75.668μg·g-1,略高于冬虫夏草,为新疆细虫草的4倍左右;肌苷含量达到663.776μg·g-1,为冬虫夏草3倍,为新疆细虫草的27倍之多;腺苷含量114.653μg·g-1,分别为冬虫夏草和新疆细虫草腺苷含量的1/5和2/5左右;尿苷、鸟苷、腺嘌呤含量也接近冬虫夏草,高于新疆细虫草。此外,在膨大弯颈霉SFYT002菌株中检测出虫草素,含量为32.261μg·g-1,但新疆细虫草和冬虫夏草中未检测出虫草素,为虫草素开发提供了一种新的药源。结论:膨大弯颈霉菌株SFYT002核苷类成分含量丰富,具有开发潜力和前景。